本发明专利技术涉及在洗涤剂中具有改善稳定性的蛋白酶。具体地，本发明专利技术涉及在洗涤剂组合物稳定性改善的蛋白酶。此外，本发明专利技术涉及包含本发明专利技术蛋白酶的清洁组合物或洗涤剂组合物以及此蛋白酶在洗涤剂组合物中的用途。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及具有在洗涤剂组合物中改善稳定性的蛋白酶。本专利技术还涉及编码所述蛋白酶的分离多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、包含所述核酸构建体的宿主细胞和用于生产和使用本专利技术蛋白酶的方法。此外，本专利技术涉及包含本专利技术蛋白酶的清洁组合物和洗涤剂组合物以及涉及所述蛋白酶在洗涤剂组合物中的用途。专利技术背景 在洗涤剂工业中，向洗涤配方中添加酶的应用已超过30年。用于此类配方的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露糖苷酶以及其它酶或其混合物。商业上最重要的酶是蛋白酶。在本领域内，例如在EP 130756 (GENENTECH)(对应于美国再公告专利号34，606(GENENCOR)) ；EP 214435(HENKEL) ；W0 87/04461(AMGEN) ；W0 87/05050(GENEX)；EP 260105 (GENENCOR) ;Thomas、Russell 和 Fersht (1985) Nature 318 375-376 ;Thomas、RusselI 和 Fersht(1987)J. Mol.Biol. 193803-813 ;Russel 和 Fersht Nature 328496-500(1987) ；W0 88/08028 (Genex) ；W0 88/08033(Amgen) ；W0 95/27049 (SOLVAYS. A.) ；W0 95/30011 (PROCTER&GAMBLE 公司)；W0 95/30010 (PROCTER&GAMBLE 公司)；W095/29979 (PROCTER&GAMBLE 公司)；US 5. 543. 302 (SOLVAY S. A.) ；EP 251 446 (GENENCOR)；WO 89/06279 (N0V0ZYMES A/S) ；W0 91/00345 (N0V0ZYMES A/S) ；EP 525 610 Al (SOLVAY)；WO 94/02618 (GIST-BROCADES N. V.)公开了为数众多的此类蛋白酶变体。WO 89/06270 (Novozymes A/S)公开了包含有限底物特异性蛋白酶的洗涤剂组合物，其中所述蛋白酶是能够断裂赖氨酸或精氨酸的C-末端侧肽键的胰蛋白酶样蛋白酶。而WO 94/25583公开了编码镰孢霉属(Fusarium)胰蛋白酶样蛋白酶DNA序列的克隆并且从所述DNA序列中获得了活性胰蛋白酶样蛋白酶的表达。然而，即便已经描述了众多有用的蛋白酶和蛋白酶变体，但是为了众多的工业用途仍需要进一步改善蛋白酶或蛋白酶变体。具体而言，由于洗涤剂中存在的物质往往会降低蛋白酶的稳定性，所以蛋白酶在洗涤剂中的稳定性问题已经变得尤其明显。因此，本专利技术的目标是提供改良的蛋白酶，所述蛋白酶适用于例如洗衣房和/或硬质表面清洁的洗涤剂中。专利技术简沭本专利技术在第一个方面涉及具有在洗涤剂中稳定性改善的蛋白酶，所述蛋白酶选自a.具有与如SEQ ID NO: 2的第1_266位氨基酸所示氨基酸序列至少73%同一性的氨基酸序列的蛋白酶；b.由在低严格条件下与下列序列杂交的核酸序列所编码的蛋白酶(i)如SEQ ID NO:1的第127-804位核苷酸所示的核酸序列的互补链，或(ii)至少100个核苷酸的⑴的亚序列；以及c.与如SEQ ID NO:2的第1_266位氨基酸所示氨基酸序列相比具有1_50、优选1-40或1-30、更优选1-20、最优选1-10个氨基酸替代的蛋白酶。本专利技术在第二个方面涉及包含编码本专利技术蛋白酶的核酸序列的分离多核苷酸。本专利技术在第三个方面涉及编码蛋白酶的分离多核苷酸，所述多核苷酸选自a.具有与如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列至少80%同一性的核酸序列；和b.在低严格条件下与下列序列杂交的核酸序列 (i)如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列的互补链；或(ii)至少100个核苷酸的⑴的亚序列。本专利技术在第四个方面涉及包含本专利技术核酸序列的核酸构建体，其中所述核酸序列与能够指导蛋白酶在适宜宿主中表达的一种或多种控制序列有效连接。本专利技术在第五个方面涉及包含本专利技术核酸构建体、启动子和转录终止信号及翻译终止信号的重组表达载体。本专利技术在第六个方面涉及包含本专利技术核酸构建体的重组宿主细胞。本专利技术在第七个方面涉及生产本专利技术蛋白酶的方法，所述方法包括(a)在诱导产生所述蛋白酶的条件下培养本专利技术重组宿主细胞；和(b)回收蛋白酶。本专利技术在第八个方面涉及包含本专利技术蛋白酶的清洁组合物或洗涤剂组合物、优选衣物洗涤组合物或洗碟组合物。本专利技术的另一些方面涉及本专利技术蛋白酶在清洁组合物或洗涤剂组合物中的用途；用于清洁或洗涤硬质表面或衣物的方法，所述方法包括将硬质表面或衣物与本专利技术组合物接触。定义在更详细讨论本专利技术之前，首先定义如下术语和惯例。氨基酸的命名A = Ala =丙氨酸V = Val =缬氨酸L = Leu =亮氨酸I = Ile =异亮氨酸P = Pro =脯氨酸F = Phe =苯丙氨酸W = Trp =色氨酸M = Met =甲硫氨酸G = Gly =甘氨酸S = Ser =丝氨酸T = Thr =苏氨酸C = Cys =半胱氨酸Y = Tyr =酪氨酸N = Asn =天冬酰胺Q = Gln =谷氨酰胺D = Asp =天冬氨酸E = Glu =谷氨酸K = Lys =赖氨酸R = Arg =精氨酸H = His =组氨酸X = Xaa =任意氨基酸核酸的命名A =腺嘌呤G=鸟嘌呤C =胞卩密唳T =胸腺嘧啶(仅在DNA中)U =尿嘧啶(仅在RNA中)蛋白酶将断裂蛋白质底物中酰胺键的酶归类为蛋白酶或(可互换地为)肽酶(见Walsh，1979, Enzymatic Reaction Mechanisms, ff. H. Freeman and Company, San Francisco,第 3章)。丝氨酸蛋白酶丝氨酸蛋白酶是催化肽键水解并且在酶的活性位点内存在一个必需丝氨酸残基的酶(White, Handler 和 Smith, 1973, “Principles of Biochemistry”,第五版，McGraw-Hi 11 Book Company, NY,第 271-272 页)。细菌丝氨酸蛋白酶的分子量范围为20，000-45, 000道尔顿。它们可被二异丙基氟磷酸抑制。细菌丝氨酸蛋白酶水解单纯末端酯并且其活性类似于同样为丝氨酸蛋白酶的真核胰凝乳蛋白酶。更狭义的术语碱性蛋白酶则含盖一个亚类，其反映某些丝氨酸蛋白酶具有高的最佳 pH (9. 0-11. 0)(综述见 Priest (1977) Bacteriological Rev. 41 711-753)。胰蛋白酶样蛋白酶术语“胰蛋白酶样蛋白酶”在本上下文中旨在指具有类似于胰蛋白酶活性的蛋白酶，即能够断裂位于赖氨酸或精氨酸的C末端侧肽键的酶。如在以下材料和方法部分中实施例IV所述，基于胰蛋白酶底物断裂的测定法测定胰蛋白酶样蛋白酶活性。母体蛋白酶母体蛋白酶可以是从自然来源分离的蛋白酶，其中可以在保留蛋白酶特征的同时对此蛋白酶进行后续修饰。而且，母体蛋白酶还可以是通过如J. E. Nes本文档来自技高网...
【技术保护点】
选自下列的蛋白酶：a.包含与如SEQ?ID?NO:2的第1?226位氨基酸所示氨基酸序列具有至少73%同一性的氨基酸序列的蛋白酶；和b.由在低严格条件下与下列序列杂交的核酸序列所编码的蛋白酶：(i)如SEQ?ID?NO:1的第127?804位核苷酸所示核酸序列的互补链，或(ii)至少100个核苷酸的(i)的亚序列；和c.与如SEQ?ID?NO:2的第1?266位氨基酸所示氨基酸序列相比具有1?50、优选1?40或1?30、更优选1?20、最优选1?10个氨基酸替代的蛋白酶。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴文平，KV约库姆森，MA斯特林格，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：
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