3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法技术

技术编号:8621167 阅读:316 留言:0更新日期:2013-04-25 02:32
本发明专利技术公开了一种3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法,包括:3T3-L1前脂肪细胞株的复苏、3T3-L1前脂肪细胞株的培养、3T3-L1前脂肪细胞株的传代和3T3-L1前脂肪细胞株的诱导分化。使用本发明专利技术上述方法对3T3-L1脂肪前体细胞进诱导分化至诱导后8天,视野中大约90%细胞分化为典型的成熟脂肪细胞,细胞体积增大,胞体变圆,胞浆内脂滴明显,部分融合成较大脂滴。本发明专利技术具有较好的分化效果和分化效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域,具体地说是一种3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法
技术介绍
脂肪前体细胞是一类能够增殖并向脂肪细胞分化的特异化的前体细胞。它是成熟脂肪细胞的前体。在开始向脂肪细胞分化前,脂肪前体细胞形态上类似成纤维细胞,呈长梭形。开始分化后,脂肪前体细胞逐渐丧失长梭形的形态,向圆球形转变,同时细胞内甘油三脂的含量逐渐上升,细胞骨架蛋白等的含量下降。细胞内出现脂滴,脂肪前体细胞逐渐向成熟脂肪细胞转化。由于脂肪前体细胞不含脂滴,体积小,有促血管生成特性,在细胞的收集与移植过程中比成熟的脂肪细胞更能耐受缺血与创伤,尤其在脂肪移植后的缺血期,使单个细胞比块状脂肪更易通过细胞融合而成活。研究显示抑制RAS可以减少糖尿病的发病及并发症的产生,但多项研究并未发现糖尿病患者血液中肾素或是血管紧张素II有所增高,随着多组织包括胰腺组织、脂肪组织、心脏组织中表达RAS各成分的发现,人们越来越关注局部RAS的激活是否在糖尿病及其并发症的发生发展中起到重要作用。研究证实人类脂肪细胞可产生RAS的各种成分包括血管紧张素原、肾素或肾素样活性物质、血管紧张素转换酶、血管紧张素II I型和血管紧张本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种3T3?L1脂肪前体细胞诱导分化方法,其特征在于,包括以下步骤:(一)3T3?L1前脂肪细胞株的复苏:从液氮种取出细胞株,立即置于37℃水浴箱中,至细胞液完全溶解时取出,将复苏的细胞加入在室温1000rpm离心5min,弃去上清,再加入培养液,吹打重悬,将重悬的细胞及培养液吸入培养皿中,显微镜下观察细胞形态及数量,将培养皿置于5%CO2的37℃恒温培养箱中培养;(二)3T3?L1前脂肪细胞株的培养:显微镜下见细胞贴壁,呈梭行,透亮,细胞每2天更换1次培养液,倾斜培养皿,将培养液用移液管移去,沿壁加入培养液;(三)3T3?L1前脂肪细胞株的传代:显微镜下见细胞贴壁,呈梭形或多角形,细胞密度约...

【技术特征摘要】
1.一种3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法,其特征在于,包括以下步骤 (一)3T3-L1前脂肪细胞株的复苏从液氮种取出细胞株,立即置于37°C水浴箱中,至细胞液完全溶解时取出,将复苏的细胞加入在室温IOOOrpm离心5min,弃去上清,再加入培养液,吹打重悬,将重悬的细胞及培养液吸入培养皿中,显微镜下观察细胞形态及数量,将培养皿置于5%C02的37°C恒温培养箱中培养; (二)3T3-L1前脂肪细胞株的培养显微镜下见细胞贴壁,呈梭行,透亮,细胞每2天更换I次培养液,倾斜培养皿,将培养液用移液管移去,沿壁加入培养液; (三)3T3-L1前脂肪细胞株的传代显微镜下见细胞贴壁,呈梭形或多角形,细胞密度约80%,倾斜培养皿,将培养液用移液器移去,沿壁加入温热的PBS溶液6ml,晃动培养皿后,用移液器移去,重复一次,加入...

【专利技术属性】
技术研发人员:宁光方萍汤正义崔斌王卫庆
申请(专利权)人:上海市内分泌代谢病研究所
类型:发明
国别省市:

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