氨基糖苷类药物分子印迹固相萃取柱制造技术

本发明专利技术公开了一种氨基糖苷类药物分子印迹固相萃取柱，在柱形壳体内装填有分子印迹聚合物微球，分子印迹聚合物微球制备方法为：以3-氨基丙基三乙氧基硅烷或苯基三乙氧基硅烷为功能单体，正硅酸乙酯为交联剂，氨基糖苷类抗生素为模板分子，采用溶胶凝胶法进行水解缩合，在活化硅胶的表面形成Si-O-Si键的刚性网络结构，形成聚合物微球；通过模板分子的洗脱，即得到分子印迹聚合物微球。本萃取柱用于动物性食品中氨基糖苷类抗生素兽药残留检测前样品预处理时对目标物的分离与富集，对目标物能选择性吸附，具有分离、净化、富集操作步骤简单、快速，有机溶剂消耗少，重复使用次数高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽药残留检测技术的改进，具体涉及一种动物性食品中氨基糖苷类抗生素兽药残留检测前样品预处理用的分子印迹固相萃取柱，属于兽药残留检测
技术背景食品安全问题是关乎人类身体健康和社会和谐的重大问题，由于近些年来食品安全事件的频发，引起了世界各国对食品安全的高度关注。发达国家从上个世纪70年代起就开始关注兽药残留问题。目前，欧美等国家己经建立了完善的兽药残留监控体系，并且不断研究开发高效快速的检测方法，严格有关兽药残留法律法规，在此基础上设置药残技术性贸易壁垒，以此来阻碍其他国家的动物性食品的进入。2002年，我国农业部重新修订发布兽药在动物性食品中的最高残留限量，使规定限量的兽药达到134种，主要是抗生素类药物。 但是此项工作在我国仍然尚属起步阶段，相应的配套法规还不够健全，检测方法及标准尚待完善，检测监控体系、执法体系和资金来源以及舆论宣传等都还存在一些问题，所以当前我国对动物性食品开展兽药残留的常规检测水平比发达国家还有不少差距。鉴于兽药残留己经成为当前严重影响我国外贸出口和威胁人类健康的重要因素之一，因此提高全社会对兽药残留危害性的认识具有十分重要的意义，加强兽药残留的监测和控制迫在眉睫。氨基糖苷类抗生素是由单组份或多组份组成的糖基取代的氨基环醇类化合物，呈碱性，极性和水溶性较高。临床上常用于预防和治疗革兰氏阴性菌和结核杆菌等引起的感染。由于其抗菌谱广，而且价格低廉，因此在养殖业中常被大量应用，易在动物体内产生残留，进而危害人体健康。目前，动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法主要有微生物检测法，免疫学检测法和理化检测法等等。微生物检测法虽然价格便宜，操作简单，适用于样品的大批量筛选，但准确度和灵敏度较低，检测限达不到要求，且测定结果误差较大。免疫分析法易产生假阳性结果，阳性结果需要进行确证。鉴于微生物检测法和免疫学检测法的应用还存在诸多的局限与阻碍，目前在动物源性食品兽药残留的检测中，以色谱技术为代表的理化检测法已经被证明是最为有效的确证性检测手段之一。理化检测法主要包括高效毛细管电泳法(high performance capiIlaryelectrophoresis, HPCE)、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC)> 气相色谱法(gas chromatography, GC)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)> 液相色谱 / 质谱联用法(liquid chromatography/mass spectrometry, LC/MS)、气相色谱/质谱联用法(gas chromatograph/mass spectrometry, GC/MS)等。这些方法结果准确，而且可以同时进行多种药物的分析，在近几十年来得到了很大的发展。Cheryl等用毛细管电泳分析氨基糖苷类抗生素时，利用硼酸盐的络合作用通过紫外检测器得到链霉素和双氢链霉素检测线性范围0. 05-1.0mg/ml,同时对0.10 - I. 0mg/ml浓度范围的十二种氨基糖苷类抗生素能够得到较好的分离效果。Hoebus 等用六甲基二硅烷柱前衍生测定大观霉素，用填充柱气相色谱法，氢火焰离子化检测器检测，在75%-125%的浓度范围内，呈良好的线性关系。Andrzej等使用9-芴基甲基氯甲酸酯作为柱前衍生试剂，测定了肌肉、肝脏、肾脏中庆大霉素和新霉素检测限分别是O. lmg/Kg 和O. 2mg/Kg,庆大霉素的回收率为76%-86%，新霉素的回收率为77% - 83%。Daniel等利用 HPLC - MS/MS检测血液中新霉素，经乙腈处理后，得到新霉素的检测线性范围O. 2 - 50ug/ ml，检测限O. 2ug/ml。Michel等利用LC - MS/MS从灵敏度和色谱效率因素进行优化，得蜂蜜和牛奶中链霉素的检测限分别是2ug/ml和1 0ug/ml。但这些理化检测方法也存在着一定不足之处，例如在利用色谱检测畜牧业中使用较多的氨基糖苷类抗生素时检测方法相当复杂，灵敏度较低和通用性较差。究其原因，主要表现在以下方面(I)氨基糖苷类抗生素具有较高的水溶性和质子化倾向，易与组织成分结合或被玻璃器皿吸附，使得样品处理的回收率低；(2)氨基糖苷类抗生素异构体多，色谱分离过程复杂，分离条件不易控制；(3)分子结构缺乏紫外吸收的生色团，因此几乎都必须进行衍生化才能用紫外检测器(UVD)或荧光检测器(FLD)检测，而且由于活性基团多，衍生化条件通用性差，这便使样品前处理过程和分析过程更加复杂繁琐。随着高效、超高效兽药的不断开发利用，动物性食品中的药物残留检测将处于超微量水平，而且检测种类以及检测样本量也在不断增加，因此，迫切需要发展和应用快速、简便、特异性好、灵敏度高的检测技术。分子印迹固相萃取技术由于其自身具有对痕量组分强特异性的分离和富集能力，所以在基于色谱的兽药残留检测方面有着巨大的发展应用潜力。固相萃取(solid phase extraction, SPE)是兽药残留分析常用的样品处理与富集方法，是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，使之与样品的基质和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。在实际样品的分析测定中，被测组分往往以极低的浓度存在于复杂的机体当中，因此为了能用标准的分析技术检测被测组分，往往需要对样品进行预处理，以达到对被测组分富集及对样品基体纯化的目的。固相萃取因其具有易于实现自动化、灵活多变以及对环境友好等优点， 目前已被视为分析测定前对样品进行预处理的标准方法。为了使被测组分获得高的富集倍数并尽量纯化基本成分，要求用于SPE的吸附剂材料对被测物质要有更高的亲和力和选择性。然而传统的SPE的目标物与吸附剂之间的作用力是非特异性的，通常需对萃取和洗脱条件进行仔细选择，而且对不同基质的分离与分析物需要选择不同的柱填料，往往难于满足复杂样品的要求；而具有高度选择性的生物活性材料如免疫亲和剂又有制备麻烦、费时、 成本高、稳定性差及不宜在有机溶剂中使用等缺点。分子印迹聚合物独特的选择性和亲和力适应了这一要求，由于模板选择的多样性，使得分子印迹聚合物能广泛应用于各种物质的分离与分析过程，它对于目标物质的高度选择性也是普通SPE所不能比拟的。目前关于分子印迹固相萃取技术用于食品中兽药残留检测的文献报道已有很多。Crescenzi等采用分子印迹技术，以溴布特罗为模板分子将两个固相萃取柱串联直接对牛肝中的盐酸克仑特罗进行分离富集，从而避免了复杂的样品前处理过程接着采用液相色谱-串联质谱方法进行确证分析，方法的回收率大于90%,检测限低于O. lg/kg。Kootstra等用MISPE技术萃取了几种β -肾上腺素类受体激动药，并借助HPLC-MS技术对其进行了检测，结果表明9种化合物(溴布特罗、雪马特罗、西马特罗、克伦丙罗、克伦特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马喷特罗、 莱克多巴胺)均达到I μ g/kg的定量检测要求。Koster等采用硅胶纤维覆盖着可以再生的克伦特罗分子印迹材料，提取苯胺型β_肾上腺激素，使克仑特罗、溴布特罗、马布特罗、马愤本文档来自技高网...

【技术保护点】
氨基糖苷类药物分子印迹固相萃取柱，其特征在于：在柱形壳体内装填有分子印迹聚合物微球，柱形壳体的两端分别设有聚四氟乙烯筛板；所述分子印迹聚合物微球通过如下步骤制得：1）首先对硅胶进行活化；2）以3?氨基丙基三乙氧基硅烷和苯基三乙氧基硅烷之一或者两者任意比例的混合物为功能单体，正硅酸乙酯为交联剂，氨基糖苷类抗生素为模板分子，采用溶胶凝胶法进行水解缩合，在活化硅胶的表面形成Si?O?Si键的刚性网络结构，形成聚合物微球；3）通过模板分子的洗脱，将结合在聚合物微球中的模板分子洗脱下来，从而在硅胶表面留下对模板分子特异性识别的孔道结构，即得到所述的分子印迹聚合物微球。

【技术特征摘要】
1.氨基糖苷类药物分子印迹固相萃取柱，其特征在于在柱形壳体内装填有分子印迹聚合物微球，柱形壳体的两端分别设有聚四氟乙烯筛板；所述分子印迹聚合物微球通过如下步骤制得 1)首先对硅胶进行活化； 2)以3-氨基丙基三乙氧基硅烷和苯基三乙氧基硅烷之一或者两者任意比例的混合物为功能单体，正硅酸乙酯为交联剂，氨基糖苷类抗生素为模板分子，采用溶胶凝胶法进行水解缩合，在活化硅胶的表面形成Si-O-Si键的刚性网络结构，形成聚合物微球； 3)通过模板分子的洗脱，将结合在聚合物微球中的模板分子洗脱下来，从而在硅胶表面留下对模板分子特异性识别的孔道结构，即得到所述的分子印迹聚合物微球。2.根据权利要求I所述的氨基糖苷类药物分子印迹固相萃取柱，其特征在于所述溶胶凝胶法进行水解缩合具体步骤为将IM模板分子溶入60ml四氢呋喃和IOml双蒸水的混合溶液中搅拌30分钟，然后加入2M功能单体；电磁搅拌30分钟后再加入8M正硅酸乙酯，再搅拌30分钟加入Ig第I)步的活化硅胶；30分钟后加入I...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨眉，李贤良，侯长军，郗存显，李俊杰，王国明，张雷，霍丹群，
申请(专利权)人：重庆大学，重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：