【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒及其在肿瘤化学-免疫治疗方面的应用，更进一步涉及在提升肿瘤对抗体治疗剂敏感性中的应用。
技术介绍
1、以免疫检查点阻滞为代表的免疫治疗在实体瘤治疗中取得显著且持久的疗效，但是仅部分肿瘤患者能从免疫治疗中获益。一些化疗药物可以诱导肿瘤发生免疫原性细胞死亡，释放肿瘤抗原和包括高迁移率族蛋白b1(hmgb1)、钙网蛋白(crt)等在内的损伤相关分子模式(damps)，从而促进抗肿瘤免疫反应的激活。联合使用化疗药物和免疫检查点阻滞剂的治疗方案在尿路上皮癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤的临床试验中取得了成功，使得化学-免疫治疗成为一种极具前景的肿瘤治疗模式。但是，在前列腺癌等免疫“冷”肿瘤中，直接给予化疗和免疫检查点抑制剂治疗的联合治疗未能延长患者的生存时间。对于多数肿瘤，尤其是免疫“冷”肿瘤，直接给予化疗难以诱导足够的免疫原性刺激，和免疫治疗的协同效应有限。因此，开发能有效增强抗肿瘤免疫反应的新的化学-免疫治疗策略十分必要。
2、沸石咪唑框架-8(zif-8)是一种由锌离子和2-甲基咪唑(2-mim)配位组成的金属有机框架纳米粒子，具有高孔隙率、孔径可调、易于制备、可高效装载小分子到生物大分子物质、良好的生物相容性以及ph响应性生物降解等优点。更重要的是，zif-8本身进入肿瘤细胞降解后能够诱导细胞焦亡的发生。焦亡是一种高度炎症性的程序性细胞死亡模式，可以激活体内免疫细胞，促进全身免疫反应。在经典的细胞焦亡途径中，涉及激活的半胱氨酸天冬酰胺酶1(caspase-1)切
3、蒽环类化疗药米托蒽醌(mitoxantrone dihydrochloride,mit)是一种有效的拓扑异构酶ii抑制剂可抑制dna合成，主要用于恶性淋巴瘤、乳腺癌和急性白血病的治疗，对肺癌、前列腺癌、大肠癌、肝癌、肾癌等多种肿瘤具有一定疗效。米托蒽醌还是一种具有诱导免疫原性细胞死亡潜力的化疗药，是构建化学-免疫治疗模式的理想化疗药之一。
技术实现思路
1、本专利技术是为解决上述问题而进行的，目的在于提供一种负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒、其制备方法以及在肿瘤化学-免疫治疗中的应用。
2、本专利技术的技术方案如下：针对现阶段临床上联合化学治疗和免疫治疗的不足，通过常温全水相一锅法合成mit@zif-8作为一种新的化学-免疫治疗方案，利用细胞焦亡增强化疗药米托蒽醌诱导细胞免疫原性死亡的能力，在化疗杀伤肿瘤细胞的同时增强抗肿瘤免疫激活的能力，实现有效的化学-免疫治疗，并增强肿瘤对免疫检查点抑制剂治疗的响应性。
3、具体的，本专利技术的第一方面，提供了一种负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒，其中，米托蒽醌的质量占比为4％。
4、该纳米颗粒的制备方法如下：
5、(1)配置290mg/ml的2-甲基咪唑水溶液，而后按照体积比1：1向其中加入2mg/ml的米托蒽醌水溶液磁力搅拌均匀；
6、(2)配置浓度为45mg/ml的硝酸锌溶液，按照体积比为1：16的比例添加进上述混合溶液中磁力搅拌均匀；
7、(3)合成结束后，分离产物并除杂后，制备成稳定产品形式。
8、优选的，步骤(1)和步骤(2)中，磁力搅拌的转速为1500转；步骤(2)中，磁力搅拌时间为30min；步骤(3)中，合成结束后，以20000g离心产物，去除上清后用去离子水重悬洗涤2次以去除游离原料，重悬为水溶液或真空干燥为粉末备用。
9、对合成得到的mit@zif-8颗粒进行扫描电镜检测，呈菱形十二面体，粒径约为150nm；xrd检测显示，mit@zif-8具有zif-8的晶体结构；ftir检测结果显示，在mit@zif-8的检测结果中发现了与mit的c＝o伸缩振动相对应的新的吸收峰，由此可见制备得到的mit@zif-8纳米颗粒中包含mit；药物释放检测结果显示，制备得到的mit@zif-8纳米颗粒可以在酸性条件下有效释放负载的mit。
10、体外细胞实验结果显示，在结肠癌细胞中，mit@zif-8可以诱导细胞焦亡信号通路分子表达的上调，并且诱导的焦亡作用更明显；mit@zif-8能够同时在结肠癌细胞和前列腺癌细胞中诱导最强的免疫原性细胞死亡，合成的mit@zif-8纳米颗粒能够比mit产生显著更强的抑癌效果。同时，mit@zif-8治疗使得前列腺癌对抗ctla-4抗体治疗产生响应。
11、由此本专利技术第三方面，提供了上述负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒在制备肿瘤化学-免疫治疗药物中的应用。
12、本专利技术具体实施方式部分中，采用前列腺癌或结肠癌细胞进行实验验证。但本专利技术中的肿瘤适用范围不限于该两种肿瘤，也适用于其余的免疫“冷”肿瘤，如卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤等。
13、本专利技术第四方面，提供了一种肿瘤化学-免疫治疗药物或者提升前列腺癌对ctla-4抗体治疗响应性的促进剂，由上述负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒以及药学上可接受的辅料组成。
14、本专利技术所述的药物或药物组合物可以和药学上常用的辅料制成任何剂型，例如常见的片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、汤剂、散剂或丸剂等剂型。
15、专利技术的作用与效果
16、本专利技术通过体外药效学实验证实，在前列腺癌细胞和结肠癌细胞中，mit@zif-8可以诱导细胞焦亡信号通路分子表达的上调，并且诱导的焦亡作用更明显；mit@zif-8能够同时在前列腺癌细胞和结肠癌细胞中诱导最强的免疫原性细胞死亡，合成的mit@zif-8纳米颗粒能够比mit产生显著更强的抑癌效果。同时，mit@zif-8治疗使得前列腺癌对抗ctla-4抗体治疗产生响应。因此，本专利技术利用细胞焦亡增强化疗药米托蒽醌诱导细胞免疫原性死亡的能力，在化疗杀伤肿瘤细胞的同时增强抗肿瘤免疫激活的能力，实现有效的化学-免疫治疗，并增强肿瘤对免疫检查点抑制剂治疗的响应性，为免疫“冷”肿瘤的治疗提供了新的研究思路。
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1.一种负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒，其特征在于，米托蒽醌的质量占比为4％。
2.根据权利要求1所述的负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒，其特征在于，制备方法如下：
3.根据权利要求1所述的负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒，其特征在于：
4.负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒在制备肿瘤化学-免疫治疗药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤选自前列腺癌或结肠癌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：
8.一种肿瘤化学-免疫治疗药物，其特征在于：由负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒以及药学上可接受的辅料组成，所述负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒为采用权利要求5～7任一项所述的方法制备得到的负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒。
9.一种提升前列腺癌对CTLA-4抗体治疗响应性的促进剂，其特征在于：由负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒以及药学上可接受的辅料组成，所述负载米托蒽醌的ZIF-8纳米颗粒为采用权利要求5
10.根据权利要求9所述的促敏剂，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.一种负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒，其特征在于，米托蒽醌的质量占比为4％。
2.根据权利要求1所述的负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒，其特征在于，制备方法如下：
3.根据权利要求1所述的负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒，其特征在于：
4.负载米托蒽醌的zif-8纳米颗粒在制备肿瘤化学-免疫治疗药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤选自前列腺癌或结肠癌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴波，李俊宏，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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