解淀粉芽孢杆菌添加前体物发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺制造技术

一种解淀粉芽孢杆菌添加前体物TCA（1,2,4-三氮唑-3-羧甲酰胺）发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺。本发明专利技术首先构建了一个能在解淀粉芽孢杆菌细胞内稳定复制并高效分泌表达嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase）的重组质粒pBSA43-Bs816PNP，并将此质粒转化鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌TA208，得到一株兼具高效生产鸟苷和高效表达嘌呤核苷磷酸化酶这两种特点基因工程菌RBVM（pBSA43-Bs816PNP）。采用该工程菌，以葡萄糖、酵母膏、豆浓、玉米浆、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸亚铁和自来水为原料，添加前体物TCA进行发酵，添加前体物几小时后便可在培养基中检测到较高浓度的利巴韦林。本发明专利技术具有发酵周期短，产量高，糖苷转化率高，工艺简便，成本低，能耗低，污染小等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生化工程领域，涉及一种基因工程菌添加前体物发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的工艺。
技术介绍
利巴韦林(ribavirin)，化学名为1-β _D_呋喃核糖基-1H-1，2，4_三氮唑_3_羧酰胺，别名病毒唑，是一种广谱抗病毒药物，对多种DNA和RNA病毒均有显著抑制作用，在抗病毒临床实践中得到广泛应用。利巴韦林生产方法有化学合成法、发酵法和酶法三类。目前，国内在工业生产上实施的化学合成法占绝大多数，存在副产物多，产率低，操作步骤多，污染严重，成本高等不足。酶法生产利巴韦林由Witkowski等首创，在上个世纪80、90年代发展起来，随后被广泛应用于利巴韦林的生产,但酶法生产利巴韦林的酶源细胞生产成本较高,必须先经过对菌体进行分离后才能投入到反应中，菌体培养过程与利巴韦林生产过程分为两个阶段，不能实现偶联，且需要维持较高的反应温度。添加前体物发酵法(日本公开专利17830/1979)具有原料成本低，来源广泛，能耗低，菌体培养与利巴韦林生产的过程同步进行等优点，但是到目前为止，此法产量较低，仍然处于实验室研究阶段，不能投入到 工业生产当中，其关键原因在于:由于技术瓶颈，目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌添加前体物TCA（1,2,4?三氮唑?3?羧甲酰胺）发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺，即利用自行构建的兼具高效生产核苷和高效表达嘌呤核苷磷酸化酶这两种特点的基因工程菌RBVM（pBSA43?Bs816PNP）通过发酵过程中添加前体物TCA实现发酵法生产利巴韦林，具体工艺包括：A.利用分子生物学技术以鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌TA208作为宿主菌构建兼具高效表达嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase）的基因工程菌RBVM（pBSA43?Bs816PNP）：即利用PCR技术从枯草芽孢杆菌BS168中扩增低分子量嘌呤核苷磷酸化酶编码基因pupG，与经过改造的表达载体pBSA43连接，构...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宁，马跃超，刘莉，徐庆阳，谢希贤，张成林，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：