用于引发特异性免疫应答以治疗病毒感染和其他病症的具有肽佐剂的疫苗制造技术

本发明专利技术提供了免疫原性组合物和疫苗家族，每一种组合物和疫苗包括靶抗原或抗原混合物，和示例为三肽Ile-Glu-Trp的寡肽佐剂。该佐剂具有副作用低的特征，且可能在其中抗原免疫原性差，或患者高龄或免疫妥协的情况下引发快速且特异的Th1或细胞免疫应答方面是尤其有效的。在某些情况下，可通过施用单独三肽的后继注射明显增强疫苗的功效。已使用该疫苗以同时引发对多种流感菌株的增强应答，且该疫苗适合用于预防或治疗其他感染或疾病状况。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及疫苗开发领域特别涉及肽佐剂在疫苗中促进和增强为了预防性治疗或治疗性治疗感染或疾病而施用该疫苗的受治疗者体内的免疫应答的用途。背景疫苗被用来引发对特定靶抗原的特异性免疫应答。例如，使用针对病毒或细菌组分的疫苗以防止或限制由各自的病原体引起的感染。针对肿瘤特异性抗原或这些抗原的组合的疫苗用于癌症治疗。但是，对于未接触抗原的(unprimed)免疫系统来讲，靶抗原在独立地刺激特异性免疫应答方面通常不理想，尤其在疫苗中的免疫抗原是分离的或合成的肽的情况下。为克服这点，商业化的疫苗制剂通常不仅包含靶抗原，而且包含免疫佐剂。佐剂可以若干方式中的一种或多种促进改善的免疫应答例如，促进抗原递送至抗原递呈细胞或促进抗原递呈细胞的活化、刺激淋巴细胞、诱导炎症细胞的局部流入或提供持久抗原库。特异性佐剂可促进Thl (细胞的)或Th2(体液的)应答的极化，并增加免疫应答的强度或持久性。 由铝盐(氢氧化铝或磷酸铝)制成的佐剂在针对多种传染病的预防性疫苗中的广泛使用已持续了几十年。其促进Th2调控的免疫应答，其中体液(抗体)组分的作用超过细胞组分。随着高度纯化的蛋白质和亚单位疫苗以及基于DNA的疫苗的到来，对开发有效且耐受性良好的疫苗佐剂的兴趣重新开始。对于已有的疫苗，改进的佐剂可允许每剂量使用更少量的免疫原一可能将免疫覆盖扩展至全球人口的更广泛部分。由于癌症导致树突状细胞成熟和功能损伤，正在寻求用于为治疗癌症而设计的疫苗的新佐剂。这有损抗原递呈，且也可能与免疫抑制调节性T细胞的活化有关。Melacine (以黑色素瘤中的肿瘤抗原CHER-2/neu和L523S为靶的疫苗)包含佐剂AS04，AS04是单磷酰脂A衍生物MPL和铝盐的组合。在欧洲已被批准为乙型肝炎疫苗的Fendrix (Boland 等人，Vaccine 2004，23 :316-320)中，AS04 也用作佐剂。在70%至90%的年龄在65岁以下的成人中，灭活的流感疫苗减少了实验室确认的流感的发生一但在超过65岁的人群中，当传播株和疫苗株之间的抗原匹配最佳时，疫苗功效估计范围43-56%，且当菌株的抗原性多样化时，疫苗功效仅21-42%。这是个相当大的问题，因为在老年人中流感的发病率和死亡率是特别严重的。最近，已给予了流感疫苗Fluad 的海外监管批准，Fluad 用佐剂MF-59 配制， MF-59 是一种由鲨烯和两种类型的表面活性剂组成的水包油型乳液。与标准流感疫苗相比，Fluad可引发更强的体液(抗体)应答。接受Fluad 的年长患者在病毒传播高峰期间需要住院治疗的可能性明显较低(Joan Puig-Barberdi等人，Vaccine 25(2007)7313-7321)。 然而，尽管通常MF-59的耐受性非常好，与常规疫苗相比其还与身体不适和局部疫苗反应明显增加有关(Minutello 等人，Vaccine 1999 年 I 月；17(2) :99-104)。以前的包含肽的疫苗组合物Chedid 等人(Infect Immun. 1982 年 2 月；35(2) :417-24)描述了合成胞壁肽佐剂的生物学活性。美国专利4，094，971提供了水溶性产品，当以不含油的水溶液对宿主施用时，认为该产品具有体内免疫活性。该产品是具有N-酰基胞壁酰和N-乙酰葡糖胺糖单位的酰基化肽聚糖片段。美国专利4，094，971提供了水溶性产品，当以不含油的水溶液对宿主施用时，认为该产品具有体内免疫活性。更近一些，Schmidt等人做了通过将用外源I类主要组织相容性复合物肽配体转接肿瘤细胞开发癌症疫苗的实验(Proc Natl Acad Sci U S A. 1996年9月3日； 93(18)9759-63)。Reidl 等人(Eur J Immunol. 2002 年 6 月;32 (6) 1709-16)已报道免疫刺激性寡肽和来自病毒核心抗原的阳离子肽的结合增强了其作为佐剂的效力。美国专利申请 US 2009/0123486A1概述了具有抗原和富含带正电天然和/或非天然氨基酸残基，特别是赖氨酸和亮氨酸的组合的肽的疫苗。Duryee 等人(Vaccine 2009 年 5 月 14 日；27 (22) :2981-8)通过用包含基于 9-氨基酸肽的佐剂的疫苗主动免疫而引发了对甲基苯丙胺的免疫应答。Kobiyama等人(J Immunol. 2009年2月I日，182(3) =1593-601)表明来源于先天性免疫衔接分子的信号多肽可用作一类新的疫苗佐剂。美国专利申请US 2008/0311138A1提供了包含特定胃肠肽佐剂的免疫原性组合物。Lingnau 等人(Expert Rev Vaccines. 2OO7 年 10 月；6(5) 741-6)已综述了基于 toll样受体激动剂的疫苗佐剂的主题。Takeshita等人(J Virol 2006年7月；80(13) 6218-24)所做实验表明通过激活先天性免疫，toll样受体衔接分子增强对流感和肿瘤的 DNA引发的适应性免疫应答。以前的合成肽的临床应用 在无关工作中，已开发了用于其他类型的临床治疗的小寡肽。美国专利6，184，208描述了具有式X-Tyr-Y-Phe-Z-A的肽。在该式中，X是 Arg、D-Arg, D-鸟氨酸、高精氨酸、D-高精氨酸或瓜氨酸；Y是D-鸟氨酸、D-Ala或 D-Arg ；Z是D-Ala, Gly、Pro、D-Pro或b_丙氨酸；且A是-OH或NH2。示例性的是具有 H-Arg-Tyr-(D-Ala)-Phe-Gly-OH 序列的妝(Fleishman 等人，Bull Exp Biol Med. 2007 年 9月；144(3) :309-11)。正在以商品名Dermorphin 开发这些肽以用于刺激毛发生长、体重增加、伤口愈合和修复和合成代谢过程。已测试包括稳定剂环(stabilizer ring)的皮啡肽类似物(Dermorphin analog)的镇痛、阿片样物质和佐剂活性(W0 2008/014613)。美国专利6，410，515描述了具有式X_A_ (D-Trp) -Y的肽，其中X、A和Y各自选自可选的氨基酸或其他基团的特定列表。示例性的是具有H- (D-异谷氨酸)-(D-Trp) -OH序列的肽(Semina 等人，Bull Exp Biol Med. 2008 年 7 月；146 (I) :96-9)。正在以商品名 Thymodepressin 开发作为免疫抑制剂的这些肽。美国专利6，051, 683和6，159，950连同加拿大专利申请2，276，542描述了具有式 X-Glu-Trp-Y的单独肽家族。这些肽具有在CFU-S测定中促进集落形成的能力并被开发以用于癌症治疗方面的造血作用。示例性的是具有H-IIe-Glu-Trp-OH序列的肽(Dambaeva等人，Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2002 年 11 月-12 月；(6) :55_9 和 Ziablitskii 等人，Radiats Biol Radioecol. 2003 年 I 月 _2 月；43 (I) :49_50),已以商品名本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.08.10 US 61/232,6181.一种免疫原性组合物，包括抗原和寡肽，其中所述寡肽具有式 X-Glu-Trp-Y,其中 X 为 H、Gly, Ala、Leu、lie、Val.NVaU Pro, Tyr、Phe, Trp, D_Ala、D-Leu, D_Ile、 D-Val> D-NVal> D-Pro> D-Tyr> D-Phe> D-Trp> His、Lys> Arg y -氨基丁酸或 ξ -氨基己酸；Y为 Gly、Ala、Leu、lie、Val、NVal (正缴氨酸)、Pro、Tyr> Phe> Trp> D_Ala、D-Leu> D_Ile、 D-Val、D-NVal、D-Pro> D-Tyr> D-Phe> D-Trp> Arg、y -氛基丁酸、ξ -氛基己酸、-OH、NH2> N2H3或单-或二-取代酰胺(C1-C3)，条件是当X是H时，Y不是-OH ;且其中所述寡肽起佐剂作用以促进对所述抗原的特异性免疫应答。2.根据权利要求I所述的组合物，其中所述寡肽选自Ile-Glu-Trp、His-Glu-Trp、 Glu-Trp-NH2> Glu-Trp-Arg、Lys-Glu-Trp> Arg-Glu-Trp> Glu-Trp-Tyr> Lys-Glu-Trp-Tyr> Glu-Trp-N2H3^ Glu-Trp-Gly 和 Val-Glu-Trp。3.根据权利要求I所述的组合物，其中所述寡肽是Ile-Glu-Trp。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述寡肽具有Glu上的α羧基和Trp上的氨基之间的肽键。5.根据权利要求3所述的组合物，其中所述寡肽具有Glu上的Y羧基和Trp上的氨基之间的肽键。6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述抗原是病毒抗原。7.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述抗原是细菌抗原或寄生虫抗原。8.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述抗原是肿瘤相关抗原。9.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述抗原是流感抗原。10.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述抗原是合成寡肽形式。11.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，包括来自病毒或细菌的抗原的组合。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述抗原组合呈递于活的、减毒的或灭活的病毒或细菌粒子或其提取物的表面或内部。13.根据权利要求11所述的组合物，其中所述抗原组合是来自不同病毒株的抗原的组口 ο14.根据权利要求11所述的组合物，其中所述抗原组合包括来自若干甲型流感毒株的神经氨酸酶和/或血凝素的一个或多个表位，且任选地包括来自一种或多种乙型流感毒株和/或丙型流感毒株的一个或多个表位。15.根据前述权利要求任一项所述的组合物，所述组合物对所述抗原产生比铝盐佐剂中包含相同量抗原的组合物更强烈的Thl免疫应答或细胞免疫应答。16.一种用于引发根据权利要求18或19所述的免疫应答的试剂盒，包括位于一个容器中的包含抗原和寡肽的根据权利要求1-15的免疫原性组合物，和位于另一个容器中的所述寡肽而没有所述抗原。17.一种用于生产根据权利要求1-15所述的组合物的方法，包括组合所述抗原和所述肽。18.具有下式的寡肽在制备用于引发针对特定抗原的特异性免疫应答的药剂中的用途 X-Glu-Trp-Y,其中 X 为 H、Gly、Ala、Leu、lie、Val、NVal、Pro、Tyr、Phe, Trp, D_Ala...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·扎纳，盖伊·拉隆德，
申请(专利权)人：伊姆诺科技发展公司，
类型：发明
国别省市：