【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种大量制备2-0位脱硫酸化酶、3-0位硫酸基转移酶的方法。属生物医药领域。
技术介绍
肝素应用于临床的历史已有近百年，主要用于抗凝血和抗血栓。然而肝素在临床上尚存有较大的副作用，有时甚至可能导致致死性颅内出 血。这使得它的应用受到很大的限制。尽管这样，临床上仍然广泛用于治疗血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、体外循环、血液透析。人们试图通过血液监测、减小剂量、局部用药或使用新的剂型等以降低出血的危险性，从而最大限度的发挥肝素的治疗作用。但目前都无法从根本上解决这个问题。然而硫酸乙酰肝素在很大程度上克服了肝素应用的副作用，同时具有类似肝素的抗炎、抗血栓和降血脂等生物作用。硫酸乙酰肝素又叫葡萄糖胺聚糖链，是一类具有电负性的大分子线性聚合物。它广泛存在于哺乳动物以及一些植物体内。该聚合物在机体内不能游离存在，而是通过共价键结合在核心蛋白的丝氨酸与甘氨酸残基上共同组成硫酸乙酰蛋白聚糖。在肝素的基础上进行脱硫酸化与硫酸化得到硫酸乙酰肝素成为现在研究的一个热门研究。肝素的脱硫酸化修饰主要是在肝素结构的2-0-硫酸基、3-0-硫酸基、N-硫酸基、6-0-硫酸...
【技术保护点】
一种大量制备2？O位脱硫酸化酶、3？O位硫酸基转移酶的方法，是利用实验室保藏的分别携带2？O位脱硫酸化酶基因、3？O位硫酸基转移酶基因的两种质粒，首先通过转化得到大肠杆菌重组工程菌；然后在摇瓶中进行了两种重组菌产酶条件的优化，得到了最佳的诱导前菌体浓度、诱导剂IPTG.浓度、诱导温度、诱导时间，同时制备了大量的2？O位脱硫酸化酶与3？O位硫酸基转移酶；最后将粗酶通过镍柱(Ni？NTA？Agarose？Fast？Flow)进行纯化，快速得到了纯度高达90％的纯酶；在摇瓶优化的基础上，将工程菌接种到高密度发酵培养基中进行高密度发酵，采用提高单位体积菌体浓度的方法进一步提高了两种酶的产量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈敬华，周斌，刘卫超，王敏，程咏梅，滕丽萍，邓超，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。