用于皮肤护理中的稳定化蛋白酶制造技术

公开了一项涉及合成用作皮肤护理剂的源自植物的固定化和交联的蛋白酶的发明专利技术。所得到的稳定化蛋白酶将因为其固定化性质而最少限度地渗透皮肤。该蛋白酶将因其交联性质并且在某些实施方案中归因于其借助物理添加剂的稳定作用而保留活性。本发明专利技术尤其涉及在局部皮肤应用中使用的连接的木瓜蛋白酶产物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于皮肤护理中的稳定化蛋白酶优先权本申请要求2010年I月19日提交的美国临时申请No. 61/296,052的优先权。概述公开了一项专利技术，其涉及合成用作皮肤护理剂的源自植物的固定化和交联的蛋白酶。所得到的稳定化蛋白酶将因为其固定化性质而最少限度地渗透皮肤。该蛋白酶将因其交联性质并且在某些实施方案中归因于其借助物理添加剂的稳定作用而保留活性。本专利技术尤其涉及在局部皮肤应用中使用的连接的木瓜蛋白酶产物。背景 蛋白酶的活性在表皮稳态方面是重要的。因此，当施加至皮肤时，蛋白酶具有多种潜在益处，但是受某些限制作用影响。木瓜蛋白酶是一种源自番木瓜和某些其他植物的有力蛋白酶。然而，它在溶液状态下迅速丧失活性。这是因为与全部蛋白酶相似，木瓜蛋白酶自我消化以及经历变性。此外，当使用常规木瓜蛋白酶产物作为与皮肤渗透和皮肤刺激相关的局部皮肤护理剂时，可以遭遇伴随这些木瓜蛋白酶产物的其他难题。高度地希望的是开发在皮肤护理中使用的没有此类限制的蛋白酶产物，并且更具体地，木瓜蛋白酶产物。为克服常规技术中的上述难题，本专利技术的示例性实施方案提供借助本文所述的技术改良的稳定的交联蛋白酶产物，并且尤其提供改良的稳定的交联蛋白酶产物。例如，在本专利技术的一些实施方案中，为了获得稳定的交联木瓜蛋白酶产物、将木瓜蛋白酶在初级交联反应中固定在聚合物如例如卡波姆或卡波普上，并且随后通过添加具有胺反应性的低分子量同源双功能交联试剂(例如己二亚氨酸二甲酯(DMA, Dimethyladipimidate)、辛二酸双(横基玻拍酸亚胺)酯(BS3, Bis (Sulfosuccinimidyl) suberate)、辛二亚氨酸二甲酯(DMS, Dimethyl Suberimidate)、庚二亚氨酸二甲酯(DMP, Dimethylpimelimidate)和辛二酸二玻拍酸亚胺酯(DSS, Disuccinimidyl suberate))进行二级交联反应。在本专利技术的其他示例性实施方案中，进行初级交联反应和二级交联反应以获得稳定的交联木瓜蛋白酶产物，并且随后稳定的交联木瓜蛋白酶使用物理稳定剂例如糖或糖聚合物进一步稳定。例如，藻酸钠可以根据本专利技术的示例性实施方案用作物理稳定剂。以上交联的稳定化木瓜蛋白酶产物仍可以通过包括在某些防腐剂体系或水包油制剂中的以上稳定化木瓜蛋白酶产物被进一步稳定化。根据本专利技术的示例性实施方案的固定化、交联和稳定化蛋白酶(例如木瓜蛋白酶)复合物的益处包括但不限于I.最小的皮肤渗透作用，2.在溶液中或干燥形式下保留蛋白酶活性3.最小的皮肤刺激作用，和4.易于配制。在本专利技术的其他实施方案中，描述了包含稳定化蛋白酶的化妆品组合物、个人护理组合物和药物组合物。附图简述以下附图仅出于说明目的而提供，并且不意图是限制性的。图I说明用于形成根据本专利技术的稳定的交联蛋白酶的交联反应。图2说明根据本专利技术的示例性实施方案的稳定的交联木瓜蛋白酶产物，所述产物已经历过图I中说明的交联反应。图3说明在多个温度下贮存根据本专利技术的示例性实施方案的稳定化木瓜蛋白酶的样品多达12周后第0天活性的百分比。图4说明在多个温度下贮存无DMA样品多达12周后第0天活性的百分比。图5说明Sigma木瓜蛋白酶标准曲线。图6(a)说明根据本专利技术的示例性实施方案在多个温度下贮存稳定化木瓜蛋白酶样品多达12周后保留的第0天活性的百分比。图6 (b)说明在多个温度下贮存无DMA样品多达12周后保留的第0天活性的百分比。图7是说明在根据本专利技术的示例性实施方案的稳定的交联木瓜蛋白酶产物中不存在游离的活性木瓜蛋白酶的图表。图8是说明含有0. 2% BS3的样品和不含任何BS3的对照样品在不同温度下I周后的活性百分比的图表。图9是说明稳定化木瓜蛋白酶样品在有和没有0. 1%藻酸盐的情况下4周后的保留活性的百分比的图表。附图说明图10是Sigma木瓜蛋白酶标准曲线。图11是说明糖或糖聚合物对在25°C和40°C下10天后的游离木瓜蛋白酶的稳定性的影响的图表。图12是说明0. 4%木瓜蛋白酶在2周后保留的活性的百分比的图表。图13(a)说明已经由DMA交联并且已经与藻酸钠进一步反应的稳定的交联木瓜蛋白酶产物。图13 (b)是说明在多个温度下贮存I % DMA样品多达12周后保留的活性的百分比的图表。图13(c)是说明在多个温度下贮存无DMA样品多达12周后第0天活性的百分比的图表。图14是说明DMA对连接的木瓜蛋白酶的活性保留的影响的曲线图。图15是说明在不同温度下12周后的连接木瓜蛋白酶样品中的活性的图表。图16是Sigma木瓜蛋白酶标准曲线。图17是说明在制剂中保留的(含DMA的)连接木瓜蛋白酶的活性的曲线图。图18是说明在制剂中保留的(不含DMA的)连接木瓜蛋白酶的活性的曲线图。图19是说明在制剂内保留的连接木瓜蛋白酶的活性的曲线图。图20是在安慰剂制剂中的Sigma木瓜蛋白酶的标准曲线。图21是说明在油和水制剂中保留的连接木瓜蛋白酶的活性的曲线图。详述除非另外限定，否则本文中所用的全部技术与科学术语具有如本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于实施或检验本专利技术，然而现在描述合适的方法和材料。本文所提及的全部出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用方式完整地并入。在矛盾的情况下，本说明书(包括定义)将居主导。此外，所述材料、方法和实施例仅是说明性的并且不意图是限制性的。本专利技术的其他特征和优点将从以下详细描述并且从权利要求书中是显而易见的。如对本领域技术人员而言将显而易见的，本文所述的具体特征和实施方案可以与任何其他特征或实施方案组合。表皮由几个层(strata)或层组成。最外层一角质层由死亡的细胞组成，所述细胞已经在几天范围内从该层下方向上移行。这些死亡细胞通常借助一个称作表皮脱屑的过程从皮肤表面撒落，所述过程刺激新细胞在更深水平下生长。较年幼的皮肤在这个过程中比老化或受损的皮肤更高效。因此，老化的皮肤显得晦暗、厚和较无光泽(less toned)。这可以因环境因素而恶化，如暴露于阳光；激素影响，如雄激素、雌激素和表皮生长因子；和维生素缺乏如维生素A和D的缺乏。蛋白酶活性是脱屑过程中的关键因素。因此，为化妆效 果(如皮肤光滑和抗老化)施加蛋白酶至皮肤是合乎需要的。然而，蛋白酶在化妆品和其他应用中的用途已知具有三个主要限制不稳定性、可能有变应原性和皮肤渗透作用。本专利技术基于，至少部分地基于这样的发现蛋白酶可以借助某些交联反应来稳定以形成蛋白酶卡波姆共聚物，在本文也称作“稳定化蛋白酶”。此类稳定化蛋白酶包含与卡波姆交联的蛋白酶，其中蛋白酶的伯胺与卡波姆的羧基交联并且其中蛋白酶的胺经胺反应性交联试剂进一步交联。在本专利技术的一个实施方案中，稳定化蛋白酶还包含物理稳定剂，例如糖或糖聚合物。还公开了一种形成此类稳定化蛋白酶产物的方法，其中进行初级交联反应以将与所述蛋白酶的伯胺与卡波姆的羧基交联并且通过胺反应性交联试剂进行二级交联反应。蛋白酶蛋白酶是催化蛋白质分解的酶。蛋白酶，本身作为蛋白质，具有自我降解的倾向并且在本质上是不稳定的。这种蛋白质本质也使得它们具有变应原性。另外，因为它们降解蛋白质的能力，所以它们可以渗透至表皮的更本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·恰范，
申请(专利权)人：巴斯夫公司，
类型：发明
国别省市：