一种筛查ALK融合基因的方法技术

本发明专利技术属于医药和生物技术领域，涉及筛查ALK融合基因的方法，尤其是ALK融合基因筛查的多片段引物及其应用。本发明专利技术的筛查ALK融合基因的方法，以样本中的总RNA反转的cDNA为模板，加入加入核苷酸编码序列如SEQ?IDNO?1-14所示的real-time?PCR联合引物，进行实时荧光聚合酶链反应，并通过检测反应产物中反应单位间Ct值的差值检验是否具有ALK融合基因。本发明专利技术方法具有操作简捷，节约时间，结果判断直观、明确，成本较低，污染减少的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药和生物
，涉及ALK融合基因的筛查方法，尤其是ALK融合基因筛查的多片段引物及其应用。
技术介绍
据研究报道，对于非小细胞肺癌(NSCLC)，针对特定的靶点开展个体化治疗已成为现实，例如通过检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变，筛选适合EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗的患者亚群。据美国麻省总医院研究人员发表研究论文称，检测一种间变淋巴瘤激酶(ALK)融合基因如(EML4-ALK)，可对NSCLC患者作进一步细分。ALK融合基因于2007年开始见诸NSCLC相关研究报告。在此之前，研究者已经在多种肿瘤中识别了涉及ALK的基因变异，例如间变性大细胞淋巴瘤、炎性成肌纤维细胞瘤 和成神经细胞瘤等，但不包括肺癌。现有技术公开了 ALK融合基因迄今已发现多种变异类型。分析这些融合基因的结构发现，其ALK部分均包括开始于第20外显子的编码细胞内酪氨酸激酶结构域的基因片段。经检测，所有这些融合基因均有生物学功能，其表达产物为一种嵌合酪氨酸激酶。传统上对ALK融合基因的筛查包括两种主要形式1、普通PCR，通过设计引物，对某一种具体的融合形式进行扩增，根据琼本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛查ALK融合基因的方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)设计筛查ALK融合基因的7对real？time？PCR联合引物或探针；(2)提取样本中的总RNA；(3)以样本中的总RNA为模板，通过逆转录方法合成cDNA；(4)在7个real？time？PCR反应单位中，以(3)中所得的cDNA为模板，分别加入(1)中设计的7对引物，以及包括荧光染料在内的反应预混液；(5)在real？time？PCR反应仪上进行real？time？PCR反应，并分别记录每个样本的7个反应单位的荧光阈值Ct值；(6)分别计算引物I～IV所在反应体系的Ct值的均值CtABP，和引物V～VII所在反应体系的CT值的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海泉，孙艺华，王瑞，潘云建，胡海川，李晨光，王磊，叶挺，罗晓阳，李航，张扬，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：