本文提供包含在感染早期指定过量双链RNA(dsRNA)的异源性或天然核酸的重组痘病毒，其可进一步包含编码一种或多种共刺激分子的异源性核酸，和/或编码一种或多种感染性疾病相关抗原或肿瘤相关抗原的异源性核酸；以及包含所述重组痘病毒的药物组合物及其方法和用途。相较于缺乏指定过量早期dsRNA的异源性或天然转录单元的相同重组痘病毒，本文提供的重组痘病毒增强受试者中先天性和适应性免疫活化。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】领域本文提供的本专利技术涉及包含编码在感染早期形成双链RNA(dsRNA)的互补RNA的异源性核酸的重组痘病毒。早期dsRNA也可通过转录重组痘病毒的天然基因的两个链来产生。本文提供的重组痘病毒可进一步包含编码一种或多种共刺激分子的异源性核酸，和/或编码一种或多种感染性疾病相关抗原或肿瘤相关抗原的异源性核酸。相较于缺乏表达早期dsRNA的异源性核酸的相同重组痘病毒，这些重组痘病毒使受试者的先天性和适应性免疫活化增强。本文也提供包含任何本文提供的重组痘病毒的药物组合物以及所述重组痘病毒的方法和用途。背景免疫系统借助于检测病原体相关分子模式(PAMP)的模式识别受体(PRR)来识别多种病原体，包括病毒。PRR涵盖Toll样受体(TLR)、RIG样解旋酶(RLH)、NOD样受体(NLR)和其它迄今不太充分确定的PRR的家族(Iwasaki(2012),Annu.Rev.Microbiol.66:177-196；Desmet和Ishii(2012),Nat.Rev.Immunol.12:479-491；Melchjorsen(2013),Viruses.5:470-527)。PRR的活化会导致活化各种免疫细胞，包括树突细胞(DC)，并且最终诱导先天性和适应性免疫应答。PRR活化也导致通过诱导包括IFN-α(IFN-α)和IFN-β(IFN-β)的I型干扰素(IFN)以及所述干扰素的作用，以及诱导向迄今未感染的宿主细胞发出警报并协调免疫应答的其它细胞因子和趋化因子以及所述其它细胞因子和趋化因子的作用来诱导非免疫细胞的抗病毒状态。I型IFN例如通过上调I类和II类MHC表达，交叉递呈和活化DC来调控免疫应答的许多方面，包括先天性病原体抗性机理以及抗体产生和T细胞活化(Iwasaki和Medzhitov(2010),Science327:291-295；Desmet和Ishii(2012),Nat.Rev.Immunol.12:479-491)。生物体检测病毒存在的一种重要方式是通过正常细胞与免疫细胞两者来识别病毒RNA或DNA。TLR3、TLR7/8、TLR9和TLR13已分别被鉴定为双链RNA(dsRNA)、单链RNA(ssRNA)、DNA和核糖体RNA(rRNA)的受体。具有双链DNA(dsDNA)基因组的病毒(如疱疹病毒、腺病毒和痘病毒)通过TLR9依赖性路径和TLR9非依赖性路径被识别(Hochrein等(2004),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A101:11416-11421；Samuelsson等(2008),J.Clin.Invest118:1776-1784)。先前研究已显示痘病毒强力抑制TLR9依赖性dsDNA识别路径与TLR9非依赖性dsDNA识别路径两者。免疫细胞通过TLR9检测到痘病毒DNA导致产生I型干扰素(即IFN-α/β)和III型干扰素(即IFN-λ)以及其它细胞因子和趋化因子(Lauterbach等(2010),J.Exp.Med.207:2703-2717；Samuelsson等(2008),J.Clin.Invest118:1776-1784)。浆细胞样DC(pDC)应答于TLR7/8或TLR9依赖性刺激而选择性地有能力产生大量IFN-I和IFN-III。在pDC中，TLR9依赖性刺激导致产生IFN-I和IFN-III。DNA与其它病毒核酸两者均在受感染细胞的细胞质中被识别，由此向那些细胞发出警报以产生IFN-I和IFN-III以及其它细胞因子。TLR9非依赖性痘病毒识别路径主要由各个子组的常规树突细胞(cDC)采用(Hochrein和O'Keeffe(2008),HandbookExpPharmacol183:153-179)。病毒性感染的另一重要特征是dsRNA，其不仅由RNA病毒，而且也由具有dsDNA基因组的痘病毒在细胞感染期间产生。痘病毒感染中的dsRNA是通过从位于dsDNA基因组的上链和下链上的基因重叠转录来产生。特定来说，中期和晚期基因的转录终止不受严密调控，即导致病毒mRNA具有不同长度的长3′未翻译区域(3′UTR)的现象(Cooper,Wittek和Moss(1981),J.Virol.39:733-745；Xiang等(1998),J.Virol.72:7012-7023)。当所述转录物源于处于相反定向(即朝向彼此加以转录)的两个相邻基因时，转录产生通过彼此退火或与早期转录物退火而形成dsRNA的重叠互补mRNA链段(Boone,Parr和Moss(1979),JVirol.30:365-374)。病毒dsRNA的产生似乎主要限于痘病毒复制周期的晚期(Colby和Duesberg(1969),Nature222:940-944；Duesberg和Colby(1969),Proc.Natl.Acad.SciU.S.A64:396-403；Moss(2007),5:2905-2945)。先前已报道由病毒转录物获得的dsRNA可见于感染早期(Boone,Parr和Moss(1979),JVirol.30:365-374；Lynch等(2009),Virology391:177-186；Willis等(2009),Virology394:73-81；Willis,Langland和Shisler(2011),J.Biol.Chem.286:7765-7778)。然而，似乎存在阻止产生足量早期dsRNA以触发细胞的识别系统的选择压力，例如通过保证在相反方向上转录的邻近早期基因的高效转录终止(Smith,Symons和Alcami(1998),SeminarsinVirology8:409-418)。痘病毒已进化出在编码链上的具有序列TTTTTNT的特定早期终止信号，其使早期转录在这个序列的下游20至50个核苷酸处终止(Yuen和Moss(1987),Proc.Natl.Acad.SciU.S.A84:6417-6421)。朝向彼此加以转录的早期基因通常含有多个终止信号，从而指示所述基因的即刻早期转录终止受严密控制以避免在感染早期产生互补RNA似乎对病毒适合度是重要的。宿主细胞和生物体已产生多种dsRNA识别受体来检测病毒性感染。尽管TLR3主要在免疫细胞中表达，并且可感测细胞外dsRNA，但大多数其它dsRNA感测体(如RIG-I、MDA-5、DDX1/DDX21/DHX36、蛋白质激酶R(PKR)和2′-5′-寡腺苷酸合成酶...
【技术保护点】
一种重组痘病毒，其包含在感染早期表达过量双链RNA(dsRNA)的异源性核酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.28 EP 13005541.11.一种重组痘病毒，其包含在感染早期表达过量双链
RNA(dsRNA)的异源性核酸。
2.如权利要求1所述的重组痘病毒，其进一步包含编码一种或
多种共刺激分子的异源性序列。
3.如权利要求2所述的重组痘病毒，其中所述一种或多种共刺
激分子是TRICOM(B7-1、ICAM-1和LFA-3)。
4.如权利要求1至3中任一项所述的重组痘病毒，其进一步包
含编码一种或多种细菌、病毒、真菌、寄生虫或肿瘤抗原的异源性序
列。
5.如权利要求1至4中任一项所述的重组痘病毒，其中所述痘
病毒是正痘病毒、副痘病毒、亚塔痘病毒、禽痘病毒、野兔痘病毒、
猪痘病毒、羊痘病毒、鹿痘病毒或软疣痘病毒。
6.如权利要求5所述的重组痘病毒，其中所述正痘病毒选自由
以下组成的组：痘苗病毒、牛痘病毒和猴痘病毒。
7.如权利要求6所述的重组痘病毒，其中所述痘苗病毒选自由
以下组成的组：西储痘苗病毒、哥本哈根痘苗病毒、Dryvax(也称为
惠氏痘苗病毒)、李斯特痘苗病毒、阿卡姆贝斯2000和3000痘苗病
毒、兔痘病毒、水牛痘病毒、改良型安卡拉痘苗病毒(MVA)和巴伐利
亚诺迪克改良型安卡拉痘苗病毒(MVA-BN)。
8.如权利要求1至7中任一项所述的重组痘病毒，其中产生
dsRNA的所述异源性核酸包含编码部分或完全互补RNA转录物的序
列，其中RNA转录物的互补部分在转录之后退火以形成dsRNA。
9.如权利要求8所述的重组痘病毒，其中所述互补RNA转录物
包含蛋白质编码开放阅读框(ORF)或非蛋白质编码基因。
10.如权利要求9所述的重组痘病毒，其中所述RNA转录物的
所述互补部分包含50个或更多个核苷酸。
11.如权利要求10所述的重组痘病毒，其中所述RNA转录物的
\t所述互补部分包含50个与700个之间的核苷酸。
12.如权利要求10所述的重组痘病毒，其中所述RNA转录物的
所述互补部分包含超过700个核苷酸。
13.如权利要求10所述的重组痘病毒，其中编码完全或部分互
补RNA转录物的所述异源性核酸在互补区域内是相同的，或在互补
区域内具有大于99％、大于95％、大于90％、大于80％或大于70％
的相似性。
14.如权利要求13所述的重组痘病毒，其中编码部分或完全互
补转录物的两个相同或高度相似序列被一个或多个...
【专利技术属性】
技术研发人员：于尔根·豪斯曼，M·沃尔费斯泰特，
申请(专利权)人：巴法里安诺迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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