一种金藻的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种金藻的培养方法，属于水污染控制领域。本发明专利技术以植物浸提液为有机物培养基，在室温，自然光照的条件下或置于人工气候箱中，对金藻藻种进行培养，采收后用于控制水华。吞噬水华藻类实验表明通过此方法获得的金藻可应用于治理水华。本发明专利技术培养金藻所用培养基的原材料易得、廉价、能源消耗少、产量高，且培养中无需特殊设备，易于实现；所培养金藻满足应用于治理水华藻类的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种藻类的培养方法，尤其是一种可吞噬多种水华藻类(如铜绿微囊藻，土 生席藻，雷氏衣藻)的金藻的经济型培养方法。
技术介绍
水体中氮磷含量超标，导致水体富营养化，进而引发藻类过度繁殖形成水华，使水体丧 失工农业利用、景观、养殖等功能。目前已有的抑藻方法中应用最广泛的是铜离子(Cu2+) 类杀藻剂。此类杀藻剂虽然杀藻效果显著，但同时也会杀死水体中其他的水生动植物，破坏 水生生态环境，并且会在水生生态系统中产生生物富集效应，或是增加湖泊底泥中有害物质 的含量。因此，以铜离子为代表的化学杀藻剂具有较大的生态危害。目前，较多研究者发现多种水生原生动物(鞭毛虫，变形虫以及某些混合营养型藻类)可通过捕食作用有效地控制 水华藻类的生长。本实验室在前期研究中从铜绿微囊藻培养液中分离获得一株金藻ZX1，分类命名为金藻 尸o敏/ooc/zramomy取，于2008年9月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，菌种保藏登记号为CGMCCNo.2662。该金藻能有效地吞噬包括铜绿微囊藻在内的多 种水华藻类。金藻ZX1属混合营养型藻类，既能在无机盐培养基中通过光合作用生长，也可 通过吸收溶解性或颗粒性有机物进行异养生长。常用无机盐培养基虽然成分相对稳定，但该 株金藻在几种常用无机盐培养基中的生长情况均不理想，可获得的生物量较低，而常用原生 动物的有机物培养基一般采用麦粒、大米等的浸提液，此类培养基可用于培养金藻ZX1，但 经济性不高。因此，需要寻求经济高效的有机物培养基，培养高密度的金藻藻种，以便于将 其应用于控制水华藻类。水生植物浸提液不仅营养全面、制备简单，而且原料获取容易、成 本低廉，方便大规模使用，同时可充分利用水生植物资源，因此，考虑使用水生植物浸提液 培养金藻。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种经济高效、易于实施的金藻培养方法。通过对比多种植物浸提 液中金藻的培养效果，确定适于金藻培养的植物种类，提出了金藻高效的培养方法。本专利技术的技术方案 一种金藻的高效培养方法，其特征在于它由以下步骤所构成(1) 金藻藻种的获得本实验室从铜绿微囊藻培养液中分离得到的金藻(尸Wm'ooc/wwm^w sp. ) ZX1 ，于2008年9月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心，菌种保藏登记号为CGMCCNo.2662j(2) 浸提液制备方法称取相应干重的植物植株并粉碎或切碎，按照0.5~50g/L的植物 干重浓度，用自来水浸泡4 6天，或者加热煮沸10~30分钟，制取植物浸提液，离心或过滤 去除植物残渣，高温灭菌后待用；(3) 培养条件温度20 3(TC，自然光照或置于人工气候箱中；(4) 采收在金藻生长稳定期进行采收，采用离心机进行固液分离，沉淀为金藻。(5) 吞噬水华藻类实验以铜绿微囊藻为例，检验所获得金藻对铜绿微囊藻的吞噬活性。步骤(2)所述植物为泽泻、芦竹、水柳、香蒲和芦苇中的一种或多种，包括新鲜植物植株，或收获后的茎或叶。本专利技术的优点为培养金藻所用培养基的原材料易得、廉价、能源消耗少、产量高，且培养中无需特殊设备，易于实现；所培养金藻满足应用于治理水华藻类的要求。 附图说明图1是金藻在六种浸提液中的生长曲线；图2是各植物浸提液培养所得金藻对铜绿微囊藻的去除率曲线(铜绿微囊藻和金藻的初 始密度分别为106， 5X104个.mL");图3是加热和浸泡两种方法制备的芦苇浸提液中金藻的生长曲线； 图4是不同干重浓度的芦苇浸提液中金藻的生长曲线；图5是相同DOC浓度植物浸提液中金藻的生长曲线。具体实施方式 实施例1选取泽泻、水柳、香蒲、芦竹和芦苇五种水生植物，称取相应干重的植物植株粉碎或切碎，按照10g/L的植物干重浓度，用水浸泡后加热煮沸20分钟，制取植物浸提液，离心或过 滤去除植物残渣，高温12rC灭菌30min后，用于培养金藻ZX1。同时制备10g/L (干重浓度) 的麦粒浸提液，作为常用有机物培养基，以麦粒浸提液中金藻ZX1的生长情况作为对照。向 六种培养基中分别投加相同初始密度的金藻藻种ZX1 (4乂103个.mU1)，置于人工气候箱中 培养(人工气候箱培养条件光暗比为14h: 10h，温度为25。C，相对湿度为75%，光照强度 为800-13001ux)。各培养液中金藻的生长曲线如图1所示。金藻在卢竹和泽泻的浸提液中的 生长状况不理想，培养2d后，金藻密度便开始下降。而金藻在水柳、香蒲和芦苇浸提液与其在麦粒浸提液中的生长曲线相似，培养5d后，均进入稳定期，最大密度均达到10S个，mL—1 以上。可知，在所选五种水生植物中，水柳、香蒲和芦苇较适合于作为金藻培养液的原料。取上述水柳、香蒲和戶苇浸提液培养至10d的部分金藻液，离心收获金藻，并投加到铜 绿微囊藻液(铜绿微囊藻和金藻的初始密度分别为106， 5X10A个.mL—1)中，在金藻的吞噬 作用下，铜绿微囊藻被迅速被清除，其密度去除率随培养时间的变化曲线如图2所示，培养 4d后各组中铜绿微囊藻密度去除率均在98%以上。实施例2分别用加热浸提法(同实施例l)和浸泡浸提法，制备干重浓度为10g/L的卢苹浸提液， 其中浸泡法步骤包括(1)称取lg干芦苇，切成l-2cm长短杆，(2)将其浸入100mL自来水 水中，浸泡5d，过滤去除残渣后，高温12rC灭菌30min后使用。向两种方法制作的芦苇浸 提液中，分别接种初始浓度约为1(^个'mL"的金藻ZXl，置于人工气候箱中培养(人工气 候箱培养条件光暗比为14h: 10h，温度为25°C，相对湿度为75%，光照强度为800-13001ux)。 两种情况下金藻的生长曲线如图3所示。从图中可以看出，在两种浸提方法所获的浸提液中， 金藻生长情况接近，无明显差异。因此，加热浸提法和浸泡浸提法均可用于制备植物浸提液。实施例3用加热浸提法(同实施例l)制备不同干重浓度的芦苇浸提液，干重浓度分别为0.5、 1、 5、 10、 20、 50g/L，金藻初始密度约为8.6X103个.mL—1，置于人工气候箱中培养(人工气 候箱培养条件光暗比为14h:10h，温度为25。C，相对湿度为75%，光照强度约为800-13001ux)。 各培养液中金藻生长情况如图4所示。在金藻藻种初始密度一定，培养时间相同的条件下， 芦苇浸提液浓度在0.5~20g/L范围内时，金藻密度随培养液浓度的增大而增大，但当浓度过 高(50g/L)时，培养液颜色过深，影响光照，金藻生长状况不佳。建议采用植物干重浓度约 为10~20g/L的浸提液培养金藻。实施例4采用实施例1中的加热浸提法制备水柳、香蒲和芦苇三种植物浸提液，将其稀释成DOC 浓度为300mg/L的培养液，用于培养金藻ZX1，藻种初始密度约为4乂103个"mL—1，置于人 工气候箱中培养(人工气候箱培养条件光暗比为14h:10h，温度为25'C，相对湿度为75%， 光照强度约为800-13001ux)。金藻ZX1的生长曲线如图5所示。可知三种植物浸提液在DOC 浓度相同的情况下，培养金藻ZX1的密度也较为接近，均在105cellS ，mU1以上。同实施例1， 检验金藻ZX1对铜绿微囊藻的去除效果，吞噬5d后，各组中铜绿微囊藻密度去除率均在99% 以上。权利要本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金藻的培养方法，其特征在于：以植物浸提液为有机物培养基，在室温，自然光照的条件下或置于人工气候箱中，对金藻藻种进行培养，采收后用于控制水华。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡洪营，张薛，黄璜，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]