本发明专利技术公开了用于检测谷胱苷肽-S-转移酶P1(glutathione-S-transferaseP1，GSTP1)基因热点突变位点的试剂盒，包括红细胞裂解液、全血DNA抽提试剂、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于：所述试剂盒包括检测5外显子目的基因上下游引物F、R-Biotin、测序引物FCX。可检测出与GSTP1基因热点突变位点（I105V）多态性，特异性好，准确度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及一种用于检测谷胱苷肽-S-转移酶Pl (glutathione-S-transferase PI, GSTP1)基因热点突变位点(I105V)的试剂盒，能对GSTPl基因突变位点进行检测，特异性好，准确度高，可提高突变检出率。
技术介绍
谷胱甘肽S转移酶(GSTs)是一组多功能的药物代谢酶，其中GSTPl广泛存在于人体肿瘤组织中，在人体上皮来源的恶性肿瘤中表达率较高，如消化道来源的胃肠癌、食管癌，呼吸道来源的肺癌。在癌前病变和肿瘤患者中常发现GSTPlVall05基因型过度表达。在GSTPl基因多态性与人群健康的关系的研究中发现，GSTPl基因的Ilel05Val位点的SNP导致在GSTPl蛋白密码子105位氨基酸转变，影响到GSTPl的催化功能，酶活性降 低，使其抗氧化功能下降，有利患者在化疗中的生存。即GSTPlIlel05Val位点的多态性有利化疗，预后较好。目前，GSTPl基因突变现有的检测方法包括酶切法、普通测序法以及焦磷酸测序法等。在实际应用中，用于检测结直肠癌PIK3CA基因突变的方法主要为直接测序法，尽管该法为金标准，但是如果突变率低于15%，会发生漏检的现象，且试验过程过于繁琐，需要的试剂种类繁多，费时费力，因而一定程度上限制了该法的应用。焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术是一种新的序列分析技术,是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。在实际工作中，很多情况需要对已知序列的DNA片段进行序列验证，而这种分析往往测几十bp就可以满足需要。在这种情况下，Sanger法未必是最合适的DNA序列分析技术。而焦磷酸测序技术是目前最适合这些应用的DNA序列分析技术。其特点是操作简便、大通量、自动化，适合大量样本的快速检测，根据峰值对序列的突变位点进行判读，从而实现GSTPl基因突变位点的定点检测。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的缺陷，提供用一种快速，准确，高通量的GSTPl基因热点突变(Ilel05Val)检测试剂盒。用于检测GSTPl基因热点突变位点的试剂盒，包括红细胞裂解液、全血DNA抽提试齐U、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于所述试剂盒包括检测GSTPl第5外显子目的基因上下游引物F、R-Biotin、测序引物FCX，其序列分别为FTGGTGGACATGGTGAATGA,R-Biotin GGTCAGCCCAAGCCAC,FCX :CCTCCGCTGCAAATA。进一步地，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤(I)采集待测血液样本，提取DNA ；(2)以该DNA为模板，用权利要求I所述用于扩增样本DNA中GSTPl基因第5外显子的对应PCR引物F、R进行扩增，得到PCR反应产物；(3)对PCR反应产物用测序引物FCX进行焦磷酸测序，确定是否存在突变。优选地，步骤(2)的PCR反应按以下条件进行扩增94°C 5min ；98°C 30s,58°C 30s、68°C 30s, 35 个循环；最后 68°C 5min。本专利技术根据GSTPl基因热点突变位，设计了外显子5PCR扩增引物以及焦磷酸测序引物。表I.外显子5引物序列权利要求1.用于检测GSTPl基因热点突变位点的试剂盒，包括红细胞裂解液、全血DNA抽提试齐U、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于所述试剂盒包括检测5外显子目的基因上下游引物F、R-Biotin、测序引物FCX，其序列为FTGGTGGACATGGTGAATGA,RBiot i n-GGTCAGCCCAAGCCAC,FCX :CCTCCGCTGCAAATA。2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤 (1)采集待测血液样本，提取DNA； (2)以该DNA为模板，用权利要求I所述用于扩增样本DNA中GSTPl基因的对应PCR引物F、R进行扩增，得到PCR反应产物； (3)对PCR反应产物用测序引物FCX进行焦磷酸测序，确定是否存在突变。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤(2)的PCR反应按以下条件进行扩增94°C 5min ；98°C 30s、58°C 30s,68°C 30s，35 个循环；最后 68°C 5min。全文摘要本专利技术公开了用于检测谷胱苷肽-S-转移酶P1(glutathione-S-transferaseP1，GSTP1)基因热点突变位点的试剂盒，包括红细胞裂解液、全血DNA抽提试剂、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于所述试剂盒包括检测5外显子目的基因上下游引物F、R-Biotin、测序引物FCX。可检测出与GSTP1基因热点突变位点(I105V)多态性，特异性好，准确度高。文档编号C12Q1/68GK102816846SQ20121029075公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月15日 优先权日2012年8月15日专利技术者薛群, 王淑一, 徐建成, 孙翠莲 申请人:吉林艾迪康医学检验所有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测GSTP1基因热点突变位点的试剂盒，包括红细胞裂解液、全血DNA抽提试剂、无水乙醇、PCR扩增反应液、阳性对照品、阴性对照品以及焦磷酸测序反应液，其特征在于：所述试剂盒包括检测5外显子目的基因上下游引物F、R？Biotin、测序引物FCX，其序列为：F：TGGTGGACATGGTGAATGA，R：Biotin？GGTCAGCCCAAGCCAC，FCX：CCTCCGCTGCAAATA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：薛群，王淑一，徐建成，孙翠莲，
申请(专利权)人：吉林艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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