赋予针对诺如病毒的保护性免疫应答的方法技术

本发明专利技术涉及包含诺如病毒抗原和佐剂的疫苗组合物，特别是单价ＶＬＰ的混合物和多价ＶＬＰ的混合物，以及在人类受试者中赋予针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请属于疫苗，特别是针对诺如病毒(norovirus)的疫苗的领域。另外，本专利技术 涉及制备疫苗组合物的方法和诱导保护性免疫应答的方法。关于政府支持的声明本专利技术是在来自美国陆军医学研究和物资司令部的政府支持下产生的，合同号 W81XWH-05-C-0135。政府对本专利技术可具有某些权利。
技术介绍
诺如病毒是不可培养的人类杯状病毒，已经成为非细菌性胃肠炎的流行性爆发的 单一最重要起因(Glass et al. ,2000 ；Hardy et al.，1999)。在灵敏的分子诊断测定法的 开发之前，对诺如病毒的临床意义的重视不够。原型基因小组Kgenogroup I)诺沃克病毒 (NV)基因组的克隆和自重组杆状病毒表达系统生成病毒样颗粒(VLP)引起了测定法的开 发，其揭示了分布广泛的诺如病毒感染(Jiang et al. 1990 ； 1992)。诺如病毒是单链、正义RNA病毒，含有不分段的RNA基因组。病毒基因组编码三个 可读框，其中后两个分别规定主要衣壳蛋白和次要结构蛋白的生成(Glass et al. 2000)。 当在真核表达系统中以高水平表达时，NV和某些其它诺如病毒的衣壳蛋白自组装成在结构 上模拟天然诺如病毒病毒粒(virion)的VLP。当通过透射电子显微术观看时，VLP在形态 上与自人粪样品分离的感染性病毒粒不可区分。针对诺如病毒的免疫应答是复杂的，而且现在正在阐明保护的关联(correlate)。 用天然病毒实施的人志愿者研究证明了粘膜衍生的记忆免疫应答提供免于感染的短期保 护并提示疫苗介导的保护是可行的(Lindesmith et al. 2003 ；Parrino et al. 1997 ；Wyatt et al. , 1974)。虽然由于VLP的可得性和它们以大量生成的能力，诺如病毒不能在体外培养，但 是在限定诺如病毒衣壳的抗原拓扑学和结构拓扑学方面已经取得了可观的进步。VLP保留 病毒衣壳蛋白的真实构象(authentic confirmation)，但是缺乏感染性遗传物质。结果， VLP模拟病毒与细胞受体的功能相互作用，由此引发适宜的宿主免疫应答，但是缺乏繁殖 或引起感染的能力。与NIH联合，Baylor College of Medicine在学术性的、调查人发起 的I期临床试验中研究了人志愿者中针对NV VLP的体液、粘膜和细胞免疫应答。口服施 用VLP在健康成人中是安全的且有免疫原性的(Ball et al. 1999 ；Tacket et al. 2003)。 在其它学术中心，在动物模型中进行的临床前实验已经证明了当与细菌外毒素佐剂一 起鼻内施用时针对VLP的免疫应答的增强(Guerrero et al. 2001 ；NicolIier-Jamot et al. 2004 ；Periwal et al.2003 ；Souza et al. (2007)Vaccine, doi:10. 1016/ j. vaccine. 2007. 09. 040)。然而，没有研究报告使用任何诺如病毒疫苗能够实现针对诺如病毒的保护性免疫。专利技术概述本专利技术提供了在受试者(特别是人类受试者)中诱导针对诺如病毒感染的保护性 免疫的方法，包括施用包含至少一种诺如病毒抗原的疫苗。在一个实施方案中，所述抗原是 诺如病毒病毒样颗粒(VLP)。本专利技术的方法中所使用的疫苗可进一步包含一种或多种佐剂。 所述诺如病毒VLP可以选自基因小组I或基因小组II病毒或其混合物。在一个实施方案 中，所述疫苗以约0.01%至约80% (以重量计)的浓度包含诺如病毒VLP。在另一个实施 方案中，所述疫苗包含约1 μ g至约IOOmg每剂的诺如病毒VLP剂量。在一些实施方案中，所述疫苗进一步包含投递剂，其功能为增强抗原摄取、提供贮 存效应、延长抗原在投递部位的保留时间、或经由投递部位的细胞紧密连接的松弛来增强 免疫应答。所述投递剂可以是生物粘着剂，优选选自下组的粘膜粘着剂硫酸皮肤素、软骨 素、果胶、粘蛋白、藻酸盐、聚丙烯酸的交联衍生物、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羟丙 基甲基纤维素、凝集素、菌毛/伞毛蛋白质、和羧甲基纤维素。优选的是，所述粘膜粘着剂是 多糖。最优选的是，所述粘膜粘着剂是壳聚糖或含有壳聚糖的混合物，诸如壳聚糖盐或壳聚 糖碱。在其它实施方案中，所述疫苗包含佐剂。所述佐剂可以选自下组toll样受体 (TLR)激动剂、单磷酰基脂质A (MPL )、合成脂质A、脂质A模拟物或类似物、铝盐、细胞因 子、皂苷、胞壁酰二肽(MDP)衍生物、CpG寡聚物、革兰氏阴性细菌的脂多糖(LPS)、聚磷腈 (polyphosphazenes)、乳剂、病毒体、Cochleates、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微粒、泊 洛沙姆颗粒、微粒、内毒素(例如细菌内毒素)和脂质体。优选的是，所述佐剂是toll样受 体(TLR)激动剂。更优选的是，所述佐剂是MPL 。本专利技术的方法包括施用配制成液体或干粉的诺如病毒疫苗。干粉配制剂可含 有直径约10至约500微米的平均粒度。适合于施用所述疫苗的路径包括粘膜、肌肉内、 静脉内、表皮下(subcutaneous)、真皮内(intradermal)、真皮下(subdermal)、或经皮 (transdermal)。具体而言，施用路径可以是肌肉内或粘膜，优选粘膜施用路径，包括鼻内、 口服、或阴道施用路径。在另一个实施方案中，所述疫苗配制成鼻腔喷雾、滴鼻剂、或干粉， 其中所述疫苗是通过鼻道内的快速沉积自靠近鼻通道的装有疫苗的装置施用的。在另一个 实施方案中，所述疫苗是施用至一个或两个鼻孔的。附图简述附图说明图1显示了在用干粉VLP免疫的家兔中引发了诺沃克病毒(NV)特异性IgG。经 鼻内施用路径在第1天、第22天和第43天(箭头)用50 μ g NV-VLP+50 μ g MPL给家兔给 药3次。在所示日子通过ELISA对来自每只家兔的血清测试NV-VLP特异性IgG。只有接种 VLP疫苗的家兔具有NV-VLP特异性IgG，而未处理组和安慰剂处理组没有检测到抗原特异 性抗体(数据未显示)。显示了应答的算术均值，并以U/mL(lU Iyg)来表述。棒指示均 值的标准误差。图2描绘了测量来自用对照(佐剂/赋形剂)或含有三种剂量(5，15，50 μ g)之 一的诺沃克病毒VLP的疫苗配制剂免疫的人志愿者的血清IgA(小图A)和IgG(小图B)水 平的ELISA测定法的结果。为每个剂量水平显示了第二次免疫接种后35天(第56天)时 抗VLP滴度的几何均值倍数增加。志愿者在第0天和第21天接受免疫接种。图3显示了接受含50 μ g剂量诺沃克病毒VLP的疫苗配制剂或对照(佐剂/赋形 剂)的人志愿者中的IgA(小图A)和IgG(小图B)抗体分泌细胞(ASC)的水平。将每106 个外周血单核细胞(PBMC)的ASC几何均值(GMN)对研究天数(第7天或第28天)(具体 是免疫接种后七天)绘图。志愿者在第0天和第21天接受免疫接种。专利技术详述本专利技术涉及在受试者中引发针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法。具体而言， 本专利技术提供了给人施用包含诺如病毒VLP和至少一种佐剂的疫苗的方法，其中所述疫苗赋 予免于诺如病本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在人类中引发针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法，包括对人施用包含诺如病毒病毒样颗粒（ＶＬＰ）和至少一种佐剂的疫苗。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-9-18 60/973,389;US 2007-11-9 60/986,826一种在人类中引发针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法，包括对人施用包含诺如病毒病毒样颗粒(VLP)和至少一种佐剂的疫苗。2.权利要求1的方法，其中所述诺如病毒VLP选自下组诺如病毒基因小组I和基因 小组II病毒株。3.权利要求1的方法，其中所述诺如病毒VLP是单价VLP。4.权利要求1的方法，其中所述诺如病毒VLP是多价VLP。5.权利要求1的方法，其中所述疫苗包含第二种类型的诺如病毒VLP。6.权利要求5的方法，其中所述第一种和第二种诺如病毒VLP是来自不同基因小组的 单价VLP。7.权利要求6的方法，其中所述第一种诺如病毒VLP是诺沃克病毒VLP且所述第二种 诺如病毒VLP是休斯顿病毒VLP。8.权利要求1的方法，其中所述疫苗进一步包含投递剂。9.权利要求8的方法，其中所述投递剂是生物粘着剂。10.权利要求9的方法，其中所述生物粘着剂是粘膜粘着剂。11.权利要求10的方法，其中所述粘膜粘着剂选自下组硫酸皮肤素、软骨素、果胶、粘 蛋白、藻酸盐、聚丙烯酸的交联衍生物、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羟丙基甲基纤维 素、凝集素、菌毛/伞毛蛋白质、和羧甲基纤维素。12.权利要求11的方法，其中所述粘膜粘着剂是多糖。13.权利要求12的方法，其中所述多糖是壳聚糖、壳聚糖盐、或壳聚糖碱。14.权利要求1的方法，其中所述佐剂选...

【专利技术属性】
技术研发人员：查尔斯理查德森，托马斯S维德维克，托马斯R福伯特，
申请(专利权)人：莱戈赛特医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]