壳聚糖-5’ppp-NS1shRNA纳米复合物的制备方法技术

本发明专利技术属于纳米分子的合成及基因工程技术领域，具体涉及到壳聚糖-NS1shRNA纳米复合物的制备方法。把壳聚糖纳米颗粒、NS1shRNA按一定的比例混合，通过静电的作用形成壳聚糖-NS1shRNA纳米复合物，利用壳聚糖作为载体把病毒的NS1基因、shRNA导入哺乳动物细胞中，和宿主细胞的模式识别受体RIG-I样受体(RIG-I?likereceptors,RLRs)结合，能结合shRNA并激活下游的信号级联反应,激活天然免疫系统和乳细胞内抗病毒的干扰素通路，诱导I型干扰素的产生，最终清除感染体内的病毒。本发明专利技术使用壳聚糖作为基因药物的生物体外及生物体内给药系统，取得了很好的效果，能应用于shRNA的体内外转染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于纳米分子的合成及基因工程技术，具体涉及到壳聚糖-5’ PPP-NSlshRNA纳米复合物的制备方法。
技术介绍
维甲酸诱导基因I (retinoic acid inducible gene I，RIG-I)为我国学者于 1997年从人急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞株中首次克隆。RIG-I作为胞质shRNA受体，通过其helicase结合shRNA和ATP，ATP水解致RIG_I_shRNA 构象改变，暴露其CARD，与下游接头蛋白质干扰素启动子刺激因子-I (IPS-I)的CARD相互作用，下传信号，激活NF-KB和IRF等转录因子，诱导I型干扰素的表达和分泌，引发抗病毒天然免疫应答。但裸露的shRNA进人组织后迅速被组织内的RNase水解，因此需要构建一个能有效保护RNA并能被组织更好吸收的RNA运载体系。本专利采用分步法制备的RNA壳聚糖纳米粒，制备方法简单、可行，制剂稳定性，对包裹的RNA具有较好的保护作用。其实验结果显示壳聚糖与RNA形成表面带正电荷的纳米颗粒，使RNA被保护不受RNase的降解；本文档来自技高网...

【技术保护点】
壳聚糖？5’ppp？？NSshRNA纳米复合物的制备方法，其特征是：第一步？壳聚糖纳米颗粒的制备：1）、微乳液A的合成：22？mL环己烷；8？mL己醇；200？μL？壳聚糖；400？μL壳聚糖？？Rh；2.6？mL？Triton？X100？混合，搅拌，直到得到溶液清晰，得到微乳液A；2）、微乳液B的合成：在离心管中放入MW？为？150.09的100？μL？NHS？()；MW？为？115.09的200？μL酒石酸；MW？为？190的300？μL？EDC离心使溶液应该达到0.2M，静止20分钟，然后把全部溶液放到微乳液A中去，搅拌过夜，至少16小时，得到微乳液B；3）、在上述微乳液B中溶液中加入1...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽辉，赵赫楠，韩德明，贾凯莉，王丽丽，
申请(专利权)人：长春理工大学，
类型：发明
国别省市：