本发明专利技术公开了与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。本发明专利技术提供的shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为双链RNA，如序列表的序列11或序列13所示。所述shRNA具体可如序列表的序列12或序列14所示。本发明专利技术的发明专利技术人发现人肺癌细胞表达的一种长链非编码RNA(IVDN8)可作为防治流感的新型药物靶标，干扰IVDN8的表达时，病毒的复制水平则降低。因此，通过药物干扰或抑制IVDN8表达，从而抑制或降低流感病毒或其它病毒的复制水平，可预防性地保护机体与细胞，促进人体对病毒的清除。这种以IVDN8为靶标的抗病毒新机制和新方法将有助于降低流感的感染率、减轻症状或缩短病程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。
技术介绍
长链非编码RNA(long non-coding RNA, IncRNA)是指长200nt以上的不编码蛋白质的RNA。转录组计划完成后，人们发现哺乳动物细胞中4/5的转录产物并不编码蛋白质，其中不少是IncRNA。最初以为这些转录产物只是“噪音”，但近年的研究表明，IncRNA在细胞生命活动中发挥着重要而广泛的作用。流感病毒是正粘病毒科的单链RNA病毒，因其基因变异迅速，大流行不断发生。在全球范围，流感每年导致几十万人死亡，预防接种及治疗费用亦十分高昂。由于部分流感病毒毒株对金刚烷胺和金刚乙胺有耐药性，目前有效的抗病毒药物为神经胺酸酶抑制剂达菲和扎那米韦，但价格昂贵，而且副作用及耐药毒株亦有报道。研制新型抗病毒药物的任务仍然艰巨。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。本专利技术提供了一种shRNA(shRNAl)，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列11所示。所述shRNAl具体可如序列表的序列12所示。 编码所述shRNAl的DNA分子(DNA分子I)也属于本专利技术的保护范围。含有所述DNA分子I的重组载体(重组载体1)1也属于本专利技术的保护范围。所述重组载体I可为重组质粒(重组质粒I)或重组病毒(重组病毒I)。所述重组质粒I具体可为在pSIH-Hl-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列2自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒I具体可为将将所述重组质粒l、pPACKHl-GAG质粒、pPACKHl-REV质粒和pVSV_G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒l、pPACKHl-GAG质粒、pPACKHl-REV质粒和pVSV-G质粒的质量配比优选为1:1 :1 :1。本专利技术还提供了另一种shRNA (shRNA2)，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列13所示。所述shRNA2具体可如序列表的序列14所示。编码所述shRNA2的DNA分子(DNA分子2)也属于本专利技术的保护范围。含有所述DNA分子2的重组载体(重组载体2)也属于本专利技术的保护范围。所述重组载体2可为重组质粒(重组质粒2)或重组病毒(重组病毒2)。所述重组质粒2具体可为在pSIH-Hl-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列4自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒2具体可为将将所述重组质粒2、pPACKHl-GAG质粒、pPACKHl-REV质粒和pVSV_G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒l、pPACKHl-GAG质粒、pPACKHl-REV质粒和pVSV-G质粒的质量配比优选为1:1 :1 :1。本专利技术还保护抑制IVDN8表达的产品在制备药物中的应用；所述药物的作用为如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；(c)治疗和/或预防流感。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子编码。所述抑制IVDN8表达的产品为所述shRNAl、所述DNA分子1、所述重组质粒1、所述重组病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重组质粒2和所述重组病毒2中的至少一种。本专利技术还保护一种药物，它的活性成分为抑制IVDN8表达的产品；所述药物的作用为如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；(C)治疗和/或预防流感。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子编码。所述抑制IVDN8表达的产品为所述shRNAl、所述DNA分子1、所述重组质粒1、所述重组病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重组质粒2和所述重组病毒2中的至少一种。本专利技术还保护序列表的序列I所示的DNA片段。本专利技术还保护序列表的序列I所示的DNA片段编码的RNA。 含有序列表的序列I所示的DNA片段的重组载体(重组载体3)也属于本专利技术的保护范围。所述重组载体可为重组质粒(重组质粒3)或重组病毒(重组病毒3)。所述重组质粒3具体可为在pMIG逆转录病毒表达载体的BglII和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列I所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒3具体可为将所述重组质粒3、PCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒UpCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒的质量配比优选为1:1 :1。序列表的序列I所示的DNA片段、序列表的序列I所示的DNA片段编码的RNA、重组质粒3或重组病毒3均可用于制备产品；所述产品的作用为促进流感病毒在细胞中的复制和/或释放。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。本专利技术还保护IVDN8作为靶点在开发治疗和/或预防流感的药物中的应用。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子编码。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。本专利技术的专利技术人发现人肺癌细胞表达的一种长链非编码RNA(IVDN8)可作为防治流感的新型药物靶标。IVDN8在细胞中呈组成型表达，参与流感病毒的感染复制过程。在细胞中人为过表达IVDN8时，流感病毒的复制水平略有增高；而干扰IVDN8的表达时，病毒的复制水平则降低。可见IVDN8被流感病毒利用以促进自身的复制。感染了流感病毒的细胞中，细胞保护性机制下调IVDN8的表达水平。因此，通过药物干扰或抑制IVDN8表达，从而抑制或降低流感病毒或其它病毒的复制水平，可预防性地保护机体与细胞，促进人体对病毒的清除。这种以IVDN8为靶标的抗病毒新机制和新方法将有助于降低流感的感染率、减轻症状或缩短病程。附图说明图1为感染流感病毒的A549细胞内IVDN8表达水平降低；采用肌动蛋白mRNA作为内参；1:A549细胞；2 :感染流感病毒的A549细胞。图2为病毒感染复制过程与IVDN8丰度降低相关(实验一);采用肌动蛋白mRNA作为内参；1 A549细胞，转染A549细胞的RNA ；2 A549细胞，转染感染病毒的A549细胞的RNA混合物；3 A549细胞，转染CIAP处理过的RNA混合物。图3为病毒感染复制过程与IVDN8丰度降低相关(实验二 );采用肌动蛋白mRNA作为内参；1 :A549细胞；2 :感染WSN毒株的A549细胞；3 :感染部分灭活病毒的A549细胞。图4为Northern印迹鉴定IVDN8的主要表达形式；1 =Riboruler RNA标准分子量；2 A549细胞RNA (30微克);3 :感染WSN毒株12小时后的A549细胞RNA (30微克)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列11所示。
【技术特征摘要】
1.一种shRNA，其生成SiRNAJy^ii siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列11所示。2.—种shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列13所示。3.编码权利要求1或2所述shRNA的DNA分子。4.含有权利要求3所述DNA分子的重组载体。5.抑制IVDN8表达的产品在制备药物中的应用；所述药物的作用为如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；(C)治疗和/或预防流感。6.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈吉龙，欧阳晶，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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