一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法技术

本发明专利技术属于生物医学领域，涉及一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，尤其涉及嘌呤衍生物Purmorphamine诱导Olig2+-GFP+-mES的神经细胞分化的方法及其用途。本发明专利技术采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2-GFP+-mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2-GFP+-mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；经实验证实，所述的Purmorphamine可作为SHH的替代物，有效地诱导Olig2+-GFP+-mES分化为高纯度、有功能的脊髓运动神经元和少突胶质细胞，并引起相关基因表达改变；移植实验结果证实，所诱导的神经细胞能促进大鼠脊髓损伤后功能和形态的部分恢复，具有促进脊髓损伤后再生和功能重建的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学领域，涉及神经细胞诱导的方法，具体涉及，尤其涉及嘌呤衍生物(Purmorphamine)诱导01ig2+-GFP+-mES的神经细胞分化的方法及其用途。
技术介绍
脊髓损伤(Spinal cord injury, SCI)是临床常见的外伤性疾患之一。SCI的发生大多源于交通伤、坠落伤或运动伤等，近年呈上升趋势。SCI —旦形成，常常导致严重的行为功能障碍，给患者、家庭和社会带来极大负担。近年来，再生医学给脊髓损伤的治疗带来新的希望。胚胎干细胞(ESC)以其具有很强的增殖和分化能力，可被大量地诱导分化成为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞等优势，成为再生医学移植供体的理想来源。但由于 胚胎干细胞直接移植体内具有形成畸胎瘤的危险，因此应用胚胎干细胞移植治疗脊髓损伤一般先在体外诱导分化出神经前体细胞或神经细胞，然后再移植进脊髓组织，具体而言，目前临床实施胚胎干细胞移植治疗脊髓损伤的过程包括如下两部分一是体外诱导胚胎干细胞分化成为纯度高、数量多、有功能的神经细胞；二是移植到脊髓内的细胞可迁移、增殖以及与宿主组织形成很好的整合，从而发挥功能。当前，胚胎干细胞的体外诱导分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，其特征在于，采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2？GFP+？mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2？GFP+？mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；包括下述步骤：①将Olig2+？GFP+？mES放入含有白血病抑制因子LIF的胚胎干细胞培养基悬浮培养2天；②放入含有全反式维甲酸RA和嘌呤衍生物Purmorphaine的神经分化培养基中培养4天；③放入含有bFGF的神经分化培养基分别培养2天和6天，采用荧光激活的细胞筛选Olig2+？GFP+？阳性细胞；④分别在神经元培养基和少...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙燕，彭裕文，张素春，李瑞锡，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：