使用来自细胞的微泡治疗和诊断癌症的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗和/或诊断癌症的方法，该方法使用来自细菌细胞的微泡，其在癌症治疗中提高癌症治疗效果并降低治疗药物的副作用。此外，本发明专利技术提供一种使用负载药物的细菌细胞的微泡来递送用于治疗或诊断疾病的药物，从而有效并且特异地治疗和诊断疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种使用来自细菌细胞的微泡，治疗癌症和/或诊断癌症的方法。特别地，本专利技术涉及一种使用来自细菌细胞的微泡的组分治疗癌症的方法。
技术介绍
在1813年，Vautier报道了在同时患有厌氧细菌产气荚膜梭菌感染引起的气性坏疽的患者中癌症的明显治愈。自那时起，对于有意注射各种细菌进行了广泛研究，所述细菌除了梭菌之外，还包括鼠伤寒沙门氏菌，即细菌介导的癌症治疗的概念。当癌细胞生长超过一定大小(大约Imm3)时，其经受周围血管的氧气供应不足，形成癌组织内缺氧。缺氧状态下的癌组织提供了厌氧细菌容易增殖的环境，同时其可能使用各种毒素和/或通过未知机制攻击周围癌细胞至坏死。已进行了各种尝试以增强细菌介导的癌症治疗。例如，细菌被转化以表达抗癌蛋白质，或用于递送携带抗癌蛋白质基因的质粒至癌组织。为了减轻由细菌增殖和毒素产生的副作用，也尝试将营养缺陷型突变体、孢子和减毒细菌用于癌症治疗。尽管这些努力，但在癌症治疗中使用细菌一直存在癌症周围的正常组织或器官中细菌增殖的风险。广义上细菌中具有两种不同类型的细胞壁，称为革兰氏阳性和革兰氏阴性。已知革兰氏阴性菌，诸如大肠杆菌、脑膜炎奈瑟氏菌、绿脓假单胞菌和福氏志贺氏菌自发地从外膜脱落微泡。来自革兰氏阴性菌细胞脱落的微泡被称为外膜囊泡，通常由脂质双分子层组成。通常其为大小为20 200nm的球状，并具有各种生物活性物质，诸如脂多糖(LPS)和外膜蛋白、脂质和遗传物质(DNA，RNA)，其影响宿主细胞的炎症反应。来自细菌细胞脱落的微泡用作信息载体，其在同源细胞之间的蛋白质或遗传物质输送中及细胞至细胞的信号传导中起重要作用，并有助于竞争生物体的去除或细菌的存活。此外，脱落的微泡将毒素传递至宿主，因此部分地解释了细菌性疾病的病原学。在死于严重败血症的患者血液中发现脱落的微泡的报道表示脱落的微泡在败血症的病理学中起重要作用，败血症的特征是全身性炎症反应。发现来自细菌细胞脱落的微泡刺激宿主细胞分泌炎症性细胞因子和凝结剂的研究也支持上述观点。 本专利技术人首次发现，革兰氏阳性菌，包括枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌产生脱落的微泡。然而，还需要更多关于来自革兰氏阳性菌细胞脱落的微泡的组分或功能的信息。已分离并观察到从各种细菌种类自发脱落的微泡。通常，通过过滤或超速离心从细胞培养物中分离脱落的微泡。此外，已知可用抗生素(诸如庆大霉素)控制脱落的微泡的产生。特别地，建议通过清洁剂处理制备脱落的微泡可能应用为抗脑膜炎奈瑟氏菌(一种细菌性病原体)感染的疫苗。然而，这些生产方法的容量受到严格限制。尽管癌症和细菌之间的关系，但迄今为止未报道来自细菌细胞脱落的微泡在癌症发病及发展中的作用，特别地，未报道应用来自细菌细胞脱落的微泡治疗癌症和/或诊断癌症。
技术实现思路
技术问题根据本专利技术，本专利技术人彻底深入的研究发现包含来自细菌或转化细菌的微泡的组合物能有效地抑制癌细胞的生长。因此，本专利技术提供了一种使用来自细菌细胞的微泡治疗癌症和/或诊断癌症的方法，其在癌症治疗中卓有成效并显著减少副作用，及一种使用负载药物的来自细菌细胞的微泡，递送治疗或诊断疾病药物的方法，从而有效并特异性地治疗和诊断疾病。然而，本专利技术所要达到的目的不限于上述，因此本领域技术人员将理解，可从以下描述中清楚地理解其他目的。技术方案根据一方面，本专利技术涉及用于治疗癌症和/或诊断癌症的药物组合物，其包含来自细菌细胞的微泡。本专利技术中使用的细菌可来自革兰氏阳性或革兰氏阴性菌，且其可以是天然的或基因转化的。该组合物还进一步包含中和微泡毒性的药物、提高抗癌活性的药物、负载这种药物的纳米颗粒治疗剂和/或细胞治疗剂。所述纳米颗粒治疗剂是大小为IOnm至10 μ m的颗粒，且其实例包括，但不限于，脂质体、树枝状大分子、聚合物和微泡。根据另一方面，本专利技术涉及一种治疗癌症和/或诊断癌症的方法，其包括向需要的受试者施用来自细菌细胞的微泡。所述微泡可与中和微泡毒性的药物、提高抗癌活性的药物、负载这种药物的纳米颗粒治疗剂和/或细胞治疗剂一起同时/顺序地施用。根据还一方面，本专利技术涉及一种用于治疗癌症和/或诊断癌症的来自细菌细胞的微泡的制备方法。在本专利技术 的制备方法中，所述来自细菌细胞的微泡可以是从细菌自发脱落的微泡或人工微泡。在本专利技术的一个实施方式中，用于治疗癌症或诊断癌症的脱落的微泡的制备方法包括以下步骤:添加药物至细菌或转化细菌的悬浮液中以得到含有药物的细菌悬浮液；并将负载药物的脱落的微泡从细菌悬浮液中分离。在本专利技术的另一实施方式中，用于治疗癌症或诊断癌症的脱落的微泡的制备方法包括以下步骤:将脱落的微泡从细菌或转化细菌的培养物中分离；并培养带有药物的已分离的微泡的悬浮液。该方法还进一步包括分离负载用于治疗癌症或诊断癌症的药物的脱落的微泡。在本专利技术的还一实施方式中，用于治疗癌症或诊断癌症的人工微泡的制备方法包括以下步骤:将细菌或转化细菌的悬浮液与药物混合以得到含有药物的细菌悬浮液；使用选自下组的方法对细菌悬浮液进行处理以构建人工微泡，该组由挤压、超声波处理、分裂、均质化、冻融、电穿孔、机械降解和化学处理组成；并分离人工微泡。在本专利技术的又一实施方式中，用于治疗癌症或诊断癌症的人工微泡的制备方法包括以下步骤:使用选自下组的方法对细菌或转化细菌悬浮液进行处理以构建人工微泡，该组由挤压、超声波处理、分裂、均质化、冻融、电穿孔、机械降解和化学处理组成；分离人工微泡；并培养带有药物的已分离的微泡的悬浮液。该方法还进一步包括从细菌悬浮液中分离负载用于治疗癌症或诊断癌症的药物的人工微泡。根据本专利技术的制备方法还进一步可包括使用选自由抗生素治疗、紫外线照射、Y射线照射和过滤组成的组中的方法灭菌用于治疗癌症或诊断癌症的脱落的微泡或人工微泡。根据还一方面，本专利技术提供了一种包含负载治疗癌症或诊断癌症的药物的来自细菌细胞的微泡的药物组合物。根据还一方面，本专利技术提供了一种包含负载治疗癌症或诊断癌症的药物的来自细菌细胞的微泡的药物组合物，所述细菌细胞被转化以靶向癌细胞或癌组织。此外，本专利技术的又一方面设想一种递送治疗癌症和/或诊断癌症的药物至癌细胞或癌组织的方法，其包括使用负载药物的来自细菌细胞的微泡，所述细菌细胞被转化以靶向癌细胞或癌组织。此外，本专利技术的又一方面设想一种治疗癌症和/或诊断癌症的方法，其包括使用负载药物的来自细菌细胞的微泡，所述细菌细胞被转化以靶向癌细胞或癌组织。根据还一方面，本专利技术提供了一种用于递送治疗疾病和/或诊断疾病的物质的组合物，其包含负载治疗物质和/或诊断物质的来自细菌细胞的微泡。根据还一方面，本专利技术涉及一种递送治疗疾病和/或诊断疾病的药物的方法，其包括使用负载治疗药物和/或诊断药物的来自细菌细胞的微泡。根据另一方面，本专利技术涉及一种递送治疗疾病和/或诊断疾病的药物至目的细胞或目的组织的方法，其包括使用负载治疗药物和/或诊断药物的来自细菌细胞的微泡，所述细菌细胞被转化以靶向目的细胞或目的组织。根据还一方面 ，本专利技术涉及一种治疗疾病和/或诊断疾病的方法，其包括递送负载治疗疾病和/或诊断疾病的药物的微泡。根据另一方面，本专利技术涉及一种用于诊断疾病和/或治疗疾病的药物递送系统，其包含负载治疗疾病和/或诊断疾病的药物的微泡。根据还一方面，本专利技术涉及一种诊断疾病的试剂盒，其包含负载诊断疾病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.01 KR 10-2010-0063637;2011.06.30 KR 10-2011.一种用于治疗或诊断癌症的药物组合物，其包含来自细菌细胞的微泡。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述细菌是天然存在的细菌。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述细菌表达诊断或治疗癌症的物质。4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述细菌表达靶向癌症血管、癌组织或癌细胞的物质。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述细菌是转化的。6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述细菌是转化的从而所述微泡具有降低的毒性。7.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述细菌具有参与内毒性形成的改性的基因。8.根据权利要求5所述的药物组 合物，其中所述细菌被转化以表达细胞膜融合物质。9.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述细菌被转化以靶向癌症血管、癌组织或癌细胞。10.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述细菌被转化以表达诊断或治疗癌症的物质。11.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述细菌被转化以表达至少一种选自下组的物质:该组由细胞粘附分子、抗体、靶向蛋白、细胞膜融合蛋白本身及其融合蛋白所组成。12.根据权利要求5到11中任一项所述的药物组合物，其中所述细菌被转化两次或多次。13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述细菌是革兰氏阴性菌。14.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述细菌是革兰氏阳性菌。15.根据权利要求1所述的药物组合物，还进一步包含抑制微泡引起的毒性的药物。16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述药物负载于微泡上。17.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述药物抑制内毒素介导的毒性。18.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述药物是多粘菌素B。19.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述药物是阿司匹林。20.根据权利要求1所述的药物组合物，还进一步包含增强抗癌活性的药物。21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物负载于微泡上。22.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物是阿司匹林。23.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物抑制Thl7(辅助性T细胞17)介导的免疫应答。24.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物抑制白介素-6的形成或活性。25.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物抑制血管生成。26.26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述药物抑制血管内皮生长因子的形成或活性。27.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述药物抑制血管内皮生长因子受体介导的信号传导。28.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物抑制STAT3(信号传导及转录激活因子)信号传导。29.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述药物是抗癌剂。30.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述来自细菌细胞的微泡包含除了细菌细胞膜组分以外的其他物质。31.根据权利要求30所述的药物组合物，其中除了膜组分以外的其他物质是环糊精或聚乙二醇。32.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述微泡具有化学改性的膜组分。33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述膜组分是用巯基或胺基化学改性的。34.一种治疗或诊断癌症的方法，包括对所需受试者施用来自细菌细胞的微泡。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌是天然存在的细菌。36.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌表达诊断或治疗癌症的物质。37.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌表达靶向癌症血管、癌组织或癌细胞的物质。38.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌表达靶向癌症血管、癌组织或癌细胞的物质以及用于诊断或治疗癌症的物质。39.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌是遗传转化的。40.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌是转化的从而微泡具有降低的毒性。41.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌具有参与内毒性形成的改性的基因。42.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌被转化以表达细胞膜融合物质。43.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌被转化以靶向癌症血管、癌组织或癌细胞。44.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌被转化以表达诊断或治疗癌症的物质。45.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌被转化以表达至少一种选自下组的物质:该组由细胞粘附分子、抗体、靶向蛋白、细胞膜融合蛋白本身及其融合蛋白所组成。46.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌被转化两次或多次。47.根据权利要求34所述的方法，其中所述微泡负载有减轻微泡副作用的药物或增强微泡抗癌活性的药物。48.根据权利要求34所述的方法，其中所述来自细菌细胞的微泡与减轻微泡副作用的药物或增强微泡抗癌活性的药物共同施用。49.根据权利要求34所述的方法，其中所述来自细菌细胞的微泡与纳米颗粒治疗剂或细胞治疗剂共同施用，所述纳米颗粒治疗剂或所述细胞治疗剂负载有减轻微泡副作用的药物或增强微泡抗癌活性的药物。50.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述减轻微泡副作用的药物抑制由内毒性引起的毒性。51.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，所述减轻微泡副作用的药物是多粘菌素B。52.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，所述减轻微泡副作用的药物是阿司匹林。53.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制Thl7介导的免疫应答。54.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制白介素-6的形成或活性。55.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制血管生成。56.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制血管内皮生长因子的形成或活性。57.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制血管内皮生长因子受体介导的信号传导。58.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物抑制STAT3信号传导。59.根据权利要求47到49中任一项所述的方法，其中所述增强微泡抗癌活性的药物是抗癌剂。60.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阴性菌。61.根据权利要求34所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阳性菌。62.一种制备用于治疗或诊断癌症的微泡的方法，包括: (a)向细菌或转化细 菌中添加药物以获得含有所述药物的细菌悬浮液；并且 (b)从所述细菌悬浮液中分离负载药物的脱落的微泡。63.一种制备用于治疗或诊断癌症的微泡的方法，包括: (a)向细菌或转化细菌中添加药物以获得含有所述药物的细菌悬浮液； (b)使用选自下组的方法对细菌悬...

【专利技术属性】
技术研发人员：高用柗，金晤妍，张寿哲，尹昶闵，金润根，
申请(专利权)人：浦项工科大学校产学协力团，
类型：
国别省市：