本发明专利技术公开了一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因。本发明专利技术还公开一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因所编码的蛋白。本发明专利技术还公开一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗包含如上所编码的蛋白。本发明专利技术提供的亚单位疫苗不仅能够激发B细胞免疫产生抗体，更能够充分激发T细胞免疫，T细胞免疫对PRRSV这类对免疫系统有抑制作用的病毒的清除是非常重要的，从而能够有效保护猪只，减少被蓝耳病病毒感染，用于防治猪蓝耳病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子免疫学和农学的基因工程
，特别涉及一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，用于预防猪呼吸和免疫系统综合征(PRRS，俗称蓝耳病)。
技术介绍
猪蓝耳病(PRRS)是一种具有高度传染性和高度破坏性的疾病，呈地域性爆发和流行性，是养猪业头号传染病威胁。随着社会的发展和人民生活水平的提高，对肉、蛋、奶等畜牧养殖业产品的需求越来越高。而基于我们的传统和生活习惯，猪肉又是占了需求中的重中之重。生猪养殖业在市场需求的刺激下迅速蓬勃发展，已经逐渐形成了集约化，规模化的养殖模式。这种模式在提高效率和节约成本的同时，也带来了由于养殖密度过大等原因造成的各种传染病多发。例如，养猪业最常见的猪生殖与呼吸综合症(俗称)蓝耳病等病毒性疾病。蓝耳病是由猪生殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的。该病毒传染性极强，可通过空气，接触，体液，血液等多种方式传播，且感染后死亡率极高。被感染的断奶前仔猪的死亡率高达80-100％。由于PRRSV的基因组DNA复制不具有严格的纠错机制，所以病毒在全世界各地传播时，随着时间的推移和空间距离的增大，产生出了各种变种亚型。已知在中国主要流行的的蓝耳病亚型-中国高致病性亚型(HP-PRRSV)就是PRRSV北美亚型病毒的在进入中国之后，由于基因突变产生的一个变种。蓝耳病病毒具有很强的种属特异性，只感染猪类，各种品种、不同年龄和性别的猪只均可感染，但以妊娠期母猪和断奶前一月龄以内的仔猪最易感
染。患病猪和无临床症状的病毒携带者是本病的重要传染源。传染途径多样化，包括接触感染、体液传播、空气传播和精液传播，蓝耳病病毒可以穿透血胎屏障，因此孕猪可以通过胎盘垂直传播给仔猪。易感猪与带毒猪直接接触或与污染有PRRSV的猪舍、运输工具、水源和食物接触均可受到感染。猪群一旦感染蓝耳病，用常规方法就很难清除。持续性感染是PRRS流行病学的重要特征，PRRSV可在感染猪体内存在很长时间。在国内，接种传统的灭活病毒疫苗和减毒疫苗是防治蓝耳病等的主要方式。目前的减毒苗主要分为两类，第一类是源自经典毒株的减毒苗，例如哈兽研、海利、大北农和易邦生产的CH1R株苗，南农高科和瑞普生产的R98株和勃林格VR2332株等。该类苗毒力相对较低，虽然注射后在猪群中持续存在，但是不容易产生病毒复活感染的现象。缺点是与目前流行毒株亲缘关系较远；对高致病性蓝耳病仅仅有部分同源性，保护力不足。第二类是源自高致病性蓝耳病病毒的弱毒苗，目前有江西株和湖南株两种，源自变异的高致病性蓝耳病毒株，分离自2006年。这一类弱毒苗与现在国内流行毒株同源性较高，相对于灭活苗的免疫保护效率更高，表现为可降低感染压力，减轻病毒血症，减少排毒，防止由蓝耳病引起的呼吸系统、生殖系统疾病，防止由蓝耳病引起的繁殖障碍。但是弱毒苗的缺点也十分明显：残余毒力较强，对于种猪和低日龄仔猪应用安全性不确定，并且在猪体内存在时间长，容易发生毒力返强，在这种情况下，减毒疫苗非但不能治病，反而成了助纣为虐的特洛伊木马，协助病毒攻破猪的免疫系统。存在免疫抑制作用，接种毒力偏强的PRRS弱毒疫苗可能导致免疫抑制，主要表现为持续免疫某种PRRS弱毒疫苗一定时期后，猪群继发感染加重，猪场生产水平持续恶化。这是许多猪场认为免疫PRRS疫苗无效甚至有害的根源。目前国内养殖业预防和治疗蓝耳病等病毒性传染病还依赖大量使用化学药物，例如病毒灵(盐酸吗啉胍)等。而化药除了治疗病毒性传染病特异性
差、副作用强等缺点外，另一个重要缺陷就是存在药物残留，目前药物残留已成为猪肉安全最大的隐患之一。人吃了含药物和激素残留的猪肉食品，能诱发儿童提前发育、女性乳腺癌、卵巢癌等疾病，还会引起过敏反应。药物残留也可能导致病原菌产生耐药性，经常食用低剂量药物残留的食品可使细菌产生耐药性并破坏人体肠道的菌群平衡。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种融合基因。本专利技术的目的之二是提供一种根据融合基因所编码的蛋白。本专利技术的目的之三是提供一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗包含所编码的蛋白，所述亚单位疫苗不仅能够激发B细胞免疫产生抗体，更能够充分激发T细胞免疫，T细胞免疫对PRRSV这类对免疫系统有抑制作用的病毒的清除是非常重要的，从而能够有效保护猪只，减少被蓝耳病病毒感染，用于防治猪蓝耳病。本专利技术公开了一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因。一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因所编码的蛋白。一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗包含所编码的蛋白。优选的是，其中，上述所编码的蛋白包括：猪蓝耳病病毒(PRRSV)GP5蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列和猪蓝耳病病毒(PRRSV)GP4蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列相拼接的第一部分，白喉毒素DT的部分连续多核苷酸序列的第二部分和转运结构域-内质网定位信号肽的第三部分；其中，所述第一部分的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述第二部分的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述第三部分的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。优选的是，其中，上述所编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。优选的是，其中，所述第一部分的多核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述第二部分的多核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述第三部分的多核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。优选的是，其中，所述亚单位疫苗的有效浓度为200-300ug/剂。一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗包含根据如SEQ ID No.9所示的多核苷酸序列所编码的蛋白，所编码的蛋白包括：铜绿假单胞菌外毒素的细胞结合和转膜结构域的部分连续多核苷酸序列的第一部分，猪蓝耳病病毒(PRRSV)GP5蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列和猪蓝耳病病毒(PRRSV)GP4蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列相拼接的的第二部分和转运结构域-内质网定位信号肽的第三部分；其中，所述第一部分的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述第二部分的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示；所述第三部分的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。应用上述能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗防治猪蓝耳病。一种上述的能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗防治猪蓝耳病的方法，其特征在于，辅以佐剂。优选的是，其中，所述佐剂为无机佐剂、白油佐剂以及福氏佐剂。其中，所述无机佐剂包括氢氧化铝佐剂、明矾佐剂等；所述白油佐剂可为油包水型白油佐剂(例如：法国SEPPIC MONTANIDE ISA11R VG)，或者水包油型白油佐剂(例如：法国SEPPIC MONTANIDE ISA61 VG)，优选油包水型白油佐剂(例如：法国SEPPIC
MONTANIDE ISA 11R VG)。本专利技术的有益效果是：本申请专利技术人通过对在全国四个有代表性的不同地域的PRRSV生物样本进行亚型分析和全基因组序列分析，进行T-细胞抗原表位筛选，来针对性地筛选特异性的、高效的病毒抗原。根据序列分析和T-细胞、B-细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因。
【技术特征摘要】
1.一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因。2.一种如SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列的融合基因所编码的蛋白。3.一种能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗包含如权利要求2所编码的蛋白。4.如权利要求3所述的能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗，如权利要求2所编码的蛋白包括：猪蓝耳病病毒GP5蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列和猪蓝耳病病毒GP4蛋白T-细胞抗原表位部分连续多核苷酸序列相拼接的第一部分，白喉毒素DT的部分连续多核苷酸序列的第二部分和转运结构域-内质网定位信号肽的第三部分；其中，所述第一部分的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述第二部分的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述第三部分的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。5.如权利要求4所述的能够诱导针对猪蓝耳病...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨波，杨建，
申请(专利权)人：金福赛北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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