于感染性与恶性疾病的治疗中提升免疫反应的方法技术

本发明专利技术涉及一种治疗感染性及恶性疾病的新颖方法。本发明专利技术提供新颖DNA及蛋白疫苗，通过提升免疫反应，以治疗感染性及恶性疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种治疗感染性与恶性疾病的新颖方法。
技术介绍
细胞毒T 淋巴细胞抗原 4 (Cytotoxic T-Iymphocyte antigen-4,CTLA-4)于 1987年被发现为免疫球蛋白超家族中的一新成员，其特征在于其亦具有变异(V)或恒定(C)免疫球蛋白区的重要结构性特征(Brunet et al. , Nature 328,267-270)。报导指出CTLA-4对于调节免疫系统亦扮演一重要的角色(Keilholz, U.，J Immunother 31,431-439)。CTLA-4被报导可通过与⑶28竞争⑶80/⑶86的结合位置以降低T细胞的活化(Rudd etal. , Immunol Rev 229,12-26)。虽然CTLA-4可保护个体免于罹患自体免疫性疾病，但它 亦会抑制抗癌的免疫力。为了避免CTLA-4于癌症治疗中可能造成的不良的免疫反应，已有许多方法在探讨如何操控T细胞的共刺激路径，以提升抗癌免疫反应。标靶CTLA-4疗法为众多先进的方法中的一种，且此方法已于后期的临床试验中显示出具潜力的结果(Hodi et al. ,N Engl J Med 363, 711-723;Hodi, F. S. ,Asia Pac J Clin Oncol 6 SupplI, S16-23;ffeber, J. , Oncologist 13 Suppl 4，16-25;及 Ribas, A.，Oncologist 13 Suppl4，10-15)。抗CTLA-4的一种单株抗体，ipilimumab，已于2011年三月被FDA核准用以治疗转移性黑色素瘤。除了转移性黑色素瘤外，目前CTLA-4抗体于众多的临床试验中用于治疗恶性肿瘤，包括胰脏癌、大肠直肠癌、肝细胞癌、淋巴癌、激素抗拒性前列腺癌、卵巢癌、及急性骨髓性白血病。计划性死亡-I (Program death-1, PD-1)为0)28超家族中的一员，当与其的配体，计划性死亡配体I及2 (PD-L1及PD-L2)，结合时可触发负向的讯号路径(Riley，J.L. ,Immunol Rev 229,114-125)。I3D-I与其配体间的交互作用会抑制增生、细胞激素的生成、及T细胞的细胞溶解功能，从而耗尽T细胞，并抑制其免疫反应。PD-1/PD-L路径对于耐受性及免疫力十分重要。此路径保护组织及器官免受免疫调控的伤害。然而，此路径已知会被慢性感染的病原菌及肿瘤所利用，以抑制抗微生物性及抗癌的免疫力。为了调控ro-i/ro-L路径的免疫调控活性，已有标靶此路径的疗法被发展，以用于治疗包含感染、自体免疫、乃至癌症等疾病(Weber, J.，Semin Oncol 37,430-439)。虽然已有许多方法可通过标靶CTLA-4、ro-l/PD-L 1/TO-L2、及其它免疫调控蛋白，以调控免疫反应来对抗感染性及恶性疾病；然而仍需一种可通过提升免疫力且同时避免抑制免疫反应的新颖方法，以用于抗癌及抗感染的治疗中。
技术实现思路
本专利技术提供一种医药组合物，可于治疗感染性或恶性疾病时，提升受治疗个体的免疫反应，该医药组合物包含一与表达载体结合的DNA构筑体，及医药可接受的载剂，其中该DNA构筑体包含一多核苷酸序列，该多核苷酸编码选自由细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、计划性死亡-I (PD-I)、计划性细胞死亡I配体I (H)-Ll)、其片段或其功能性变异体、及其组合所组成的群组中任一者。在另一方面中，本专利技术提供一种医药组合物，可于治疗感染性或恶性疾病时，提升受治疗个体的免疫反应，该医药组合物包含一重组多胜肽及一医药可接受的载剂，其中该重组多胜肽包含一多胜肽序列，该多胜肽序列选自由CTLA-4、PD-l、ro-Ll、其片段或其功能性变异体、及其组合的多胜肽序列所组成的群组。附图说明于附图所示的具体实施例，其目的用于阐述本专利技术。然而，应明了的是，本专利技术并不局限于所示的较佳具体实施例。于附图中图Ia 提供 pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4_PLAP 的 DNA 及氨基酸序列。 图Ib 提供 pVAC-l-IL2ss-mCTLA4-PLAP 的 DNA 及氨基酸序列。图2a显示经pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠，其产生的抗人类及鼠的CTLA-4抗体的结果。图2b 提供经 pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP 免疫的小鼠，于稀释 1:50、1:100、1:200、1:400、及1:800倍时，所产生的抗体的效价标准曲线。图3显示经以pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠，小鼠的B16黑色素瘤(B16F10肿瘤细胞)生长被抑制的结果。图4提供经以pVAC-l-IL2ss-hCTLA_4免疫的小鼠及施以pVAC_l载体的对照组小鼠的体重比较结果，结果显示两组的间无差异。图5a提供B16F10细胞数目与荧光酵素活性的关连性；其中该B16F10细胞可稳定表达荧光酵素(B16F10-luc)。图5b结果显示源自pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠的脾细胞，其细胞毒杀能力被提升，使得B16F10-1UC细胞存活率减少(于效应因子(脾细胞)肿瘤细胞(B16F10-luc)为 100:1 及 30:1 的比例)。图6 提供经以 pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP 免疫的小鼠，经由 B16F10_luc 的刺激，提升脾细胞的干扰素Y的分泌量。图7a显示以未与阳离子微脂体(即”裸露的DNA”)结合的pVAC-l-mCTLA_4-PLAP免疫小鼠，于1:50稀释的血清中无显著的抗鼠CTLA-4的抗体效价被诱发。图7b及图7c提供相较于以裸露DNA对照组所免疫的小鼠，以与微脂体结合的pVAC-l-mCTLA-4-PLAP免疫小鼠，可产生抗人类及鼠的CTLA-4抗体的结果。图8提供以pVAC-l-mCTLA-4DNA-微脂体复合物免疫的小鼠，其抑制RENCA肿瘤生长的结果。图9a-图9n提供纯化的hCTLA-4及其受器B7. I及B7. 2间的交互作用；该受器B7. I及B7. 2分别稳定地在CH0-B7. I及CH0-B7. 2上表达。该交互作用会被经以P VAC-1 -1L2 s s-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠的血清抑制。图10提供标靶免疫调控蛋白的疫苗选殖策略，这些蛋白可为膜连结的蛋白(a)、或分泌的蛋白(b),其可分别具有或不具有胎盘碱性磷酸酶(placental alkalinephosphatase, PLAP)的穿膜区域序列。于图10所示的A及B区域的DNA序列可编码选自由CTLA-4、PD-1、ro-Ll、其片段或其功能性变异体、及其组合所组成的群组中任一者。图Ila-图Ilh提供部分具体实施例的DNA及氨基酸序列，分别标靶根据本专利技术的人类蛋白，包括以下载体图 Ila pVACl-IL2ss-hPD-l(21-170aa)-PLAP(4167bp)、图 IlbpVACl-IL2ss-hPD-l (21_170aa) (4171bp)、图 llcpVACl-IL2ss-hPD_Ll (19_238aa) -PLAP (4377bp)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种医药组合物，可于治疗感染性或恶性疾病时，提升受治疗个体的免疫反应，该医药组合物包含一与表达载体结合的DNA构筑体，及医药可接受的载剂，其中该构筑体包含一多核苷酸序列，该多核苷酸编码选自由细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA？4)、计划性死亡？1(PD？1)、计划性细胞死亡配体1(PD？L1)、其片段或其功能性变异体、及其组合所组成的群组中任一者。

【技术特征摘要】
2011.06.24 US 61/500,8251.一种医药组合物，可于治疗感染性或恶性疾病时，提升受治疗个体的免疫反应，该医药组合物包含一与表达载体结合的DNA构筑体，及医药可接受的载剂，其中该构筑体包含一多核苷酸序列，该多核苷酸编码选自由细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、计划性死亡-I (ro-i)、计划性细胞死亡配体I (ro-Li)、其片段或其功能性变异体、及其组合所组成的群组中任一者。2.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该DNA构筑体包含编码CTLA-4、其片段或其功能性变异体的多核苷酸序列。3.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该DNA构筑体包含编码(i)CTLA-4、其片段、或其功能性变异体，及(ii)PD-l、其片段、或其功能性变异体结合的多核苷酸序列。4.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该DNA构筑体包含编码(i)CTLA-4、其片段、或其功能性变异体，及(ii)ro-Li、其片段、或其功能性变异体的结合的多核苷酸序列。5.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该表达载体为pVAC-1。6.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，进一步包含佐剂。7.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该DNA构筑体与微脂体结合。8.如权利要求I所述的医药组合物，其特征在于，该个体罹患感染性或恶性疾病，且以抗感染性或抗癌药物治疗，造成该个体的免疫反应受到刺激。9.如权利要求I所述的医药...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝耿立，施易升，蓝耿欣，
申请(专利权)人：台北荣民总医院，
类型：发明
国别省市：