本发明专利技术属于微生物制药领域，具体涉及一种利用生产云芝糖肽时产生的副产物发酵液生产云芝胞外糖肽的方法，将液体发酵生产云芝菌丝体过程中产生的副产物发酵液减压浓缩后加入乙醇溶液并冷藏，取其沉淀物干燥即得云芝胞外糖肽。其步骤为：将所述副产物发酵液减压浓缩至比重为1.02-1.15，在浓缩发酵液中加入80wt％-100wt％的乙醇溶液，并使混合液中的乙醇含量达到70wt％-75wt％，将混合液0℃-8℃下冷藏4-24小时，过滤后将沉淀物在60℃-80℃条件下真空干燥。本发明专利技术采用醇沉法从生产云芝糖肽的副产物发酵液中提取具有免疫活性的云芝胞外糖肽，节约了资源，为企业获得了经济收益的同时也降低了排污压力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物制药领域，具体涉及。
技术介绍
按照国家标准WS3-228 (Z-047) -2003 (Z)中规定，云芝糖肽原料药是从担子菌纲多孔菌科真菌云芝Cov-I菌株的液体发酵菌丝体中提取得到的一种中药，能补益精气，健脾养心，对细胞免疫功能和血象有一定的保护作用，用于食管癌、胃癌及原发性肺癌患者放、化疗所致的气阴两虚、心脾不足证。云芝糖肽的活性成分为结合蛋白多糖，国家标准规定云芝糖肽中糖含量大于等于38.0%，蛋白含量大于等于11.5%，重均分子量大于等于40kd的多糖肽含量大于等于50%。经研究，云芝胞外糖肽也同样具有延长寿命和增强免疫 的功效，云芝胞外提取物5g/L对果蝇的平均寿命延长了 36. 38%。目前,云芝糖肽的生产工艺为液体发酵法,将云芝Cov-I菌株经过摇瓶振荡培养，种子罐、繁殖罐及发酵罐的通气培养后得到发酵菌液，再将发酵菌液过滤得到云芝菌丝体和发酵液。但是云芝糖肽的生产工艺只利用了云芝菌丝体，从中提取中药云芝糖肽，而把含有大量同样具有免疫活性的发酵液却作为废水经过处理后被排放了，其实发酵液中含有多糖肽、酚类、植物胆固类等化合物，十八种人体所需的氨基酸和维生素VB1JB2JB6及铜、铁、钾、锌等10多种人体所需的活性微量元素，如果就这样排放了，既造成了巨大的环保压力，又造成了不必要的资源浪费和经济损失。根据专利技术专利200710042036. 6公开的方法，为了降低重金属含量，利用去离子水替代饮用水发酵生产云芝菌丝体并提取云芝糖肽，以制备重金属含量低于国际食品卫生标准限量(英联邦食品卫生标准限量铅低于6. Oppm，汞低于O. 5ppm,镉低于O. Ippm,铬低于I. Oppm,铺低于I. Oppm,铜低于150ppm,锡低于230ppm,砷低于1.4ppm。)的高品质云芝糖肽，但是去离子水比饮用水贵，这样就增加了云芝糖肽的生产成本。而且目前的云芝糖肽发酵生产工艺也存在着收率较低、成本较高的弊端，这也导致了市场上的云芝糖肽原料药和云芝糖肽成品的价格居高不下，增加了使用者的经济负担。
技术实现思路
本专利技术的目的是从生产云芝糖肽过程中产生的副产物发酵液中提取云芝胞外糖肽，避免了资源浪费和经济损失，而且采用本法生产的云芝糖肽的生产成本低、收率高。本专利技术的技术方案如下将液体发酵生产云芝菌丝体过程中产生的副产物发酵液减压浓缩后加入乙醇溶液并冷藏，取其沉淀物干燥。所述副产物发酵液减压浓缩至比重为I. 02-1. 15。在浓缩发酵液中加入80wt% -IOOwt %的乙醇溶液，并使混合液中的乙醇含量达到 70wt% -75wt% ο所述冷藏温度为0°C -80C，冷藏时间为4-24小时。将沉淀物在温度为60°C _80°C条件下真空干燥。将活化的云芝Cov-I菌株,经过斜面培养、摇瓶培养、一级液体培养和二级液体培养至发酵培养的逐级扩大培养方法得到发酵菌液，再将发酵菌液过滤后得到云芝菌丝体和副产物发酵液。其中云芝菌丝体的收率为每升发酵菌液20g以上。所述一级液体培养基、二级液体培养基及发酵培养基所使用的碳源为葡萄糖、蔗糖、玉米粉、小麦粉、淀粉或糊精中的一种或几种；氮源为黄豆饼粉、花生饼粉或酵母粉中的一种或几种；其无机盐用磷酸氢二钾、碳酸钙或硫酸镁中的一种或几种；所述一级液体培养基的碳氮源总量为该一级液体培养基的3. 5% _5%，所述二级液体培养基的碳氮源总量为该二级液体培养基的 3.5% _5%，所述发酵培养基的碳氮源总量为该发酵培养基的6% -8%。所述每级液体发酵的接种量为该级液体发酵培养基的5% -10%，培养温度为25 V -30°C，通气量为O. 5v/(V · min)-I. 5v/ (v · min),发酵时间为48小时-72小时。以上云芝菌丝体发酵过程中使用的发酵用水均采用饮用水。所述云芝菌丝体经过水提醇沉法得到云芝糖肽，包括如下步骤，(I)用重量为云芝菌丝体2-4倍量的纯水清洗云芝菌丝体并过滤；用重量为云芝菌丝体3-5倍的纯水于90°C _98°C温度下提取2小时-6小时；分离得到提取液。( 2)将步骤(I)中的提取液经减压浓缩后采用醇沉法得到沉淀物，并取其干燥。该云芝糖肽的收率为每升发酵菌液2g以上。所述步骤(2)中的醇沉法为在提取液的浓缩液中加入80wt% -95wt%乙醇溶液，并使混合液中的乙醇含量达到70wt% -75wt%，将混合液置于0°C _8°C条件下冷藏4小时-24小时并过滤，将云芝糖肽沉淀物在60°C -80°C真空干燥，粉碎过筛，即得云芝糖肽。本专利技术的有益效果是本专利技术采用醇沉法从生产云芝糖肽的副产物发酵液中提取具有免疫活性的云芝胞外糖肽，节约了资源，为企业获得了经济收益；在采用液体发酵法生产云芝菌丝体时，通过增加培养基中的碳氮总量及其碳氮比的调控，显著提高了云芝糖肽和云芝胞外糖肽的收率，其中，云芝糖肽的收率从原来的lg/L提高至2g/L以上；本专利技术仅在云芝糖肽的提取阶段采用纯水，其他阶段的水源都采用饮用水，由此生产得到的云芝糖肽完全符合国际食品卫生标准，比现有技术公开的在发酵和提取全过程均使用去离子水更为经济、实惠、方便，降低了企业的生产成本。具体实施例方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步说明实施例II)云芝糖肽的生产过程取活化的云芝Cov-I菌株接种于PDA固体斜面培养基，28°C条件下培养6天，得到云芝斜面菌种；将云芝斜面菌种，接种于由2%葡萄糖、4%玉米粉组成的摇瓶液体培养基，28°C条件下,培养6天,摇瓶转速为200转/分钟,得到云芝摇瓶菌种；取云芝摇瓶菌种2L,接种于装有40L—级液体培养基的50L种子罐中，其中，一级液体菌种培养基含I %葡萄糖、2%玉米粉、1%糊精、1%黄豆饼粉、O. 075%硫酸镁和O. I %磷酸氢二钾，通气量为O. 5v/(V ·π η)，28 条件下培养48小时，得云芝一级液体菌种；取云芝一级液体菌种40L，接种于装有400L 二级液体培养基的I吨种子罐中，其中二级液体培养基由I %葡萄糖、2 %玉米粉、I %糊精、I %黄豆饼粉、O. 075%硫酸镁和O. I %磷酸氢二钾组成，通气量为O. 5v/(v -min),28°C条件下培养48小时，得云芝二级液体菌种；取云芝二级液体菌种400L，接种于装有4吨发酵培养基的5吨发酵罐中，其中发酵培养基含2%葡萄糖、2%玉米粉、3%糊精、1%黄豆饼粉、O. 05%硫酸镁和O. I %磷酸氢二钾，0-36小时通气量为O. 5v/ (v · min)，36-72小时通气量为I. 5v/ (v · mi n)，28°C条件下培养72小时，板筐压滤，得云芝菌丝体；滤液为副产物发酵液。以上发酵用水均为饮用水。用重量为云芝菌丝体3倍量的纯水清洗云芝菌丝体一次，板筐压滤，用重量为云芝菌丝体4倍的纯水，于98°C条件下提取4小时。板筐压滤，将分离到的提取液于70°C条件下减压浓缩至比重为I. 10，缓缓加入IOOwt %乙醇，并使混合液中的乙醇含量达到75wt%，将混合物4°C条件下冷藏12小时，然后过滤得到云芝糖肽沉淀，70°C真空干燥，粉碎过筛， 即得云芝糖肽。2)云芝胞外糖肽的生产过程将液体发酵云芝菌丝体过程中产生的副产物发酵液于60°C减压浓缩至比重为1.02，缓缓加本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用生产云芝糖肽时产生的副产物发酵液生产云芝胞外糖肽的方法，其特征在于：将液体发酵生产云芝菌丝体过程中产生的副产物发酵液减压浓缩后加入乙醇溶液并冷藏，取其沉淀物干燥。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：茅仁刚，袁萍，陈浙江，叶晓平，吕丹，王晓然，张泰，
申请(专利权)人：上海师范大学，上海新康制药厂，
类型：发明
国别省市：
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