一种云芝糖肽及其脂质体制造技术

本发明专利技术公开了一种云芝糖肽及其脂质体，该云芝糖肽是经过水提，微滤，氯仿-正丁醇振摇除去游离蛋白质，分离纯化，醇沉，干燥制备得到的，还可以以云芝糖肽为原料，磷脂和胆固醇为膜材制备得到云芝糖肽脂质体。本发明专利技术云芝糖肽中云芝多糖含量可达到80%以上，云芝糖肽的颜色浅，水溶性好，并且很好地保留了云芝糖肽的生物活性；云芝糖肽脂质体使得云芝糖肽在体内能够被更好的吸收利用，并且通过脂质体的缓释作用，延长药物在体内有效血药浓度时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药物有效成分提取及应用
，涉及一种云芝糖肽及其脂质体，同时还涉及该云芝糖肽的提取、纯化方法及云芝糖肽脂质体的制备方法。
技术介绍
从云芝深层发酵获得的云芝多糖(PSK)是日本公司开发的一种抗恶性肿瘤的药物(商品名=Krestin)，用于治疗乙型肝炎、迁徙性肝炎、慢性活动性肝炎等，并适用于肝癌的预防与治疗。另一个从云芝深层发酵获得的云芝糖肽(PSP)能抑制人肺癌、胃癌、白血病、淋巴癌细胞及腹水癌等多种癌细胞的增生；并能显著提高负瘤者饮食，缓解疼痛，提高耐缺氧能力；消除因化疗或者放疗引起的白血球降低作用，提高机体IgG含量和吞噬指数等。上市的云芝糖肽或者云芝多糖制剂，目前其原料药的生产工艺流程为水提、浓缩、醇沉或不醇沉、离心、烘干。这种传统的多糖生产工艺存在能耗高、由于热浓缩、高温干燥产生的梅拉德反应导致多糖颜色深、多糖水溶性差、多糖生物活性低，或者消耗大量酒精增加成本、增加生产的不安全性，以及多糖含量低等缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述不足之处提供一种云芝多糖含量达到80%以上，颜色浅，水溶性好，尽可能的保留生物活性的云芝糖肽。本专利技术的另一目的是提供利用上述云芝糖肽制备得到云芝糖肽脂质体，该云芝糖肽脂质体使得云芝糖肽在体内能够被更好的吸收利用，并且通过脂质体的缓释作用，使药物在体内有效血药浓度维持较长时间。本专利技术的目的是通过以下方式实现的—种云芝糖肽，其特征在于该云芝糖肽是经过以下步骤制备得到的I)云芝菌丝体经粉碎后，在95 100°C条件下保温4 5小时制备得到云芝水提液；2)将云芝水提液通过截留分子量为40万 45万道尔顿的陶瓷膜微滤，得到微滤液；微滤采用的工作温度为40°C 50°C，工作压力进压为3. O 8. Obar，出压为I. O 5.Obar ；3)上述微滤液按照I 2:1的比例加入体积比为4 :1的氯仿正丁醇混合液，振摇，离心，取上层液，重复10 15次，40°C减压除去有机溶剂，分离纯化，得到纯化后的云芝水提液；4)上述纯化后的云芝水提液浓缩至50°C下相对密度为I. 10 I. 15，加入浓缩液2 4倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉6 8h，离心，收集并干燥醇沉物，即得云芝糖肽。优选步骤“2)”所述的微滤膜截留分子量为45万道尔顿，微滤的工作温度为40°C 45°C，工作压力进压为4. Obar,出压为3. Obar。步骤“3)”中所述的分离纯化优选采用模拟移动床色谱分离系统进行连续分离纯化，采用“4-7-2-7根”色谱柱的分配方式进行分离纯化，柱内装入分离用的树脂AB-8型大孔吸附树脂。 在所述的模拟移动床色谱分离系统进行四区循环分离时，采用进料流速为50ml 150ml/min,交换水洗流速为30ml 100ml/min ;顶水流速为20ml 100ml/min ;产品出口流速为55ml 160ml/min ;循环泵流速为IOOml 300ml/min。还可以设置再生水洗流速为30ml 100ml/min ;再生剂流速为30ml 50ml/min ；再生剂为浓度为5%的氢氧化钠溶液。本专利技术优选进料流速为120ml/min,交换水洗流速为50ml/min ;顶水流速为20ml/min ;再生水洗流速为lOOml/min ;再生剂氢氧化钠溶液流速为30ml/min ;再生剂浓度为5% ;产品出口流速为150ml/min ;循环泵流速为100mlml/min。步骤“4)”所述的干燥优选为冷冻干燥，条件为温度为30°C，压力为80Pa，物料厚度3 IOmm,优选物料厚度5mm。本专利技术所述的云芝糖肽作为活性成分可与磷脂及胆固醇制备云芝糖肽脂质体，该脂质体由以下重量份的原料制成磷脂10 40重量份，胆固醇I 20重量份，云芝糖肽35 45重量份。优选脂质体由以下重量份的原料制成磷脂15 30重量份,胆固醇10 20重量份，云芝糖肽35 40重量份。最优选脂质体由以下重量份的原料制成磷脂25重量份，胆固醇15重量份，云芝糖肽40重量份。其中，所述的磷脂可为卵磷脂、脑磷脂或大豆磷脂，优选大豆磷脂。上述云芝糖肽脂质体可与多种药学上可接受的辅料制备成制剂。辅料可包括稀释剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、填充剂等，所述的制剂优选为片剂、口服液剂、胶囊剂、颗粒剂等剂型。该药物制剂中的填充剂包括但不限于乳糖、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉、羧甲基淀粉、预胶化淀粉等；粘合剂包括但不限于淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、聚乙二醇6000、低粘度的羧甲基纤维素；崩解剂包括但不限于淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、海藻酸羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基淀粉钠等；润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、单硬脂酸甘油脂等。本专利技术制成的各种制剂中，以云芝多糖为药物活性成分，其有效量可以为制剂总量的10% 95%。本专利技术云芝多糖脂质体的制备方法可采用逆向蒸发法或薄膜超声法。逆向蒸发法以磷脂、胆固醇和云芝糖肽为原料，将磷脂、胆固醇溶解于原料10 30倍重量的氯仿或者乙醚中，加入待包封的浓度为25%的云芝糖肽水溶液，其中，水溶液有机溶剂(即氯仿或者乙醚)=1 :3 I :5 (重量比)，进行短时超声，直至形成稳定的W/0型乳状液，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加原料10 15倍重量的磷酸缓冲液(pH5. 8,0. Olmol/L)，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，通过超速离心法，除去未包入的药物，即得大单室脂质体；冷冻干燥，即得云芝脂质体。也可采用薄膜分散法以磷脂、胆固醇和云芝糖肽为原料，将磷脂、胆固醇和云芝糖肽溶解于原料10 30倍量的氯仿中，减压蒸发(35 60°C)至成膜，加入原料30倍重量的磷酸缓冲液(PH5. 8,0. Olmol/L)将膜洗下，加O. 5mm直径的玻璃珠数粒，搅拌30分钟，在25°C下放置3小时，使薄膜湿涨，再在25°C下，搅拌2小时，制成脂质体悬液。将上述的脂质体悬液用直径为2微米的微孔滤膜过滤，在将得到的滤液冷冻干燥，即得云芝脂质体。率。本专利技术云芝糖肽脂质体在260nm波长处测定多糖含量，从而得到包封率及突释,W、_ 芝J旨质体悬液中药物总量-游离药物的量ο — 云芝脂质体悬液中云芝多糖药物总量 X °-穷释率(%)- 透析液中云芝多糖含量1W%—ImL脂质体悬液中云脂多糖的含量本专利技术通过逆向蒸发法得到的云芝脂质体包封率能达到80%以上，且体外突释率较低，逆向蒸发法可包裹较大体积的水溶液(约60%，大于超声分散法约30倍)，更适于包裹水溶性药物及大分子生物活性物质。与现有技术比较本专利技术的有益效果I、云芝糖肽产品多糖含量高传统的云芝糖肽提取方法为水提、醇沉，得到的产品中夹裹一定量的葡萄糖、低聚糖及无机盐等，并且产品含有大量醇不溶性蛋白质，产品的多糖含量低，本专利技术制备云芝糖肽经过水提，微滤除菌体及温和的大分子蛋白质方法，有效除去游离蛋白质，而不破坏具有生物活性的糖结合蛋白，采用模拟移动床色谱分离系统进行分离纯化，分离用的树脂为AB-8型大孔吸附树脂，能进一步有效脱色、脱单糖、低聚糖及无机盐等，本专利技术云芝糖肽中云芝多糖含量达到80%以上，云芝糖肽产品的水溶性好，颜色较浅。2、提高云芝糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种云芝糖肽，其特征在于该云芝糖肽是经过以下步骤制备得到的：1)云芝菌丝体经粉碎后，在95～100℃条件下保温4～5小时制备得到云芝水提液；2)将云芝水提液通过截留分子量为40万～45万道尔顿的陶瓷膜微滤，得到微滤液；微滤采用的工作温度为40℃～50℃，工作压力：进压为3.0～8.0bar，出压为1.0～5.0bar；3)上述微滤液按照1～2:1的比例加入体积比为4：1的氯仿：正丁醇混合液，振摇，离心，取上层液，重复10～15次，40℃减压除去有机溶剂，分离纯化，得到纯化后的云芝水提液；4)上述纯化后的云芝水提液浓缩至50℃下相对密度为1.1～1.15，加入浓缩液2～4倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉6～8h，离心，收集并干燥醇沉物，即得云芝糖肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马猛华，徐国华，岳宗翠，王英燕，赵伏梅，秦建丽，
申请(专利权)人：江苏神华药业有限公司，
类型：发明
国别省市：