一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用技术

技术编号:8318966 阅读:207 留言:0更新日期:2013-02-13 17:29
一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用,它涉及一种重组菌株的构建、表达纯化及其应用。本发明专利技术要解决现有金针菇免疫调节蛋白工程菌株表达率低,表达产物多为不溶性的包涵体,结构不确定以及菌体破碎、纯化工艺复杂不适合大规模生产应用的问题。本发明专利技术将金针菇免疫调节蛋白基因,以Transetta(DE3)作为宿主菌,构建重组菌株;再用IPTG诱导表达,通过溶菌酶法结合超声法处理后采用Ni-His·Band柱层析,Sephadex?G25凝胶层析柱方法脱盐,即完成重组菌株的构建及表达纯化。其用于制备预防或治疗过敏症的药物。其纯化过程简单而快速,适于规模化发酵生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用。
技术介绍
金针 免疫调节蛋白(fungal immunomodulatory protein from flammulinavelutipes,FIP-fve)是从金针菇中分离获得的非特异性免疫增强剂,对机体免疫具有双向调节作用,具有免疫调节、抗癌症、抗过敏等活性,特别是通过调节体内细胞因子含量和维持平衡的角度起到预防和治疗过敏症的目的,具有副作用小、标本兼治的优势。作为不含糖基的小分子单纯蛋白质,金针菇免疫调节蛋白方便操作与应用,是非常有前景的可应用于临床的药用蛋白,因此将其开发成抗过敏产品造福人类很有必要。但由于金针菇生产周期长,天然FIP-fve含量极微,产率不足90mg/kg,且分离成本极高,所以通过其他生物反应器生产该蛋白是其走上应用的有效途径。目前国内外几家研究机构也对其进行了原核和真核表达,但是普遍存在原核表达率低、多数形成不溶性的包涵体或可溶性蛋白所占比例较小,不能形成正确的二级结构或以不溶性的包涵体形式存在,需要变性复性处理影响生物活性,不适合开发应用。真核表达虽然有较高的表达率和能形成糖基化本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株,其特征在于能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株包含有插入了编码金针菇免疫调节蛋白的cDNA的大肠杆菌表达质粒pET30a(+),使得获得的重组表达质粒在转化到Transetta(DE3)大肠杆菌中时能够表达金针菇免疫调节蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:孔祥辉张介驰张丕奇戴肖东韩增华马庆芳刘佳宁党阿丽
申请(专利权)人:黑龙江省科学院微生物研究所
类型:发明
国别省市:

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