本发明专利技术涉及用于治疗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus；S.aureus)感染的组合物和方法。具体来说，本发明专利技术提供包括Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)抗原的疫苗、与PVL抗原结合的抗体和含有其的组合物，制造这些组合物的方法和用于治疗金黄色葡萄球菌感染(包含那些社区获得性甲氧西林(methicillin)抗性感染)的方法。本发明专利技术还提供PVL抗体，包含对单一PVL亚单位具特异性的PVL抗体；和PVL抗原，包含经连结及经突变的PVL抗原。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术大体上涉及治疗和预防细菌感染。特定来说，在本文中揭示使用包括Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)抗原或与其特异性结合的抗体的组合物来治疗和预防金黄色葡萄球菌(S. aureus)感染(包含社区获得性甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(CA-MSRA)感染)的组合物和方法。本专利技术也大体上涉及属于LukF-PV和LukS-PV蛋白的抗体和抗原，那些蛋白的突变形式，以及那些PVL亚单位的融合蛋白组合。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)细菌(通常被称作“staph”、“Staph.aureus”或“S. aureus”)通常携带于健康个体的皮肤上或鼻子中。在任何特定时间人口的约20%-30%上定居有金黄色葡萄球菌。这些细菌通常造成轻微感染，诸如丘疹和疖子。然而，金黄色葡萄球菌也造成严重且潜在致命的菌血症，其为特征在于在血流中存在活细菌的医学病状。金黄色葡萄球菌表达众多毒力因子(包含荚膜多糖和蛋白毒素)。PVL是属于synergohymenotropic毒素家族的金黄色葡萄球菌蛋白，其通过两个不相关种类的分泌蛋白或亚单位的协同作用破坏宿主防御细胞、白细胞和红细胞的膜。Supersac等人,Infect.Immun. 61 :580-7 (1993)。此蛋白质家族包含α -溶血素(α -毒素)、β -溶血素、δ -溶血素、Y-溶血素、杀白细胞素(Luk)和PVL蛋白(LukS-PV和LukF-PV)。通过观察白细胞毒性活性在金黄色葡萄球菌中首先发现PVL。Van der Velde7LaCellule, 10 :401-9 (1894)。后来Panton和Valentine能够在来自患有慢性疖病的个体的V8菌株中区分PVL与其它溶血素。Panton P. ,Lancet, 222 :506-8 (1932)。随后Woodin发现PVL 是由两个亚单位 LukS-PV 和 LukF-PV 组成。Woodin AM. ,Biochem. J. ,73 :225-37(1959)和 Woodin AM.，Biochem. J.，75 :158-65(1960)。通过对兔和人类多形核细胞(PMN)和巨噬细胞的孔诱导已显示PVL具白细胞毒性。Finck-Barbancon 等人,Biochim. Biophys. Acta, 1182 :275-82 (1993)。当经皮内注射入兔中时，经纯化PVL诱发严重炎性病变，其导致毛细管扩张、趋化性、PMN渗透、PMN核破裂和皮肤坏死。Prevost 等人,J. Med. Microbiol, 42 :237-45 (1995)和 Ward 等人，Infect. Immun. ,28 :393-7(1980)。PVL的白细胞毒性和溶血性活性涉及两种PVL亚单位的连续结合和协同缔合。首先，LukS-PV与膜祀相互作用(Colin等人，Infect. Immun. 62 3184-8(1994))。其后，LukF-PV 亚单位与 LukS-PV 亚单位结合。Woodin，AM 和 Wieneke AA,Biochem J.，105 :1029-1038 (1967)和 Colin 等人，同上。尽管LukS-PV和LukF-PV仅表达于一小部分医院相关金黄色葡萄球菌分离物(Prevost 等人，Infect. Immun. ,63 :4121-9(1995))中，但 PVL 表达似乎在世界范围内普遍存在于社区获得性甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)菌株中。Dufour等人，Clin. Infect. Dis. ,35 :819-24(2002)和 Vandenesch 等人，Emerg. Infect. Dis. ,9 978-84(2003)。实际上，CA-MRSA的出现和传播近来已导致各种疾病的爆发，这些疾病包含胺肿和市病(Lina 等人,Clin. Infect. Dis. ,29 :1128-32(1999)和 Kazakova 等人,N. Engl.J. Med.，352 :468-75(2005)),以及严重毒血症(诸如坏死性肺炎)。Francis等人，Clin.Infect. Dis. ,40 100-7(2005)。据估计在美国50%以上的金黄色葡萄球菌菌株如今具甲氧西林抗性。举例来说，1999 年，在美国国家医院感染监测系统(National Noscomial Infections Surveillance System ；NNISS)中所报导的全部金黄色葡萄球菌分离物的54. 5%具甲氧西林抗性。疾病控制中心(The Centers for Disease Control)估计在2002年美国约存在100，000例医院获得性MRSA感染且这些感染问题只会恶化。在某些亚洲和欧洲国家，甲氧西林抗性的比率甚至更大(例如，在日本MRSA比率为72% ;在香港为74% )。因此，抗生素抗性菌株目前在治疗金黄色葡萄球菌感染时造成问题，且除非开发新颖治疗工具，否则这些问题只会变得恶化。因此，存在对于用于治疗通常金黄色葡萄球菌 感染且尤其CA-MRSA感染的组合物和方法的需求。使用PVL抗原来制造疫苗的先前尝试遭受显著缺点，其包含经投与抗原的毒性和缺乏功效。举例来说，Banffer 和 Franken, Path. Microbiol. 30 16-74 (1967)报导用杀白细胞素类毒素(PVL)使怀孕女性免疫以及其对抗体含量和乳腺炎发病率的影响。作者发现在免疫个体中抗杀白细胞素抗体增加，但在乳腺炎发展中无统计学显著差异。作者指出，在153名免疫个体中，11名报导“注射部位处疼痛，具有摸得出的腋淋巴腺(中等)”且“在3起病例中认为反应严重”。Gladstone, B. J. Exp. Path. 54 :255-59 (1973)对作者和其他人所作的研究进行评论依其申述展示经纯化杀白细胞素(包括LukF-PV与LukS-PV亚单位)抗葡萄球菌感染的治疗功效，但承认“其在健康人中的用途……由通常观测到的可变局部和全身反应显示治疗不当”。作者报导用使用福尔马林(formalin)去毒的经纯化杀白细胞素制剂免疫的结果，注意到在17名个体中有16名对免疫良好耐受，其中第17名个体经历发热、不适和呕吐。作者也报导在免疫个体中抗杀白细胞素抗体含量的相当大的可变性。文章未研究经福尔马林去毒的杀白细胞素制剂的预防或治疗功效。Ward 和 Turner, Infect. &Immun. 27 :393-97(1980)报导用 LukF-PV 制剂和LukS-PV制剂进行的实验，但其制剂的纯度并不明确，因为他们发现各制剂都产生LukF-PV与LukS-PV的抗体，表明缺乏纯度或抗原交叉反应性。作者发现用LukF-PV制剂免疫提供对投与LukF-PV、LukS-PV或两者产生的随后攻毒的保护，而用LukS-PV制剂免疫则不提供对任何攻毒的保护。然而，LukF-PV和LukS-PV攻毒诱发毒性反应的事实表明各制剂已经异种亚单位污染，因为单独一种亚单位为无毒的。关于抗PVL抗体的潜在有效性，Gauduchon等人，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
2005.06.13 US 60/689,5261.一种组合物,其包括金黄色葡萄球菌的Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)抗原的LukS-PV亚单位和医药学上可接受的载剂,但不包括LukF-PV亚单位,所述组合物进ー步包括一种或多种选自金黄色葡萄球菌抗原的细菌抗原，所述细菌抗原选自如下群组5型金黄色葡萄球菌、8型金黄色葡萄球菌和336型金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌PSl、表皮葡萄球菌GP1、α-毒素、脂磷壁酸(LTA)和微生物表面成分识别粘附基质分子(MSCRAMM)蛋白。2.根据权利要求I所述的组合物，其中所述LukS-PV亚单位经分子去毒。3.根据权利要求I所述的组合物，其中所述LukS-PV亚单位通过化学方式去毒。4.根据权利要求I所述的组合物，其中所述LukS-PV亚单位与另ー抗原连结。5.根据权利要求I所述的组合物，其中所述LukS-PV亚单位相对于野生型序列包括一个或多个氨基酸突变，所述氨基酸突变包括氨基酸取代、插入或缺失。6.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：金伯利·路易斯·泰勒，阿里·易卜拉欣·法托姆，
申请(专利权)人：葛兰素史密斯克蓝生物品公司，
类型：发明
国别省市：
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