人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂制造技术

本发明专利技术公开了一种人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程保护剂，保护剂由一种溶质蔗糖或氨基酸或其盐的一种用去离子水配制成保护剂溶液，所述的氨基酸或为赖氨酸或为其盐中的盐酸盐，或为酪氨酸或为其盐中的一种，或为天冬氨酸或为其盐中的一种，将其中一种溶质用去离子水配制成溶液，得到保护剂，在人抗凝血酶制剂冷冻干燥前加入保护剂后，可有效防止制剂在冷冻干燥过程中主要成分抗凝血酶的失活，保护抗凝血酶的活性存在，抗凝血酶制剂在冷冻干燥后有较好的制剂成形外观及复溶澄清度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药生物
，是人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程，可有效防止制剂中主要成分抗凝血酶失活的保护剂。具体涉及，在抗凝血酶制剂中加入蔗糖或氨基酸或其盐类，可在冷冻干燥过程(-40°C至30°C)能有效保护抗凝血酶活性，提高抗凝血酶制剂的产率。
技术介绍
人抗凝血酶(antithrombin, AT)是一种单链a 2糖蛋白，主要在肝脏中合成，由 423个氨基酸组成，相对分子约58. 2kD (千道尔顿)，正常血浆中含量约150mg/l。抗凝血酶可抑制凝血酶、活化的凝血因子IX、X、XI、XD的活性，占血浆抗凝血活性的70-85%，此外，其对血液中纤溶、激肽、补体系统也有一定的抑制作用，是一种多功能丝氨酸蛋白酶抑制剂。人体抗凝血酶活性缺乏，血栓形成风险增加。抗凝血酶缺乏可分先天遗传和获得性缺乏两种类型，先天性抗凝血酶缺乏是一种常染色体显性遗传病，其抗凝血酶活性水平为正常人的40-70%，其中有症状的患者，在欧美国家人群中比例约为1/2000-1/5000 ;获得性抗凝血酶缺乏症可由弥散性血管内凝血(DIC)、急性髓细胞样白血病、肾病综合征、溶血性尿毒性综合征、急性及慢性肝病、肠炎、血液透析、糖尿病等诱发。抗凝血酶缺乏患者，特别在妊娠过程、分娩或外科手术前后，需使用抗凝血酶制剂预防或治疗急性血栓的形成。截至目前，我国并没有成型的人抗凝血酶制剂上市，而使此类患者得不到有效治疗。为了便于人抗凝血酶制剂的保存和运输，其通常采用粉针剂型，因此，在制备过程中需经过冷冻干燥过程。但在整个冷冻干燥过程中存在各种应力，包括低温应力、冻结应力(包括枝状冰晶的形成、离子强度增加、PH改变、相的分离等)及干燥应力(移去蛋白质表面单层水分子)等，这些应力通常是直接或间接导致蛋白质变性的因素。人抗凝血酶是具有生物活性的蛋白，为了维持其功能，在冷冻干燥过程通常需要添加一定量的保护剂，但至今未见有关蔗糖或赖氨酸或酪氨酸或天冬氨酸用于人抗凝血酶制剂冷冻干燥保护剂的文献及专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了便于人抗凝血酶制剂的保存和运输，改善现有技术中人抗凝血酶制剂的冷冻干燥过程中，产生直接或间接导致蛋白质变性的问题，而提供一种人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中抗凝血酶制剂的保护剂。本专利技术的技术方案为 人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂，保护剂的溶质包括蔗糖或氨基酸或其盐，所述的氨基酸或其盐为赖氨酸或其盐、酪氨酸或其盐、天冬氨酸或其盐，将上述物质的一种作溶质用去离子水配制成溶液得到保护剂溶液，在人抗凝血酶制剂冷冻干燥前加入人抗凝血酶制剂中。上述的人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂，其浓度是蔗糖的质量百分浓度为O. 1-0. 8%，赖氨酸或其盐的质量百分浓度为O. 2-1. 0%，酪氨酸或其盐的质量百分浓度为O. 2-1. 0%，天冬氨酸或其盐的质量百分浓度O. 2-1. 0%，所述的赖氨酸盐为赖氨酸盐酸盐；上述的各质量百分浓度均为加入保护剂后，各组分分别在制剂中最后的浓度。本专利技术的有益效果为 本专利技术提供的保护剂使抗凝血酶制剂在冷冻干燥过程(_40°C至30°C)，抗凝血酶活性损失减少，回收率达86%以上，且冻干外观、复溶时间、复溶澄清度能够达到美国药典第32版(United States Pharmacopeia 32,USP32)和欧洲药典第7版(European Pharmacopoeia 7. 0，EP7. O)的标准。在抗凝血酶制剂加入O. 1-0. 8%蔗糖，O. 2-1. 0%赖氨酸或其盐酸盐，O. 2-1. 0%酪氨酸或其盐，O. 2-1. 0%天冬氨酸或其盐中的一种就能在冷冻干燥过程中有效保护抗凝血酶的活性，提高抗凝血酶制剂的产率。附图说明图I是抗凝血酶制剂冷冻干燥过程温度与时间变化曲线。说明在图I中横坐标代表冷冻干燥过程的时间(小时，h)，纵坐标代表冷冻干燥过程中的温度rc )，曲线代表随着冷冻干燥时间的推移冷冻干燥机冷冻干燥箱体内的温度变化。具体实施例方式下面结合实施例和附图对本专利技术的保护剂在抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的作用作详细说明， I.抗凝血酶的提取 Cohn氏法血液制品组分IV沉淀，柠檬酸钠和NaCl溶液25 °C条件抽提60min，抽提液6000rmp条件离心40min,取上清液；上清液O. 80 μ m和O. 45 μ m膜过滤,滤液经亲和层析，得到洗脱液，再经超滤除盐及浓缩，得到抗凝血酶浓缩物(彡6. 0IU/mg)。2.加入冻干保护剂，制备抗凝血酶冻干制剂 25-37°C条件，用去离子水，按质量百分比，配制浓度为4-16%的蔗糖、或赖氨酸盐酸盐，或酪氨酸，或天冬氨酸溶液，测定并用0. lmol/L-lmol/L的HCl或NaOH溶液调pH至6.0-7. 5 ;根据所需保护剂终浓度和抗凝血酶浓缩物的量添加保护剂， 例如抗凝血酶制剂所需蔗糖保护剂最终质量百分浓度为0. 4%，配制蔗糖溶液质量百分浓度为10%，抗凝血酶制剂质量为200g，则称取8. 3333g质量百分浓度为10%的蔗糖溶液与200g抗凝血酶制剂混合均匀； 再例如抗凝血酶制剂所需天冬氨酸保护剂终质量百分浓度为0. 8%，配制天冬氨酸溶液质量百分浓度为6%，抗凝血酶制剂质量为500g，则称取76. 9231g质量百分浓度为6%的天冬氨酸溶液与500g抗凝血酶制剂混合均匀。保护剂添加后除菌、分装，-40°C至30°C条件冷冻干燥。3.冷冻干燥后制剂成形外观观察 冷冻干燥后抗凝血酶制剂成形外观结果见表I。 表I不同保护剂抗凝血酶制剂成形外观本文档来自技高网...

【技术保护点】
人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂，其特征是保护剂的溶质包括蔗糖或氨基酸或其盐，所述的氨基酸或其盐为赖氨酸或其盐、酪氨酸或其盐、天冬氨酸或其盐，将上述物质的一种作溶质用去离子水配制成溶液得到保护剂溶液，在人抗凝血酶制剂冷冻干燥前加入人抗凝血酶制剂中。

【技术特征摘要】
1.人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂，其特征是保护剂的溶质包括蔗糖或氨基酸或其盐，所述的氨基酸或其盐为赖氨酸或其盐、酪氨酸或其盐、天冬氨酸或其盐，将上述物质的一种作溶质用去离子水配制成溶液得到保护剂溶液，在人抗凝血酶制剂冷冻干燥前加入人抗凝血酶制剂中。2.根据权利要求I所述的人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶生亮，曹海军，胡吉军，袁靖，李长清，陈云华，刘欣晏，杨刚，
申请(专利权)人：中国医学科学院输血研究所，贵州泰邦生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：