本发明专利技术涉及用于进行抗葡萄球菌接种的免疫原性组合物。具体地，涉及包含葡萄球菌抗原的混合物的免疫原性组合物，该混合物组合了具有不同功能的抗原，例如，包括葡萄球菌胞外成分结合蛋白和葡萄球菌转运蛋白或葡萄球菌胞外成分结合蛋白和葡萄球菌毒力调节剂或毒素或葡萄球菌转运蛋白和葡萄球菌毒力调节剂或毒素的组合。也描述了疫苗、治疗方法、用途和制备葡萄球菌疫苗的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及葡萄球菌免疫原性组合物和疫苗，它们的制备以及这些组合物在医学中的用途。更特别地，它涉及疫苗组合物，包含用于治疗或预防葡萄球菌感染的抗原的组合。也提供了所述疫苗在医学中的使用和它们的制备方法。
技术介绍
近年来，随着血管内设备的使用增加，在社区获得的和在医院获得的感染数量都已经增加了。在医院获得的(医源性)感染是发病和死亡的主要原因，更特别是在美国，它每年影响了超过200万患者。根据各种研究，美国患者的大约6%在他们呆在医院期间将获得感染。估计1992年在美国的经济负担超过45亿美元(Emori和Gaynes，1993，Clin.Microbiol. Rev. 6 ;428)。大多数频发感染是尿道感染(UTI-感染的33% )，接下来是肺炎(15. 5%)，外科手术部位感染(14.8%)以及原发血流感染(13%) (Emori和Gaynes，1993，Clin. Microbiol. Rev. 6 ；428)。金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌(大多数是表皮葡萄球菌)、肠球菌种、大肠杆菌以及绿脓杆菌是主要的医源性病原体。尽管那些病原体差不多引起同样数量的感染，但是它们可引起的失调的严重性再加上抗生素抗性的分离菌的频率，对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的这个排位进行平衡，它们成为了最重要的医源性病原体。金黄色葡萄球菌是有着显著发病率和死亡率的医源性感染的最通常原因(Romero-Vivas et al 1995，Infect. Dis. 21 ; 1417)。它是骨髓炎、心内膜炎、脓毒性关节炎、肺炎、脓肿以及中毒性休克综合征的一些病例的原因。表皮葡萄球菌是正常的皮肤共生生物，也是引起植入的医疗设备的感染以及在外科手术部位的感染的重要机会致病菌。被金黄色葡萄球菌感染的医疗设备包括心脏起搏器、脑脊液分流器、连续流动的腹膜透析导管、整形外科设备以及人工心脏瓣膜。用抗生素治疗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌感染，青霉素是首选药物，而万古霉素用于甲氧苯青霉素抗性的分离菌。自1980年代以来，对抗生素呈现广谱抗性的葡萄球菌菌株的百分比已经变得日益普遍(Panlilo et al 1992, Infect. Control. Hosp.Epidemiol. 13 ;582)，造成了对有效的抗菌治疗的威胁。此外，近来出现的万古霉素抗性的 金黄色葡萄球菌已经引起了恐惧，害怕甲氧苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌菌株将会产生并扩散，对此还没有可用的有效治疗。已经研究了在被动免疫疗法中使用抗葡萄球菌抗原的抗体这一备选方法。包括给予多克隆抗血清的疗法正在研发之中(wo 00/15238, WO 00/12132)，以及用抗脂磷壁酸的单克隆抗体进行治疗(W0 98/57994)。备选方法将是使用主动疫苗接种来产生对葡萄球菌的免疫应答。已经确定了用作疫苗组分而包含的几种候选物。这些候选物包括纤连蛋白结合蛋白(US5840846)、MHC II类似物(US5648240)、纤维蛋白原结合蛋白(US6008341)、GehD(US 2002/0169288)、胶原蛋白结合蛋白(US6288214)、SdrF、SdrG 和 SdrH(WC) 00/12689)、突变体 SEA 和 SEB 外毒素(WO00/02523)以及52kDa玻连蛋白结合蛋白(W0 01/60852)。金黄色葡萄球菌基因组已经被测序，并已经确定了许多编码序列(EP786519，WO02/094868)。对于表皮葡萄球菌同样如此(W0 01/34809)。作为该方法的改进，其他人已经确定了被来自患有葡萄球菌感染的患者的超免疫血清所识别的蛋白质(WO 01/98499，WO02/059148)。靶向金黄色葡萄球菌或靶向它所产生的外蛋白的疫苗的首次产生已经获得了有限成功(Lee 1996 Trends Microbiol. 4 ； 162) 0仍然存在研发针对葡萄球菌感染的有效疫、苗的需求。因此，本专利技术提供了包含至少两种不同的蛋白或其免疫原性片段的免疫原性组合物，所述蛋白或其免疫原性片段选自以下至少两组蛋白或免疫原性片段组a)至少一种葡萄球菌胞外成分结合蛋白或其免疫原性片段，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EbhB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS)、EFB (FIB)、SBI、自溶素、ClfA、SdrC、SdrG> SdrH、酷酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、EPB、SSP-l、SSP-2、HBP、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和 MAP ；组b)至少一种葡萄球菌转运蛋白或其免疫原性片段，其选自免疫优势的ABC转运蛋白、IsdA、IsdB、Mg2+转运蛋白、SitC和Ni ABC转运蛋白；组c)至少一种葡萄球菌毒力调节剂、毒素或其免疫原性片段，其选自a毒素(Hla)、a毒素H35R突变体、RNA III活化蛋白(RAP)。附图说明图I-优选蛋白质的多肽序列。表I提供了有关每个SEQ ID代表哪个蛋白质的信肩、O图2-编码优选蛋白质的核苷酸序列。表I提供了有关每个SEQ ID编码哪个蛋白质的信息。图3-天然条件下a毒素的纯化。图A显示了 a毒素纯化期间所制备样品的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。第I道-分子量标志，第2道-含有过量表达a毒素的可溶性级分，第3道-从Ni-NTA柱流过，第4道-用10%缓冲液B洗脱的级分，第5道-用20%缓冲液B洗脱的级分，第6道-用30%缓冲液B洗脱的级分，第7道-用50%缓冲液B洗脱的级分，第8道-用75%缓冲液B洗脱的级分，第9道和第10道-用100%缓冲液B洗脱的级分，第11道-诱导前在T = 0时的细菌，第12道-诱导后在T = 4时的细菌，第13道-细胞溶胞产物，第14道-可溶性级分，第15道-不溶性级分。图B显示了 10、5、2和I ill纯化a毒素的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。图4-变性条件下的SdrC的纯化。图A显示了 a毒素纯化期间所制备样品的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。泳道M-分子量标志，泳道Start-由含有过量表达SdrC的不溶性级分所形成的上清液，泳道FTl-从Ni-NTA柱流过，泳道C-用漂洗缓冲液C洗脱的级分，泳道D-用缓冲液D洗脱的级分，道E-用缓冲液E洗脱的级分。图B显示了 1、2、5和10 ill纯化SdrC的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。图5-在包被了纯化蛋白质的平板中抗葡萄球菌蛋白质抗血清的ELISA结果。合并小鼠pre_使用提取自接种前小鼠的合并的血清的结果。合并小鼠PostIII-使用免疫后提取的合并的小鼠血清的结果。合并兔Pre-使用提取自接种前兔的合并的血清的结果。合并兔Post III-使用免疫后提取的合并的兔血清的结果。Blc-阴性对照。图6-在包被了杀死的葡萄球菌的平板上产生的抗葡萄球菌蛋白质的小鼠抗血清 的ELISA结果。图A使用由金黄色葡萄球菌血清型5杀死的完整细胞所包被的平板。图B使用由金黄色葡萄球菌血清型8杀死的完整细胞所包被的平板。图C使用由表皮葡萄球菌杀死的完整细胞所包被的平板。用方块符号标记的线显示使本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·卡斯塔多，N·P·F·勒克雷尼耶，C·A·尼特，J·普尔曼，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。