本发明专利技术公开了鸡源枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的固体发酵菌剂的制备方法，选用枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株保藏编号：CGMCC??NO.6565；戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株保藏编号：CGMCC?NO.6566；两个菌株经过发酵，获得发酵产物即为固体发酵菌剂。将本发明专利技术的固体发酵菌剂直接添加入饲料，维持了肠道微生态健康并帮助肠道吸收饲料中营养成分，提高鸡群生长性能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鸡源枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的固体发酵菌剂及其制备方法和应用，属于微生物
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)属于芽孢杆菌属，杆状，染色均勻；芽孢0.8X1. 5^1. 8 μ m ;菌落源或不规则形，表面色暗；可起皱，形成奶油色或褐色；在培养液中可形成完整的膜，轻度浑浊。戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)属于片球菌书,球状，四联活成片状排列；细胞直径约Iym;在MRS培养基上生长良好，菌落生长在表面的呈规则的圆形，白色扁 平；在液体培养基中浑浊，菌体沉淀到培养基底部，呈白色。戊糖片球菌在厌氧或兼性厌氧条件下生长并产生乳酸等代谢产物，对酸有较强的耐受范围(PH4. 5-8)，且产生片球菌素(pediocin)以抑制有害肠道细菌的生长；但该菌对温度的耐受范围相对较低，高于50°C时细菌失活；健康鸡体温为41. 5°C，因此该菌只能作为微生物添加剂添加入饲料中，而不能经过高温，制粒等加工过程。而枯草芽孢杆菌属于不致病的需氧芽孢杆菌，其芽孢形式的活菌能够耐酸、耐高温，稳定性较好。研究发现，即使是物种相同不同株系的益生菌对肠道不同区域的特异性粘附有差，发挥的特异免疫作用也有差。微生物饲料添加剂具有特异的宿主范围，超出宿主范围对添加剂的作用效果不大。同时，在动物个体发育各个阶段，将乳酸菌和芽孢杆菌配合使用，不仅能有效抑制大肠杆菌、沙门氏菌的生长，同时产生各种消化酶(如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶)的活性，使对饲料的利用效率高于单一菌株。常见禽用益生菌使用方式主要是饮水或饲料。但如果用饮水方式添加时，容易受到空气、紫外线、自来水中消毒剂和金属离子等作用而降低活性甚至失活，且该种方式受到地域和气候的影响，对使用量无法控制直接影响发挥的作用。因此，制成微生物粉状制剂直接饲喂动物，受外界环境的影响更易控制并降低，对饲喂量的确定更易被普通养殖户掌握，便于推广。禽用饲料的主要原料成分主要包括玉米粉和豆柏；麦麸蛋白质含量很高，氨基酸组成可与整粒小麦相比，因此在禽用饲料中也占有一定比例；但其高纤维、低容重等特征限制其使用比例。通过微生物在固体发酵过程中提高对饲料原料中蛋白质的水解，形成更多可直接被动物肠道吸收利用的小肽(二、三肽)，对家禽生长起到促进作用；同时，益生菌以活菌形式进入肠道后，改变肠道微生物区系，产生的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等酶活作用也促进了对词料原料的水解和小妝的形成，提闻氣基酸、矿物兀素的吸收利用，从而提闻动物生长或生产性能。因此，通过模拟人工胃肠道环境优选出的枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌以饲料原料为培养基的固体发酵条件的优化，并混合两微生物菌剂饲喂鸡群，提高动物个体生长性能的应用意义重大。
技术实现思路
本专利技术提供两株从鸡盲肠分离得到、并通过人工胃肠道环境耐受试验的枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌，并直接以饲料原料为培养基优化固体发酵技术，制备得到含优选鸡源枯草芽孢杆菌、戊糖片球菌的微生物制剂及其混合菌剂的应用方法。鸡源枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的固体发酵菌剂的制备方法，菌种选择选用枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)SCS4562菌株和戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) SCS4560菌株，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) SCS4562菌株已于2012年9月14 H 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号=CGMCC NO. 6565，分类命名枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ；戍糖片球菌(Pediococcuspentosaceus) SCS4560 菌株已于 2012 年 9 月 14 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I 号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC NO. 6566,分类命名戊糖片球菌 Pediococcus pentosaceus ；;两个菌株经过发酵,获得发酵产物即为固体发酵菌剂。所述的发酵方法为(I)种子培养将所述的两个菌株经斜面活化后，分别在无菌条件下用接种环接 I 2环于40ml液体种子培养基中，以120转/分钟的转速、37°C恒温摇床培养48h，得一级种子液；以接种环接2 3环于同样配方的液体种子培养基中，以120转/分钟的转速、 37°C恒温摇床培养36小时，得二级种子液；(2)固体发酵培养以3% 10%质量比的接种量，将二级种子液接种于经121°C、 30分钟灭菌的固体发酵培养基中，按照料水比I : 0. 9-1. 5 g/ml和容量比为8% 24%在发酵瓶进行混合后置于恒温培养箱上，控制环境温度在35 42°C，并用带4层灭菌纱布封口 ；时常拍打发酵瓶壁，使上、中、下料舒散、混合，发酵72小时，发酵结束；(3)含枯草芽孢杆菌活菌的发酵产物晾干将发酵产物于干净搪瓷盘，加入两倍量饲用玉米粉(过40目筛)混合均匀，平摊散开放置于通风处自然风干，当含水率低于10% 时结束风干过程，收集产物并粉碎，过40目筛，所得粉末即为含枯草芽孢杆菌活菌的固体发酵产物；含戊糖片球菌活菌的发酵产物晾干将发酵产物于干净搪瓷盘，加入两倍量饲用玉米粉(过40目筛)混合均匀，平摊散开放置于通风处自然风干，当含水率低于10%时结束风干过程，收集产物并粉碎，过40目筛，所得粉末即为含戊糖片球菌活菌的固体发酵产物。枯草芽孢杆菌SCS4562斜面活化培养基为牛肉膏0. 5%，氯化钠0. 5%，蛋白胨I. 0%， 葡萄糖2. 5%，磷酸二氢钾0. 03%,补水至100% ;调节pH值至6. 8，置于37 °C培养箱培养 20h ；戊糖片球菌SC4560斜面活化培养基为葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨lg，酵母膏0.5%，吐温-80 0. 1%，磷酸氢二钾0. 025%,水合硫酸镁0. 05%,水合硫酸锰0. 025%,柠檬酸铵0.2%，乙酸钠0. 5%，加灭菌水至全部溶解，调节pH值至5. 4，置于37°C培养箱培养22h ；上述液体种子培养基为枯草芽孢杆菌(按质量百分含量计):2. 5%葡萄糖，1%蛋白胨，0. 5%氯化钠，0. 5%牛肉膏，磷酸二氢钾O. 03%,加灭菌水至全部溶解，调节pH值至6. 8 7，高压120°C灭菌30分钟后冷却备用；戊糖片球菌(按质量百分含量计)葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨lg，酵母膏O. 5%， 吐温-80 O. 1%，磷酸氢二钾O. 025%,水合硫酸镁O. 05%,水合硫酸锰O. 025%,柠檬酸铵O. 2%， 乙酸钠O. 5%，加灭菌水至全部溶解，调节pH值至5. 4，高压113°C灭菌30分钟后冷却备用；上述固体发酵培养基为枯草芽孢杆菌与戊糖片球菌相同，将玉米、豆柏、麦麸打碎过40目筛，按照玉米600g，豆柏300g，麦麸50g的比例，高压115°C灭菌15分钟，冷却后无菌条件下加磷酸缓冲液IOOOml混匀，自然pH即可。上述以优选鸡源枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的固体发酵优化生产工艺及其组合菌剂的应用中，步骤(2)所述接种量优选5%;步骤(2)所述料水比优选I : 1.1 g/ml;步骤(2)所述容量比优本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡源枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的固体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，菌种选择：选用枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus？pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）SCS4562菌株保藏编号：CGMCC？？NO.6565；戊糖片球菌（Pediococcus？pentosaceus）SCS4560菌株保藏编号：CGMCC？NO.6566；两个菌株经过发酵，获得发酵产物即为固体发酵菌剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘益平，孙静，李念珍，熊彦，朱庆，钟航，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：
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