一种高密度培养基因工程菌制备褐藻胶裂解酶的方法技术

技术编号:8188098 阅读:301 留言:0更新日期:2013-01-09 23:47
一种高密度培养基因工程菌生产褐藻胶裂解酶的方法:将褐藻胶裂解酶基因工程菌从保藏的甘油管接种于LB液体培养基中,35-37℃,150rpm,培养10-12h,得到活化液菌种;将活化液菌种转接至LB种子培养基中,在35-37℃,150rpm,摇瓶培养10-12h,得到种子液;将2%种子液转接至含有3L发酵培养基的5L发酵罐中,进行高密度发酵培养,待发酵到第4h时开始流加补充培养基;并在发酵到第4.5h后进行IPTG诱导;发酵过程中罐内参数设定为:温度35-37℃,转速280rpm,溶氧40%-50%,发酵24h得到发酵液;将发酵液在4℃下、经12000rpm/min离心10min去除上清液后收集菌体,将收集的菌体在冰浴下进行超声波破碎处理;随后将超声波破碎液在4℃下、12000rpm/min离心10min去除细胞碎片沉淀,收集上清液得到粗酶液。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种裂解酶的制备方法,尤其是。
技术介绍
褐藻胶又称海藻酸钠,它是从海带、马尾藻、巨藻等褐藻植物中提取的天然高分子多糖聚合物,是褐藻细胞壁的主要组成物质之一;由a -L-1, 4-古罗糖醛酸(G)及其差向异构体β-D-1,4-甘露糖醛酸(M)组合而成。褐藻胶分子中包含三种结构区域多聚古罗糖醛酸(poly(G))、多聚古罗糖醛酸(poly(M))和杂聚的随机序列(poly(MG))。近年来,随着海洋生物制药业的蓬勃发展,海藻多糖的研究日益受到重视,并且随着海藻寡糖具有促生长、增强免疫力、抗肿瘤、抑菌、抗氧化、整肠、解毒、降血糖血脂、免 疫调节等多种生理活性的发现,海藻寡糖在生物医药领域巨大的应用潜力也越来越受到关注。褐藻胶裂解酶能通过消除反应裂解褐藻胶的糖苷键,产生在非还原末端有C4, 5不饱和双键且在23(T240nm有强吸收功能的不饱和糖类醛酸、以及饱和单糖醛酸。根据降解褐藻胶部位与片段的不同可以分为三大类专一性水解聚古罗糖醛酸的1,4-α_古罗糖醛酸裂解酶(EC 4. 2. 2. 11);专一性水解聚甘露糖醛酸的1,4-β -甘露糖醛酸裂解酶(EC 4.2.2.3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用褐藻胶裂解酶基因工程菌的高密度培养生产褐藻胶裂解酶的方法步骤如下:1)将褐藻胶裂解酶基因工程菌从保藏的甘油管接种于LB液体培养基中,35?37℃,转速为150r/min,培养10?12h,得到活化液菌种;2)将上述活化液菌种转接至LB种子培养基中,在35?37℃,转速为150r/min,摇瓶培养10?12h,得到种子液;3)将上述2%种子液转接至含有3L发酵培养基的5L发酵罐中,进行高密度发酵培养,待发酵到第4h时开始流加补充培养基;并在发酵到第4.5h后进行IPTG诱导;发酵过程中发酵罐的参数控制为:温度35?37℃,转速280r/min,溶氧40%?50%,发酵24h,得到发酵液;...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:汪立平李安雪
申请(专利权)人:上海海洋大学
类型:发明
国别省市:

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