一种应用于微生物技术领域中的促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种；一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，该方法包括以下步骤，将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；选择种子液进行接种，整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数0-300r/min，温度为32-40℃。该发明专利技术通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、pH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法。
技术介绍
专利技术专利92113318.9公开了一种地衣芽孢杆菌BL63516(保藏号:CGMCCN0.0183)制成的微生态制剂，即整肠生，可用于治疗成人急性、慢性腹泻及各种原因引起的肠道菌群失调症。1992年开始先后有整肠生胶囊和整肠生颗粒剂产品经国家药品监督管理局批准投放市场。经过20年的临床应用实践表明，整肠生具有较好的调整人体菌群失调的作用，市场、临床应用均未发现毒副作用及不良反应方面的相关报道。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是:菌种经pH6.0-7.8的营养肉汤培养基，37°C培养15-24小时，制成种子液；扩大培养时使用PH6.0-7.8的营养琼脂培养基，35-38°C培养48小时，制成菌苔液，离心获得菌泥，再按1:8的重量比加入无水碳酸钙，65-75°C脱水干燥制成原菌粉。该技术出现在微生态制剂工业化的早期，菌泥产量低，生产周期长，工作量巨大。后经沈阳第一制药厂1998年技术改造将固态发酵法升级为液态深层发酵法，工业化水平得到了大幅提升，但依然使用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基(Nutrient Broth),并未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516专属培养基。专利技术专利201010578718.0在液态深层发酵法的基础上，公开了地衣芽孢杆菌BL63516冻干菌种温度梯度复苏培养的方法。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是:菌种经pH7.0-7.4的营养肉汤培养基，恒温培养2-8小时，制成种子液；发酵罐扩大培养时使用PH7.0-7.4的营养肉汤培养基，温度37 土 1°C，罐压0.02-0.04MPa,培养12-36小时，制成发酵液，离心获得菌泥，再按1:3-7的比例加入无水碳酸钙，60±2°C脱水干燥制成原菌粉。虽然他们都是针对地衣芽孢杆菌BL63516进行了一系列研究，但以上的发酵工艺及培养基配方设计上，均依然采用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基(Nutrient Broth)，都未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516的专属培养基，且对该菌种都是采用一次配料、灭菌、批次发酵的工艺，在发酵过程中只对发酵温度和罐压进行着本领域技术人员所公知的干预控制，所以目前地衣芽孢杆菌BL63516发酵产物中，活菌数含量低，芽孢形成率不高，这一问题一直没有得到根本的解决。因此，研制开发一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法一直是亟待解决的课题
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法，通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、PH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率。本专利技术的目的是这样实现的:一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，各组分质量百分比为:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麦芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为:6.5-9 ;优选各组分质量百分比为:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麦芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量为水，用NaOH调节pH为7.5-8.5 ;所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种；一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，该方法包括以下步骤，(I)将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；(2)选择种龄8-15小时的种子液进行接种，接种量为0.03-1.0% ；(3)0-3小时调节溶解氧的通气量在0.1-0.6vvm，控制pH在6-9 ;3_15小时调节溶解氧通气量在0.4-1.1vvm,使pH其在3_7小时逐渐下降至4.5-6.5，7-15小时逐渐上升至8-9.5 ;自15小时开始调节溶解氧通气量在0.3-1.0vvm，控制pH稳定在8-9.5，自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到80%以上，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数 0_300r/min，温度为 32_40°C ；步骤(2)选择种龄8.5-14小时的种子液进行接种，接种量为0.07-0.29% ;步骤(3)具体过程为:0-3小时调节溶解氧通气量在0.2-0.5vvm，控制pH在7-8.5 ;3_15小时调节通气量在0.6-1.0vvm,使pH在3-7小时逐渐下降至5-6，7-15小时逐渐上升至8.3-9 ；自15小时开始调节溶解氧通气量在0.5-0.9vvm，控制pH稳定在8.3-9,自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到85-100%，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数 200-300r/min，温度为 34_38°C。本专利技术的要点在于它的发酵培养基及发酵培养方法。其原理是:通过研究找出各种物质的最有比例，以达到最有利于地衣芽孢杆菌BL63516生长过程中，细胞物质的合成、能量的供给以及新陈代谢的调节，同时，探索最优的外环境，以达到最有利于地衣芽孢杆菌BL63516生长过程中，渗透压的稳定及酶活力的维持。—种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法与现有技术相比，具有通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、PH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率等优点，将广泛地应用于微生物
中。下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。具体实施例方式以下实施例将有助于对本专利技术的了解，但这些实施例仅为了对本专利技术加以说明，本专利技术并不限于这些内容。实施例一1.发酵培养基的筛选1.1筛选培养基的盐浓度配制营养肉汤培养基各200ml:牛肉粉0.3%、牛蛋白胨1.0%、不同浓度NaCl，余量为水，用NaOH调节ρΗ7.2-7.4。NaCl 浓度分别取 0%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36_38°C培养9小时，制成种子液。将种子液接种至不同盐浓度的营养肉汤培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38°CU50r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表I。表I盐浓度试验结果(活菌数单位:108CFU/ml)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，其特征在于：各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0?2.5%、蛋白胨0.5?2.0%、麦芽糊精0.1?0.5%、低聚半乳糖0.1?0.3%、NaCl0.1?2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为：6.5?9。
【技术特征摘要】
1.一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，其特征在于:各组分质量百分比为:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨 0.5-2.0%、麦芽糊精 0.1-0.5%、低聚半乳糖 0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为:6.5-9。2.根据权利要求1所述的促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，其特征在于:优选各组分质量百分比为:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麦芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖 0.11-0.2%, NaCl0.3-1.5%，余量为水，用 NaOH 调节 pH 为 7.5-8.5。3.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，其特征在于:所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，其特征在于:该方法包括以下步骤， (1)将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养； (2)选择种龄8-15小时的种子液进行接种，接种量为0.03-1.0% ； (3)0-3小时调节溶解氧的通气量在0.1-0.6vvm,控...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪龙，雷健，吴楠，孟莉，尹柘，
申请(专利权)人：东北制药沈阳科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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