【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种RNA干扰载体，特别涉及一种抑制猪源P53基因表达的RNA干扰载体及其制备与应用。
技术介绍
RNA干扰(RNA interference, RNAi )是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA (double strandedRNA, dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)。外源 dsRNA进入细胞后产生的小分子干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)的反义链和多种核酸 酶形成了沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC), RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程。RNAi的发现具有划时代的意义，它不仅深入揭示了细胞内基因沉默的机制，而且它还是后基因组时代基因功能分析的有力工具，极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程。这种技术已经...
【技术保护点】
一种干扰猪源p53基因的shRNA的转录模板，其特征在于：为SEQ？ID？NO.2和SEQ？ID？NO.3退火杂交形成的双链DNA。
【技术特征摘要】
1.一种干扰猪源P53基因的ShRNA的转录模板，其特征在于为SEQ ID NO. 2和SEQID NO. 3退火杂交形成的双链DNA。2.一种抑制猪源p53基因表达的RNA干扰载体，其特征在于包括骨架载体、猪U6 RNA聚合酶III启动子和权利要求I所述的干扰猪源p53基因的shRNA的转录模板。3.根据权利要求2所述的抑制猪源p53基因表达的RNA干扰载体，其特征在于 所述的骨架载体为pEGFP-Cl载体；所述的pEGFP-Cl载体的多克隆位点中的BamH I和Hind III酶切位点进行了突变； 所述的猪U6RNA聚合酶III启动子取代了 pEGFP-Cl载体的Π复制起点，在猪U6 RNA聚合酶III启动子后接入了权利要求I所述的干扰猪源p53基因的shRNA的转录模板。4.根据权利要求3所述的抑制猪源p53基因表达的RNA干扰载体，其特征在于所述的BamH I酶切位点由AAGCTT突变为AAGTTT，所述的Hind III酶切位点由GGATCC突变为GGAACC。5.权利要求4所述的抑制猪源p53基因表达的RNA干扰载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤 (1)突变pEGFP-Cl载体多克隆位点中的BamHI和Hind III酶切位点，得到BamH I和Hind III酶切位点突变的重组载体pEGFP-Cl-BH ； (2)PCR扩增得到如SEQID NO. 4所示的Mlu I酶切位点+TAT+Spe I酶切位点+SV40复制起点序列+Stu I酶切位点的DNA片段S ； (3)将步骤(2)得到的片段S和步骤(I)得到的重组载体pEGFP-Cl-BH分别用MluI和Stu I酶切，将酶切后的片段连接得到重组载体pEGFP-Cl-Spe I ； (4)PCR扩增得到如SEQID NO. 5所示的Spe I酶切位点+猪U6 RNA聚合酶III启动子序列+BamH I酶切位点+ATA+Hind III酶切位点+Mlu I酶切位点的DNA片段U6 ； (5)将步骤(4)得到的片段U6和步骤(3)得到的重组载体pEGFP-Cl-SpeI分别用SpeI和Mlu I酶切，将酶切后的片段连接得到重组载体PEGFP-C1-U6 ； (6)将SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 3退火杂交得到干扰猪源p53基因的shRNA的转录模板； (7)将步骤(5)得到的重组载体PEGFP-C1-U6用BamHI和Hind III酶切，酶切后的片段与步骤(6)得到的干扰猪源p53基因的shRNA的转录模板连接得到抑制猪源p53基因表达的RNA干扰载体。6.根据权利要求5所述的抑制猪源p53基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈海燕，张建峰，郭鹏举，张春红，周恒，朱余军，
申请(专利权)人：广东省农业科学院兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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