本发明专利技术公开了一种前列腺癌特异性的靶向基因-病毒药物。使用腺病毒，其早期基因E1A的天然启动子被前列腺癌特异性启动子DD3取代，构成一种溶瘤腺病毒，后者携带前列腺癌特异的抗癌基因PTEN，如其抗癌作用还不够强，不足以基本全部消灭癌症，则可在同一载体上加上下述基因与之共用，如TRAIL、IL-24、MnSOD、CD、Smac、GM-CSF、IFN、IL-12、p53、RNAi、microRNA、Caspase?3及Bax，或采用将两个基因用各种方案连接起来使用。本发明专利技术为前列腺癌特异性基因-病毒治疗的药物，具有很高靶向抗前列腺癌的治疗作用，对正常细胞基本无影响。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于癌症的革巴向基因-病毒治疗(Cancer Targeting Gene-Viro-Therapy,CTGVT)领域，具体涉及前列腺癌特异性的靶向基因-病毒治疗(Cancer TargetingGene-Viro-Therapy Specific for Prostate Cancer,CTGVT-PC),更具体的，是关于一种前列腺癌特异性基因-病毒药物。
技术介绍
1999-2001年，刘新垣创建了一种癌症治疗策略，叫癌症的靶向基因-病毒治疗(Cancer Targeting Gene-Viro-Thearpy, CTGVT),它是将抗癌基因插入到溶瘤病毒(oncolytic virus, 0V)而成，故 CTGVT 策略即 OV-(gene)策略或 Gene Armed OncolyticVirus Therapy (GAOVT)策略，后者也是OV-(gene)，CTGVT (GAOVT)把基因治疗和溶瘤病毒治疗各自的优势结合起来了，因为溶瘤病毒本身就有抗癌作用，又可能特异性地在癌细胞 中复制数百倍，插入其中的抗癌基因也可随之复制数百倍，故其抗癌效果大大地增加，既比相应单独基因治疗好很多，也比相应单独溶瘤病毒治疗好很多，故现在成为国际热点课题。基因治疗，虽然2009年被Science评为全球十大科学成果之一，但那都是对单基因缺乏的遗传病所获得的成果，对癌症这样复杂又是多基因突变的疾病，基因治疗的抗癌效果，远不如CTGVT(GAOVT)的抗癌效果，基因治疗为Ad-(gene)，其中所用的载体Ad无癌症靶向性，在癌细胞中无复制能力(即非复制型Ad)，故其抗癌效果，远远不如CTGVT。如图I所示，腺病毒有早期基因有El、E2、E3、E4及晚期基因LI、L2、L3、L4、L5。其中El又可分为E1A、E1B，最重要的是E1A，其次是E1B。ElA的天然启动子被前列腺癌特异性的启动子替换，则此腺病毒只能在前列腺癌细胞中感染复制。溶瘤病毒(Oncolytic Virus，0V)，是指在肿瘤中特异表达和感染复制的病毒，有癌细胞靶向性，还能复制，但非前列腺癌特异性。任何病毒(Adenovirus (腺病毒)，SimplexHerpes Virus(HSV-I)(疱疹病毒)，Pox Virus (痘苗病毒))经改造后均可构成为0V。溶瘤病毒携带gene则变成0V-gene,但Ad-gene即基因治疗(其中Ad无祀向性,无复制倍增能力)。
技术实现思路
在CTGVTJP ov-(gene)的构建与应用中，OV(Oncolytic Virus)主要决定其靶向性，可用各式各样的方法加以构建，使它产生不同靶向性，本申请只涉及特异性靶向前列腺癌领域，目的是提供一种前列腺癌特异性基因-病毒药物，CTGVT-PC及其应用。Gene主要决定杀伤性，光OV的杀伤作用有限，故需加杀伤基因以增强其抗癌作用，构成OV-(gene)，即CTGVT (GAOVT)，才能构成很强的抗癌药物，对CTGVT还需要更多改进，如将两个CTGVT合用，其抗癌作用更强，常可把移植性肿瘤基因基本上消灭光。此外，如专门靶向癌症干细胞，则有根除癌症和彻底消灭癌症的可能性。本专利技术具体采用如下技术方案本专利技术是用前列腺癌特异性启动子DD3替换ElA本身的天然启动子，则此腺病毒变成了对前列腺癌特异性溶瘤腺病毒，可简写为(PC) ^OncoAd,即一种靶向前列腺癌的OV载体，这是本专利的根本要求，此外，在ElB中可缺失55KD，则为Ε1Β(Λ55)，Δ为缺失之意，称ZD55，也可写成D55 ;Ε1Β有两个基因，即19KD与55KD基因，如这两个基因双缺失则为ΛΕ1Β。Ad· ElB的天然启动子也可用HIF (低氧诱导因子)取代，构成Ad .HIF ·Ε1Β，总的要求是构成Ad · DD3 · ElA · μ ElB ( ^ ElB,表示可对ElB进行的任意改造)。至于基因方面，对前列腺癌来说，或者加入前列腺癌特异性抑癌基因，如ΡΤΕΝ，构成Ad · DD3 · ElA · D55-(PTEN)，如抗癌能力还不够强，还可在同样载体上加用抗癌作用很强但无专一性的抗癌基因如TRAIL，构成Ad · DD3 · ElA · D55-(TRAIL)与上述带PTEN的CTGVT-PC合用，则可取得更好的抗癌效果。除TRAIL外，也可用IL_24、MnSOD、Smac、GM-CSF、IFN、IL-12、p53、RNAi、microRNA、Caspase 3、Bax等等，使用两个基因时，其中必有一个为前列腺特异性的抗癌基因，两个基因可用如下方法构建:A.使用两个重组子，分别各带一个抗癌基因；B. —个重组子中分别用两个基因表达框表达；C.两个基因用连接子连接起来。·如用F · 2A或IETD四个氨基酸。在本专利技术的第一个方面，提供一种前列腺癌特异性靶向的基因-病毒药物，将抗癌基因插入到溶瘤病毒而制成，所述溶瘤病毒为溶瘤腺病毒，早期基因El分为E1A、ElB,ElA的启动子被前列腺癌特异性启动子取代。根据本专利技术，所述前列腺癌特异性启动子为前列腺癌特异性启动子DD3及其它前列腺特异的启动子。根据本专利技术，首先是前列腺癌特异的抗癌基因，如PTEN，也可增加其它抗癌效果很好的抗癌基因，如 TRAIL、IL-24、MnS0D、CD、Smac、GM-CSF、IFN、IL-12、p53、RNAi、microRNA、Caspase 3、或 Bax0如果是两个抗癌基因，相互之间可用不同方式联合使用，所述方式为A、用两个重组子；B、在一个重组子中带有两个基因的表达框；或C、两个基因用联接子连接起来加到一个载体中，连接子可为F · 2A或IETD四个氨基酸。根据本专利技术，所述ElB可进行如下改造(I)、所述ElB的天然启动子被HIF取代；(2)、删除 ElB 中的 55KD ;(3)、删除ElB中的两个基因19KD和55KD。本专利技术为前列腺癌特异性基因-病毒治疗的药物，具有很高靶向抗前列腺癌的治疗作用，对正常细胞基本无影响。附图说明图I为腺病毒基因组图。图2A显示了 DD3启动子在各种正常细胞与各种癌细胞中的启动能力，图2B显示了 WPRE对Luciferase基因及DD3启动能力的增强作用。图3A 显示了 CTGVT-PC，Ad · DD3 · D55-(PTEN)的构建原理，图 3B 显示了Ad · DD3 · D55-(PTEN)的具体构建过程。图4 显示了 Ad · DD3 · ElA · D55-(PTEN)简称 Ad · DD3 · D55-(PTEN)的体外(invitro)抗癌能力。图5显示了 Ad *DD3 *D55-(PTEN)的体内(in vivo)抗癌能力，其中图5A显示了各种物质的抗癌作用，图5B显示了癌组织中PTEN的含量。具体实施方案CTGVT-PC是前列腺癌特异性的溶瘤腺病毒(PC)-OncoAd携带前列腺癌特异性的抗癌基因(PC)-gene,即(PC) · OncoAd-(PC)-gene。(PC) · OncoAd的构建，是将Ad · ElA的天然启动子换成前列腺癌特异性启动子DD3 (differential display code 3),即 Ad · D本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种前列腺癌特异性基因？病毒药物，即CTGVT？PC(Prostate？Cancer)，其特征在于，所述药物是将前列腺癌特异的抗癌基因插入到前列腺癌特异性的溶瘤病毒中而制成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘新垣，丁苗，范钧锴，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。