长效药物制剂制造技术

本发明专利技术涉及长效药物制剂及其用于制备在持续的时间内向有需要的个体提供治疗性多肽的药物的用途：所述治疗制剂包含经遗传修饰的微器官，其中所述微器官是用辅助病毒依赖型腺病毒载体体外转导的真皮微器官，所述载体包含与一个或多个调节序列可操作地连接的编码治疗性多肽的核酸序列，其中所述一个或多个调节序列包含CAG启动子，其中将所述微器官离体保存在培养基中1-8周的时间，其中所述治疗性多肽选自红细胞生成素和干扰素α，并且其中在植入所述长效制剂后，所述制剂：a.将所述治疗性多肽在血清中的表达水平比植入前的基础水平提高，所述提高维持超过一个月；和/或b.将功能标记比基础水平提高至少5%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及长效治疗制剂及其使用方法，所述制剂包含含有载体的经遗传修饰的微器官，所述载体包含与一个或多个调节序列可操作地连接的编码治疗性多肽如红细胞生成素或干扰素α的核酸序列。
技术介绍
治疗剂可以口服、经皮、通过吸入、通过注射或通过缓释贮库递送。然而，递送方法受限于药剂在接受者中经历的过程、频繁给药的需要和对可用分子尺寸的限制。对于一些方法，治疗剂的量在给药间变化。 涉及将期望的核酸序列/片段亚克隆到载体中(所述载体随后用于修饰特定宿主细胞，所述宿主细胞应产生所需的蛋白质以用于进一步纯化步骤)的蛋白质生成技术在表达的蛋白质的量、蛋白质分泌、翻译后修饰(例如糖基化和蛋白质的精确折叠)等方面受到限制。而且，即使能够获得高水平的蛋白质生成，之后也必须产生大量的重组蛋白并纯化至不含污染物。纯化路线的开发是非常漫长的过程。而且一旦获得纯化的重组蛋白，就必须进行进一步配制以使其稳定和可接受地引入动物或人类中。此外，即使经配制，纯化的重组蛋白仍然由于保持和储存限制而具有有限的贮存期限；因此经常需要反复纯化和配制更多的蛋白质。开发适当制剂的过程也是耗时、困难和昂贵的。因此，广泛认识到需要长效的基于蛋白质的治疗分子，其具有必需的翻译后修饰以保留它们的生物活性，其可被便宜且快速地制备，而不需要通常与获得高水平重组蛋白相关的辛苦且昂贵的方法。一些研究者已试图通过基因治疗获得重组基因产物的体内表达。通常将病毒载体用于体内转导细胞以表达重组基因产物。这些基于病毒的载体具有有益的特性，例如感染靶组织的天然能力。然而，基于逆转录病毒的载体需要在靶组织的基因组内整合以允许重组产物表达(具有激活固有癌基因的潜能)并且只能用于转导活跃分裂的组织。病毒载体通常也不能经受长期转基因表达，这可能至少部分是由于它们因再次宿主免疫应答而被消除。因此，本领域仍然需要具有持续几周或更长时间的一贯高表达水平的重组基因产物制剂和使用那些制剂来治疗疾病的方法。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，从而所述制剂将所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，且所述提高维持超过一个月。在一个实施方案中，所述载体是辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenovirus vector)。在一个实施方案中，所述治疗性多肽是红细胞生成素，而在另一实施方案中，所述治疗性多肽是干扰素α，在一个实施方案中所述干扰素α为干扰素a 2b。在另一实施方案中，本专利技术提供在持续的时间内向有需要的个体提供治疗性多肽的方法，所述方法包括提供一个或多个遗传修饰的微器官，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体；并将所述经遗传修饰的微器官植入所述个体中，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，从而所述制剂将所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，并将所述提高维持超过一个月。在一个实施方案中，所述载体是辅助病毒依赖型腺病毒载体。在一个实施方案中，所述治疗性多肽是红细胞生成素，而在另一实施方案中，所述治疗性多肽是干扰素α，在一个实施方案中所述干扰素α为干扰素a2b。在另一实施方案中，有需要的个体患有贫血。在另一实施方案中，有需要的个体患有感染。在另一实施方案中，有需要的个体患有癌症。在另一实施方案中，本专利技术提供与SEQ ID No: I的同源性超过85%的核酸序列、包含这样的核酸序列的载体、以及包含这样的载体的细胞。 在另一实施方案中，本专利技术提供与SEQ ID No:2的同源性超过85%的核酸序列、包含这样的核酸序列的载体、以及包含这样的载体的细胞。附图简述图I显示由本专利技术的制剂体外产生的重组优化的人干扰素a (IFNa)的水平。图2显示由本专利技术的制剂体外产生的重组人红细胞生成素(hEPO)的水平。HD-Ad-CAG-wt-hEPO GMMO 滴定法(A)。以 HD-Ad-CAG-wt-hEPO 病毒1:25 ; 1:100 和 1:1000稀释度的渐增稀释度转导微器官。将Ad5/CMV/wt-hEP0稀释成1:10和1:50的工作浓度。由两种不同皮肤H-I和H-2产生的GMMO之间的比较⑶。以HD-Ad-CAG-wt-hEPO 1:25转导微器官。条形指示通过ELISA测量的在每3-4天收集和替换的培养基中的hEPO浓度。图3显示得自包含表达EPO的无肠腺病毒的优化制剂和包含表达EPO的腺病毒_5的微器官的峰值体外红细胞生成素(EPO)表达水平的百分数。用HD-Ad-CAG-hEP0以1:25或用Ad5/CMV/hEP0以1:10转导微器官。图4显示得自包含优化的和非优化的表达EPO的无肠腺病毒的制剂的体外红细胞生成素(EPO)表达水平。以1:100病毒颗粒的工作稀释度转导微器官。条形指示通过ELISA测量的在每3-4天收集和替换的培养基中的hEPO浓度。图5显示得自包含CAG或CMV启动子下游的表达EPO的无肠腺病毒的制剂的体外红细胞生成素(EPO)表达水平。图6显示由本专利技术的制剂在SCID小鼠体内(A)和体外⑶产生的重组人红细胞生成素的水平和血细胞比容的相关变化(A)。用GMMO对十只小鼠/组进行皮下植入。显示在用腺病毒-hEPO、辅助病毒依赖型腺病毒-hEPO和辅助病毒依赖型腺病毒-优化hEPO转导的GMMO和用非转导的GMMO植入的小鼠血清中测量的hEPO水平(mU/ml)和相应的血细胞比容％。每10天进行抽血(A)。通过离心法测量血细胞比容并通过hEPO ELISA试剂盒测量血液中的血清hEPO水平。将未植入的GMMO保留在培养基中并测量EPO的水平⑶。专利技术详述在一些实施方案中，本专利技术涉及长效治疗制剂及其使用方法，所述制剂包含含有载体的经遗传修饰、基于组织的微器官，所述载体包含与一个或多个调节序列可操作地连接的编码治疗性多肽如红细胞生成素或干扰素α的核酸序列。在一个实施方案中，本专利技术提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，从而所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，且所述提高维持超过一个月。在另一实施方案中，所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，且所述提高维持超过六个月。在另一实施方案中，本专利技术提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，从而所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，所述提高维持超过一个月，且其中所述载体是辅助病毒依赖型腺病毒载体。在另一实施方案中，本专利技术提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，其中所述核酸序 列编码治疗性多肽，从而所述治疗性多肽的表达水平比基础水平提高超过5%，且所述提高在免疫活性宿主中维持超过一个月。在另一实施方案中，本专利技术提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，从而所述治疗性核酸的表本文档来自技高网...

【技术保护点】
长效治疗制剂用于制备在持续的时间内向有需要的个体提供治疗性多肽的药物的用途：所述治疗制剂包含经遗传修饰的微器官，其中所述微器官是用辅助病毒依赖型腺病毒载体体外转导的真皮微器官，所述载体包含与一个或多个调节序列可操作地连接的编码治疗性多肽的核酸序列，其中所述一个或多个调节序列包含CAG启动子，其中将所述微器官离体保存在培养基中1？8周的时间，其中所述治疗性多肽选自红细胞生成素和干扰素α，并且其中在植入所述长效制剂后，所述制剂：a.将所述治疗性多肽在血清中的表达水平比植入前的基础水平提高，所述提高维持超过一个月；和/或b.将功能标记比基础水平提高至少5%。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：A·L·珀尔曼，
申请(专利权)人：迈德詹尼克斯医疗以色列有限公司，
类型：发明
国别省市：