本发明专利技术公开了一种盐藻半连续培养方式及藻液中原生动物污染的消除方法，涉及海洋微藻养殖领域。盐藻的培养传统上使用f/2培养液配方，生长速度慢，产量低。使用优化培养基培养盐藻生长速度快、β-胡萝卜素含量高、成本低，产量能够提高76％。塑料薄膜悬浮吊带培养代替传统的开放水泥池培养盐藻，易于操作、不易污染、易于掌控、灵活多样、不易划破、安全可靠，透光性好，成本低，生长快，产量高。按每升藻液加入0.6克(NH4)2CO3的量加入(NH4)2CO3，处理藻液12小时能有效杀灭藻液中的尖鼻虫、游仆虫、纤毛虫、变形虫等原生动物，而且操作简便，对盐藻细胞伤害很小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及一种盐藻半连续培养方式及藻液中原生动物污染的消除方法。
技术介绍
盐藻(Dunaliella salina)是一种双鞭毛单细胞绿藻,可耐高盐度(20-300%。)。盐藻在胁迫条件下可大量积累胡萝卜素，最高可达干重的14%，为自然界所有生物之首，因此早在1966年，Massyuk就提出可大规模培养盐藻生产β -胡萝卜素；另外盐藻含有的甘油可达干重的40 %，具有生产甘油的潜在前途；盐藻还是一种良好的水产动物饲料。我国具有漫长的海岸线和众多的内陆盐湖，具有培养盐藻生产β_胡萝卜素得天独厚的自然条件。海水中无机碳的存在形式以HC03_为主(90% )，而游离的CO2不足10A。过去人们·一直认为，水体中游离CO2是藻类利用外源无机碳的唯一形式。张学成的工作表明，螺旋藻培养基中添加50-100mmol/LNaHC03，不仅可以满足螺旋藻生长的需要，而且有助于保持藻体生长的PH值。林惠民认为，NaHCO3可作为藻类生长的碳源。我的研究结果表明盐藻可以利用HC03_作为碳源。温度、光照、盐度、营养盐等对盐藻生长都有重要影响。氮在细胞代谢中是形成氨基酸、嘌呤、嘧啶、叶啉、氨基糖和胺化合物等的基本元素，因而氮是盐藻生长最重要的营养元素。有研究认为硝酸态氮是盐藻生长的最佳氮源。我的研究显示NH4NO3用作氮源无论对盐藻细胞密度的增加、叶绿素a的合成、β -胡萝卜素的积累等方面的效果均优于NaNO3和NH4Cl,这可能是两种离子作用互补的结果。海泥抽出液含有藻类生长所必需的各种无量元素和溶解有机物质及某些辅助生长物质；具有类似络合剂的作用。在培养液中加入海泥抽出液，实际是解决了微量元素供应的问题。碳水化合物是海泥的有机组成成分，可以补充碳源。陈振奋认为，海泥抽取液对牟氏角毛藻生长的促进作用强于维生素。我的研究表明，每升培养液添加3-10mL的海泥抽取液对盐藻生长有较好促进作用。人尿中95 %是水，5 %是可溶性无机盐，其中约2 %是尿素。在藻细胞的氮代谢中，氮必须以NH4+的形式与细胞内的碳水化合物衍生的酮酸作用生成氨基酸，再合成蛋白质。已经证实许多藻含有尿素酶，在它的催化作用下，尿素分解出氨被微藻利用，酶功能的差异是造成各种微藻利用尿素能力差异的主要原因。孙凌毅指出微藻对铵盐和尿素的利用强于硝酸盐。张贵杰等研究指出培养牟氏角毛藻以尿素效果最好，硝酸钠次之，氯化铵最差。张青田等认为以尿素为氮源培养隐藻效果强于氯化铵。本人研究证实2-5mL的尿液对盐藻生长有较好促进作用。目前，盐藻规模化培养存在的主要问题是藻细胞生长缓慢、倍增时间长、易污染。合适的培养基是实现盐藻高密度培养的基础。以前使用的培养基没有加入碳酸氢钠和海泥抽取液，但大量实验表明，盐藻除了能利用空气中游离的CO2，还能有效地利用培养液中的HC03_作为碳源。NaHCO3不仅缩短了盐藻的倍增时间，而且延长了盐藻的生长时间。我的实验表明，添加适量的NaHCO3和海泥抽取液及f/2维生素溶液能大大提高生长速度，盐藻的产量能提高76%。关于盐藻的培养方式，以前是采用开放水泥池。缺点是易污染，洗刷不便，现在我用塑料薄膜悬浮吊带培养代替开放水泥池，好处是成本低、易于操作、不易污染、易于掌控、灵活多样、不易划破、安全可靠。盐藻是耐高盐的广盐性单细胞绿藻，是自然界最耐盐的真核生物之一，可耐300%。的高盐度。在实验室培养中一般不会造成原生动物等的污染。但在室外水泥池大面积培养中常发生由耐高盐的原生动物(变形虫、卤虫、纤毛虫、盐生无泡纤虫)造成的污染,这些生物通过直接捕食盐藻或争夺营养盐或生活空间而使盐藻的生长繁殖受到严重压抑，有时盐藻的密度被限制在30X IO4ceIVmL以下(正常密度为70X 104_90X 104cell/mL)。研究发现，在较低的盐度(60-120%。)下盐藻生长最快，在这种盐度下，污染原生动物的种类和数量更多。因此，在盐藻的规模生产中，如何防治原生动物特别是变形虫造成的污染已成为一个亟待解决的问题。虽然较高浓度的(NH4)2CO3对盐藻和原生动物都有毒害作用，抑制其生长繁殖或直接将其杀死，但我的研究发现，与盐藻相比，原生动物对(NH4) 2C03更敏感，更易被杀死，这正是本专利技术的理论基础。(NH4)2CO3加入到培养基中发生电离并形成水解平衡(NH4) 2C03 — 2NH:+C032+C032++H20 — HCCV+OF HCO3^H2O — H2co3+or水解产生的大量0!1_使培养基p H值迅速上升，最高可达9. 5。(NH4) 2C03抑制或毒杀原生动物的原理可能是=NH4+的直接毒杀作用；迅速上升的pH值也可直接杀死原生动物。我的研究表明，用O. 6g/L的(NH4)2CO3处理培养基12小时对杀灭原生动物有极好效果。
技术实现思路
为了克服目前技术的不足，本专利技术提供了一种盐藻培养基配方，配方如下NH4NO3 40毫克，KH2PO4 I. 2毫克，NaHCO3 450毫克，九二 O植物生长刺激素(即赤霉素)6国际单位，f/2维生素溶液I毫升，f/2微量元素溶液I毫升，人尿2毫升，海泥抽取液5晕升，消毒海水1000晕升。其中f/2微量兀素溶液配方ZnSO4 · 4H20 23晕克，MnCl2 · 4H20178 毫克，CuSO4 · 5H20 10 毫克，FeC6H5O7 · 5H20 3. 9 克，Na2MoO4 · 2Η20 7· 3 毫克，CoCl2 · 6Η2012毫克，Na2EDTA 4. 35克，纯水1000毫升；f/2维生素溶液配方维生素B12O.5晕克，维生素B1 100晕克，维生素HO. 5晕克，纯水1000晕升。盐藻塑料薄膜袋半连续培养方法，包括如下步骤采用长度450厘米、周长200厘米的农用聚乙烯透明塑料薄膜袋培养，两头分别用纱布扎口。一端扎入I根充气管，末端连2个散气石，作散气用；塑料袋另一端扎入一根长约20厘米，直径6厘米的聚乙烯硬管，作出气管，此袋即为培养藻的容器。将此袋漂浮在盛有普通海水的水泥池中，水泥池长X宽X深=600厘米X 400厘米X 85厘米，塑料袋两端扎好后，用绳吊起，以防袋口沉入水中，向袋中加入O. 8-1. 4立方米的培养液并接入藻种，即可进行培养。每池吊袋6-8个。饱和卤水取自内陆盐湖，用蒸馏水稀释至盐度120%。，用次氯酸钠消毒法消毒，方法是I立方米海水中加入漂白液200-300mL，使海水中有效氯含量达到10-20mg/L，充气8-12小时后，用硫代硫酸钠中和余氯。硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定，直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止。按上述培养基配方加入营养盐，选纯种的对数生长期藻种接种，即生长良好、生活力旺盛、色泽鲜艳、无沉淀及无明显附壁现象的藻种，镜检无其它杂藻、原生动物等。接种密度3X 104-4X 104cell/mL，室外培养，自然光照射，温度28±3°C，光强5000-100001x为最佳，气泵充入空气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，充气管末端连两个气石。夜间停止充气，白天行间隔充气，即充气I小时，停I小时,重复进行。培养4-6天，密度达60 X 104-120 X 104cell/mL,采收藻液的1/3，补加相同体积的新鲜培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种盐藻培养基，其特征在于该盐藻培养基配方如下：NH4NO3？40毫克，KH2PO4？1.2毫克，NaHCO3？450毫克，九二0植物生长刺激素(即赤霉素)6国际单位，f/2维生素溶液1毫升，f/2微量元素溶液1毫升，人尿2毫升，海泥抽取液5毫升，消毒海水1000毫升；其中f/2微量元素溶液配方：ZnSO4·4H2O？23毫克，MnCl2·4H2O？178毫克，CuSO4·5H2O？10毫克，FeC6H5O7·5H2O？3.9克，Na2MoO4·2H2O？7.3毫克，CoCl2·6H2O？12毫克，Na2EDTA4.35克，纯水1000毫升；f/2维生素溶液配方：维生素B12？0.5毫克，维生素B1？100毫克，维生素H0.5毫克，纯水1000毫升。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王培磊，丰培金，
申请(专利权)人：王培磊，
类型：发明
国别省市：
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