本发明专利技术涉及一种高含量、高活性口服云芝糖肽及其制备方法和应用。这种高含量、高活性口服云芝糖肽在水中易溶，糖肽总量≥７０％，重均分子量在１０ｋｄ以上的多糖肽占糖肽总量８０％以上。其中糖含量５０％～８０％，肽含量１６％～３０％。制备方法为：（１）取云芝粗提取物混悬或溶解于８０～１００℃水中，提取分离云芝粗提取物溶液，或者用８０～１００℃热水提取云芝菌丝体或者云芝子实体制备云芝粗提取物溶液；（２）将云芝粗提取物溶液或者云芝粗提取物混悬液的ｐＨ值控制在４～８，过滤或离心分离得到澄清提取液，浓缩至比重为１．０５～１．３；（３）用水提醇沉法进行纯化。得到的产品比现有的云芝糖肽具有更有效的抗肿瘤作用，对骨髓功能和免疫功能的保护作用也更好，适用于肿瘤的预防和治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药品领域，具体涉及一种口服吸收的高含量、高活性 云芝糖肽及其制备方法和用途。
技术介绍
免疫增强剂云芝糖肽是从云芝深层发酵菌丝体中采用一次水提醇 沉法提取的糖肽粗品，是少数几种能口服吸收的糖肽类免疫增强剂之 一。能抑制人肺癌、胃癌、食道癌、白血病、腹水癌等多种癌细胞的 增殖，同时可有效提高人体免疫机能，增进食欲，缓解疼痛，提高耐 缺氧能力，降低放化疗引起的毒副反应，国内已经作为肿瘤的辅助治疗药物上市销售。中国专利89105471.5报道了 "一种云芝糖肽的生产 方法"，其提取方法为将云芝菌丝体破碎后，在90 10(TC热水中回 流浸取3 5小时，浸取液用l: 3~4 (V/V)比例的乙醇在0 4。C醇析6 8 小时，得醇析物，干燥即得黑褐色的云芝糖肽。以此工艺生产的云芝 糖肽在水中溶解性差，产品中糖含量为30~40%,肽含量为10~25%。另一种产品云芝胞内糖肽在水中易溶，国家食品药品监督管理局 颁布的国家药品标准WS广XG-021-2002中规定，其糖含量》35%，肽含 量》20%。其他供口服用云芝提取物中糖和肽的含量均低于云芝糖肽。中国专利200410103414. 3也公开了一种从云芝糖肽粗品中提取注 射用云芝糖肽的方法，得到了高纯度的云芝糖肽，其中多糖含量>75%， 蛋白含量《15%，平均分子量范围30Kd 300Kd。但是其产品及其纯化 工艺还是存在三方面不足第一，采用Savege法进行脱蛋白虽然可以脱除游离蛋白，但是也不可避免地脱除了具有生理活性的部分多糖肽 和多糖，造成了活性成分的损失、产品得率下降；第二，采用分子量 为30Kd和300Kd的超滤膜截留除去分子量小于30Kd和大于300Kd物质时 也造成了相应的活性糖肽的损失，产品得率进一步下降。而且分子量 小于30Kd或大于300Kd的糖肽也具有增强免疫活性和抗肿瘤作用，并无 研究表明其活性比分子量在30Kd 300Kd的糖肽弱。第三，经过多次纯 化后，虽然产品中多糖含量从35 40%提高到75%以上，但产品得率已 经成倍下降、成本成倍上升，所以只能作为注射用中药原料，且其糖 肽，特别是含有部分游离蛋白和多量不明杂质的糖肽类中药注射剂， 在注射给药时不可避免地产生过敏反应等毒副反应，增加了肿瘤患者 的临床风险。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种高含量、高活性口服云芝糖肽，易溶于 水，而且尽可能保留了云芝糖肽中的活性成分。本专利技术的第二个目的在于提供这种高含量、高活性口服云芝糖肽 的制备方法。本专利技术第三个目的在于提供这种高含量、高活性口服云芝糖肽在 制备抗肿瘤药物方面的应用。一种高含量、高活性口服云芝糖肽，糖肽总量>70°/。；经HPLC 凝胶柱层析、GPC软件统计分析，产品中重均分子量在10Kd以上的 多糖肽在占糖肽总量中的含量>80%。这种口服云芝糖肽尽可能保留 了云芝糖肽中的活性成分，而且在水中易溶。其中糖含量为50 80%，肽含量为16 30%。这种高含量、高活性口服云芝糖肽为云芝子实体或发酵生产的云 芝菌丝体中提取纯化的产物，既可以从云芝子实体或菌丝体中直接水提醇沉纯化得到，也可以从市售的云芝糖肽、云芝胞内糖肽、云芝胞 外糖肽等云芝提取物粗品中纯化得到。由于云芝糖肽中的多糖富含羟 基，且具有三维立体结构，在乙醇沉淀时很容易与色素等物质结合而 形成共沉淀，带进了大量杂质，降低了产品中多糖肽的含量，影响了 产品的质量。为了减少杂质与多糖共沉淀的形成，提高产品质量，本专利技术采用调节pH、微孔滤膜精密过滤或离心分离提取液、减压浓縮、边搅拌边缓慢加入乙醇进行沉淀且搅拌平衡一定时间、多次水提醇沉 进行纯化的技术方案。还可进一步采用膜滤和柱层析技术进行精制得 到更高纯度的云芝糖肽。这种高含量、高活性口服云芝糖肽制备方法如下(1) 取云芝粗提取物混悬或溶解于80 10(TC热水中，提取分离 云芝粗提取物溶液，或者用80 10(TC热水提取云芝菌丝体或者云芝子 实体制备云芝粗提取物溶液；(2) 将云芝粗提取物溶液或者云芝粗提取物混悬液的ph值控制 在4~8，过滤或离心分离得到澄清提取液，浓縮至比重为1.05~1.3;(3) 采用水提醇沉法进行纯化，获得浓縮料。步骤(1)中所述的云芝粗提取物包括云芝糖肽、云芝胞内糖肽、 云芝多糖以及云芝菌丝体或子实体的水提取物。步骤(2)中所述的过滤为0.1 5nm的微孔滤膜精密过滤。所述 的离心速率为4000—12000rpm。步骤(3)中所述水提醇沉的方法为(a) 边搅拌边加入1~5倍体积80%~100%的乙醇，继续搅拌0.5 2小时；(b) 过滤或离心分离得到沉淀，挥干乙醇；(c)用1 5倍重量水复溶沉淀，重复步骤(a)和(b) 1~2次。 将步骤(3)得到的产物进行干燥、粉碎，或者采用膜分离技术或柱层析技术进行精制后干燥、粉碎。所述的膜分离技术为透析和超滤；所述柱层析技术为DEAE-纤维素柱、DEAE-S印hadex柱、S印hadex凝胶柱、Saphrose凝胶柱、Biogel凝胶柱或大孔吸附树脂柱层析分离技术。所述的干燥为喷雾干燥、减压干燥、冰冻干燥或常压干燥。这种高含量、高活性口服云芝糖适用于肿瘤的预防和治疗，可应 用于制备抗肿瘤药物，单用和联用环磷酰胺抗瘤时，本品比现有的云 芝糖肽具有更有效的抗肿瘤作用，对骨髓功能和免疫功能的保护作用 也更好。与医药学上可接受的原辅料复配后制成各种口服制剂，包括 散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液等常释和缓释制剂。本专利技术的高含量、高活性口服云芝糖纯度高，制备工艺简单、成 本低，抗肿瘤效果及对骨髓和免疫功能的保护作用更好。具体实施方式举以下实施例的目的是为了更好地理解本专利技术，本专利技术不受以下 实施例的限制。 实施例1取云芝糖肽10kg，加100L水，在9(TC溶解提取2小时，调节pH 4-8，以0.5um的微孔滤膜精密过滤得到澄清提取液。残渣重复提取 2次，澄清提取液合并，减压浓縮至密度为1,2;边搅拌边缓慢加入3 倍体积95%的乙醇进行沉淀，继续搅拌l小时，离心分离沉淀，60°C 减压干燥，粉碎，即得高含量、高活性口服云芝糖肽。lg该糖肽可完 全溶解于5ml水中，其中糖肽总量为75.6%，糖含量为52.4%，肽含 量为23.2%，分子量在10kd以上的多糖肽占糖肽总量84.6%。实施例2取云芝多糖10kg，加40L水，IO(TC溶解提取0.5小时，调节pH4， 5000转/分高速离心分离得到澄清提取液。残渣重复提取3次，澄清 提取液合并，减压浓縮至密度为1.05，边搅拌边缓慢加入4倍体积80% 的乙醇进行沉淀，继续搅拌2小时，离心分离沉淀，50。C减压干燥燥， 粉碎，即得高含量、高活性口服云芝糖肽。lg该糖肽可完全溶解于5ml 水中，其中糖肽总量为72.2%，糖含量为51.9%，肽含量为20.3%，分 子量在10kd以上的多糖肽占糖肽总量81. 8%。实施例3取云芝胞内糖肽10kg，加200L的水，80。C溶解提取6小时，调 节pH8，过5"m的微孔滤膜精密过滤得到澄清提取液。残渣重复提 取1次，澄清提取液合并，减压浓縮至密度为1.3，边搅拌边缓慢加入 2倍体积无水乙醇进行沉淀，继续搅拌0.5小时，过滤分离沉淀，冷冻 干燥，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高含量、高活性口服云芝糖肽，其特征在于，糖肽总量≥７０％，重均分子量在１０ｋｄ以上的多糖肽在糖肽总量中的含量≥８０％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁萍，茅仁刚，张雷，张华，周海宾，刘瑶，
申请(专利权)人：上海师范大学，上海新康制药厂，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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