利用液相色谱检测系统定量口蹄疫抗原中146S含量的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种利用液相色谱检测系统定量口蹄疫抗原146S含量的方法，包括：首先用硫酸鱼精蛋白纯化病毒，然后用PEG6000浓缩病毒，浓缩后的病毒进行蔗糖密度梯度超速离心，使用液相色谱检测系统检测离心后样品在波长259nm处的吸收峰，最后根据公式C＝FRS/76Wb计算出146S的含量。本发明专利技术方法可用于各型口蹄疫抗原146S含量的测定，通过定量口蹄疫抗原中146S的含量能够指导口蹄疫疫苗的配制，间接评价疫苗的效力，这对于提升我国口蹄疫疫苗质量具有重大指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种定量口蹄疫抗原中146S含量的检测方法，特别涉及一种利用液相色谱检测系统定量蔗糖密度梯度离心样品中口蹄疫抗原146S含量的方法。属于生物检测领域。
技术介绍
在口蹄疫病毒样品中，存在4种大小不同的病毒粒子，最大的为完整病毒粒子，沉降系数为146S，稍小的一种颗粒为空衣壳，沉降系数为75S，还有一种为衣壳蛋白亚单位，沉降系数为12S，最小的一种为VIA抗原，沉降系数为3 4. 5S。在动物免疫中，与刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞有关的主要是口蹄疫146S抗原，146S含有口蹄疫病毒所有的中和位点，是口蹄疫病毒的有效抗原成分。动物只有免疫足够的146S抗原才能有效的刺激机体的免疫系统，产生良好的体液免疫和细胞免疫。146S的含量是评价疫苗质量好坏的一个重要标准，目前已经报道的口蹄疫抗原定量检测技术主要有1.细胞半数感染量(TCID50)测定2.补体结合试验(CFT) 3. ELISA定量口蹄疫146S含量4.蛋白层析分析法5.荧光定量PCR进行疫苗中抗原含量的定量等。方法I是对病毒核酸进行检测，除测定完整病毒粒子外，还测定了 146S裂解产物的核酸，不能完全反映病毒的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用液相色谱检测系统定量测定口蹄疫抗原中146S含量的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)病毒纯化：向待测的口蹄疫病毒样品中加入硫酸鱼精蛋白，使加入的硫酸鱼精蛋白的终浓度为0.5～2.0mg/ml，室温作用0.5～2h，5000～10000rpm离心15min～1h，分离得到上清液；(2)PEG6000浓缩病毒：按质量体积百分比计，向获得的上清液中加入NaCl，使NaCl的终浓度为2～6％，充分溶解后加入PEG6000，使PEG6000的终浓度为5～10％，2～8℃下搅拌混合1～16h，5000～10000rpm离心1～2h，获得口蹄疫病毒沉淀，使用TEN缓冲液重悬病毒沉淀，得到病毒浓缩液...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：倪春霞，徐树兰，李少英，赵炳武，辛俊宝，张澍，王钦富，武华，
申请(专利权)人：内蒙古必威安泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：