贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒。本发明专利技术提供了检测贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光PCR的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列4和序列5。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术的引物和方法具有检测时间短、灵敏度高和特异性强的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒。
技术介绍
包拉米虫(Bonamia)是严重危害贝类养殖业的主要疾病，包拉米虫病(Bonamiasis)为OIE规定的必报贝类传染病之一。该病虫体寄生在贝类的血淋巴细胞中，可引起相当高的流行率和死亡率。派琴虫(Perkinsus)派琴虫病能使贝壳不能闭合，套膜收缩，性腺发育抑制，生长缓慢，偶尔也会出现脓肿，死亡率可高达95%。这两种原虫是贝类最易感并且致死率也非常高的病，更为严重的是，人们食用了感染派琴虫的贝类还可能出现呕吐、腹泻等不适症状，因此迫切需要建立一种快速敏感的包拉米虫和派琴虫的检测方法，在感染早期就能检测出这些病原，从而为这些病的控制争取宝贵的时间。目前，国内检测这两种原虫的方法有组织和细胞学检测法、电镜检测法、原位杂交法和RFTM检测法等，但这些检测存在耗时长、敏感性较低、不易标准化等缺点，在实际应用中具有一定的局限性。荧光定量PCR技术实现了对模板的定量，而且具有敏感、特异、准确可靠、能实现多重反应和实时性好等特点。在实际应用中，当样品量非常大时，单重荧光PCR在成本和本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光PCR的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列4和序列5。

【技术特征摘要】
1.检测贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光PCR的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成； 所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列4和序列5。2.检测贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光PCR的试剂A，由权利要求1所述的引物组、探针A和探针B组成； 所述探针A的核苷酸序列为序列表中的序列3，且所述探针A的5’端标记有报告荧光染料A，3’端标记有淬灭荧光染料C ； 所述探针B的核苷酸序列为序列表中的序列6，且所述探针B的5’端标记有报告荧光染料B，3’端标记有淬灭荧光染料D。3.根据权利要求2所述的试剂A，其特征在于 所述报告荧光染料A为ROX， 所述报告荧光染料B为FAM ; 所述淬灭荧光染料C为ECLIPSE I ； 所述淬灭荧光染料D为ECLIPSE2 ； 所述试剂中所述引物1、所述引物2、所述探针A、所述引物3、所述引物4和所述探针B的摩尔比为2:2:2:1:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，张艳芳，谢丽基，刘加波，庞耀珊，范晴，罗思思，邓显文，谢志勤，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：