人脐带间充质细胞的获得方法技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，是一种人脐带间充质细胞的获得方法，一种人脐带间充质细胞的获得方法，按下述步骤进行：第一步，在无菌条件下人脐带活组织，洗净，切碎成组织碎块；第二步，将组织碎块放入培养皿中，并向其中加入低糖混合培养液，然后将培养皿放入CO2培养箱中进行培养，每3天至4天培养皿换一次低糖混合培养液。本发明专利技术利用反复转移使脐带组织中的细胞反复移出，再将此细胞反复进行培养，从而达到大量获得细胞的目的，生产效应在100%的基础上，提高细胞的收获量，培养第3代获得4.04×1010个细胞，培养第6代获得1.56×1012个细胞，为临床组织工程和基因治疗提供充足的细胞源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，是一种。
技术介绍
间充质干细胞(MSC)是源自中胚层的一类干细胞，近些年研究发现MSC具有良好的可塑性和扩增能力，能为病损组织的修复再生提供祖细胞。Arnold1. caplan认为“利用培养法扩增的间充质干细胞对特定组织进行的大量重建或修复，已经远远超出了它们的正常利用和实用范围。”因此，不同组织来源的间充质干细胞成为各研究组的研究热点。脐带来源的MSC因来源充足且无创性，扩增技术成熟，成为许多研究小组设计大量扩增方案的聚焦点。C6cile DB研究组在培养第3代获得> 7X IO9个细胞；Fong CY研究组的培养方案脐带MSC的生产效应是100%，获得的细胞数约为4 X IO6至5 X IO6个细胞/cm2脐带；有些研究技术使脐带的生产效应能达到100%但收获的细胞数却只够或不够一个病人的治疗剂量；有些研究技术脐带扩增到第3代的细胞数量是最多达7X109，这些扩增方案的细胞收获量均未突破IO9个细胞。
技术实现思路
本专利技术提供了一种，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决目前获取人脐带间充质细胞的方法收获人脐带间充质细胞的量过少而造成无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人脐带间充质细胞的获得方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，在无菌条件下人脐带活组织，洗净，切碎成组织碎块；第二步，将组织碎块放入培养皿中，并向其中加入低糖混合培养液，然后将培养皿放入CO2培养箱中进行培养，每3天至4天培养皿换一次低糖混合培养液；第三步，待培养皿中的组织碎块周边有梭形细胞爬出时后，将组织碎块移入新的培养皿中内，并向新的培养皿中加入低糖混合培养液，放入CO2培养箱中继续进行培养；第四步，反复重复第三步，直至最后一次转移的培养皿中的组织碎块周边不再有梭形细胞长出。

【技术特征摘要】
1.一种人脐带间充质细胞的获得方法，其特征在于按下述步骤进行 第一歩，在无菌条件下人脐带活组织，洗浄，切碎成组织碎块； 第二步，将组织碎块放入培养皿中，并向其中加入低糖混合培养液，然后将培养皿放入CO2培养箱中进行培养，每3天至4天培养皿换一次低糖混合培养液； 第三步，待培养皿中的组织碎块周边有梭形细胞爬出时后，将组织碎块移入新的培养皿中内，并向新的培养皿中加入低糖混合培养液，放入CO2培养箱中继续进行培养； 第四步，反复重复第三步，直至最后一次转移的培养皿中的组织碎块周边不再有梭形细胞长出。2.根据权利要求1所述的人脐带间充质细胞的获得方法，其特征在于CO2培养箱的培养条件为37°C、3. 6% CO2、饱和湿度。3.根据权利要求1或2所述的人脐带间充质细胞的获得方法，其特征在于第一歩中将活组织洗浄后切碎成2 mm3至3mm3的小块。4.根据权利要求1或2或3所述的人脐带间充质细胞的获得方法，其特征在于在第四步之后，将每次转移出组织碎块后的培养皿底粘附的梭形细胞用低糖混合培养液培养，当细胞生长汇合为80%至95%后用胰蛋白酶消化获得细胞，收集获得后的细胞，离心，弃上清液，计数细胞，调节细胞浓度按要求密度重新接种入新培养皿...

【专利技术属性】
技术研发人员：温浩，江明，马艳，卢晓梅，朱启英，毕晓娟，段显琳，
申请(专利权)人：新疆医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：