本发明专利技术提供一种副猪嗜血杆菌病和猪多杀性巴氏杆菌病二联疫苗，它包含至少一种副猪嗜血杆菌抗原和至少一种猪巴氏杆菌抗原；优选的是，所述副猪嗜血杆菌抗原至少包括4型和5型两种血清型，所述猪多杀性巴氏杆菌抗原至少包括A型、B型和D型三种荚膜血清型。使用本发明专利技术提供的二联疫苗，副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌这两种抗原相互并不会相互干扰或影响，含副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌抗原的疫苗组合物不仅对两种杆菌均能够产生保护性免疫应答，且副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌的抗原具有相互增强的免疫效果；本发明专利技术的二联疫苗的免疫保护期长、可达一年之久。本发明专利技术还相应提供该二联疫苗的制备方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
副猪嗜血杆菌病和巴氏杆菌病是目前我国猪群中主要的两种细菌传染病。副猪嗜血杆菌(HaemophiIusparasuiS，Hps)病又叫猪Glasser病，该病影响2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶前后和保育阶段发病，通常见于51周龄的猪，发病率一般在1(T15%，严重时死亡率可达到50%。主要临床症状表现为咳嗽，呼吸困难，消瘦，跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为胸膜炎，心包炎，腹膜炎，关节炎和脑膜炎等。此外，副猪嗜血杆菌还可引起败血症，在不出现典型的浆膜炎时就呈现发绀，皮下水肿和肺水肿，乃至死亡。副猪嗜血杆菌急性感染后可能留下后遗症，即母猪流产，公猪慢性跛行。在大量分离副猪嗜血杆菌的基础上，发现该菌的血清型复杂多样，按Kieletein-Rapp-Gabriedson (KRG)琼脂扩散血清分型方法，至少可将副猪嗜血杆菌分为15个血清型；根据我国血清流行病学调查和分离菌株的鉴定，以4、5型最为流行。近年来，由于抗生素滥用导致耐药株的出现，以及突发新的呼吸道综合征，使得该病日趋流行，危害日渐严重。猪多杀性巴氏杆菌病(swine pasteurellosis)是由多杀性巴氏杆菌引起的一种传染病，又名猪肺疫、猪出血性败血症，俗称“锁喉风”。该病的特征最急性型呈败血症症状，咽喉部急性肿胀，高度呼吸困难；急性型呈纤维素性胸膜肺炎症状；慢性型症状不明显，多为慢性肺炎、胃肠炎以及逐渐消瘦，有时伴发关节炎，在国外又将该型称为肺炎巴氏杆菌病。该病广泛分布于世界各地，是猪的一种常见传染病；发病率达40%，死亡率在5%左右。多杀性巴氏杆菌按荚膜可分为A、B、D、E四种荚膜血清型。在美国及欧洲一些国家，猪多杀性巴氏杆菌病多以荚膜A型菌流行为主，其次是荚膜D型菌，B型菌所占比例较少。而在我国，过去多以流行B型菌为主，由于长期用B型菌苗免疫，取得较好的效果，B型菌株引起的多杀性巴氏杆菌病已较少发生。随着我国养猪业的规模化发展，A型和D型菌株在我国也呈流行趋势，并在一些地区已造成一定危害，随着我国集约化养猪业的迅猛发展，猪群巴氏杆菌病的报道逐渐增多。采用疫苗进行免疫预防是国内外控制副猪嗜血杆菌病和猪巴氏杆菌病的根本手段，而市场销售的商品疫苗只有副猪嗜血杆菌病灭活疫苗单苗，猪多杀性巴氏杆菌单苗和活苗；如专利申请CN101721696A提供一种猪副嗜血杆菌血清4型、5型和13型三价灭活油乳剂疫苗；它应用我国猪副嗜血杆菌三个主要的流行血清型的分离株作为抗原，通过用TSB肉汤培养扩繁24h后，经过0.3%甲醛灭活ll-13h，三个血清型的抗原以1:1:1的比例混合，然后加入与抗原总体积相等的油相，再经乳化制备而成。用于预防由当前流行的猪副嗜血杆菌主要血清型菌株引起的猪的纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。这些疫苗的应用起到了一定的预防作用，但疫苗的免疫效果不太理想和保护期较短，另外，大多现有方案中使用的弱毒苗有不易保存和存在散毒的风险等问题。病原流行株的改变和混合感染已使现有疫苗很难达到预期的免疫效果；而且市售商品疫苗需多次免疫，成本较高，对猪只的应激较大；另外同时针对控制副猪嗜血杆菌病和猪巴氏杆菌病的疫苗，国内外的研究还是空白。因此，需要开发一种副猪嗜血杆菌病和猪巴氏杆菌病二联疫苗以解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种可预防副猪嗜血杆菌病和多杀性巴氏杆菌病的二联疫苗，其中优选包含抗原成分为灭活的副猪嗜血杆菌4型和5型，多杀性巴氏杆菌A型、B型和D型，佐剂为兽医学可接受的佐剂。并提供制备该二联灭活疫苗的方法。本专利技术解决了副猪嗜血杆菌单苗和多杀性巴氏杆菌单苗免疫程序不同的问题，并且发现二者在免疫效果上具有相互促进的作用，本专利技术疫苗具有安全性能高、免疫原性好、免疫期长等优点；并能降低成本，降低免疫劳动量，减少动物应激，可以满足不同用户的要求。 本专利技术提供一种副猪嗜血杆菌病和猪多杀性巴氏杆菌病二联疫苗，它包含至少一种副猪嗜血杆菌抗原和至少一种猪巴氏杆菌抗原；优选的是，所述副猪嗜血杆菌抗原至少包括4型和5型两种血清型，所述猪多杀性巴氏杆菌抗原至少包括A型、B型和D型三种荚膜血清型。本专利技术通过大量的筛选研究，发现副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌的抗原制备的疫苗组合物，两种抗原并不会相互干扰或影响；相反地，含副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌抗原的疫苗组合物对两种杆菌均能够产生保护性免疫应答的同时，还意外发现副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌的抗原具有相互增强的免疫效果。因此本专利技术在于提供预防或治疗副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌感染的疫苗组合物。为了实现上述目的，本专利技术预防或治疗副猪嗜血杆菌和猪巴氏杆菌感染的抗原组合物，其包含至少一种副猪嗜血杆菌抗原和至少一种猪巴氏杆菌抗原。本专利技术中，副猪嗜血杆菌抗原是指含有至少一种副猪嗜血杆菌抗原形式的任何组合物；所述副猪嗜血杆菌抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗副猪嗜血杆菌感染的免疫应答。所述副猪嗜血杆菌为包括本领域技术人员熟知的临床分离的野毒株，如包含目前已鉴定的f 15个血清型。优选地，所述副猪嗜血杆菌抗原是完整的副猪嗜血杆菌；优选所述抗原为灭活形式；更优选，所述副猪嗜血杆菌抗原是灭活的血清型为4型和5型的混合抗原；最优选为灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株，和灭活的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株。本专利技术的副猪嗜血杆菌抗原还可以包含以下组合物的任一种抗原:如勃林格殷格翰公司的Ingelvac HP-1 ;海博莱公司(Hipra)的Hiprasuis-Glasser ;武汉科前动物生物制品有限责任公司的副猪嗜血杆菌灭活疫苗(4型MD0322株+5型SH0165株)。正如本领域技术人员所知，不同的微生物野外分离株在基因序列上有微小的变异，然而，当变异不影响其蛋白质合成、结构或者主要作用功能区时，该微生物之他种野外分离株即使基因序列无法百分之百相同，其基本的生理功能并不会有所改变。因此，目前国际上常使用16S Ribosomal RNA (16S rRNA)来进行细菌型的分辨，因此在相似性的比较上可以用16S rRNA来进行比对而得到其同源性。所以，在16S rRNA具有同源性的前提下，本专利技术所使用的副猪嗜血杆菌抗原并不限定于本专利技术所使用的野外分离株，16s rRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的染色体基因组中。16S rRNA具有高度的保守性和特异性以及该基因序列足够长(包含约50个功能域)。因此，本专利技术包括与副猪嗜血杆菌两株菌株(JS株、ZJ株)16S rRNA的同源性在80%上以上的菌株，更优选与JS株或ZJ株16S rRNA同源性在至少90%以上，优选地至少95%以上的副猪嗜血杆菌菌株；即不改变副猪嗜血杆菌两株菌株(JS株、ZJ株)16S rRNA的前提下，本领域技术人员可以通过简单的筛选或诱变本专利技术的副猪嗜血杆菌，获得与本专利技术副猪嗜血杆菌16S rRNA高度同源的菌株，并获得相应地具有相同或相似免疫原性的抗原组合物。优选地，本专利技术的疫苗组合物中所述血清4型副猪嗜血杆菌JS株灭活前含量和所述血清5型副猪嗜血杆菌ZJ株灭活前含量均为I X IO9CFU/头份。猪巴氏杆菌抗原是指含有至少一种猪巴氏杆菌抗原形式的任何组合物，所述猪巴氏杆菌抗原接种猪可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种副猪嗜血杆菌病和猪多杀性巴氏杆菌病二联疫苗，它包含至少一种副猪嗜血杆菌抗原和至少一种猪巴氏杆菌抗原。
【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌病和猪多杀性巴氏杆菌病二联疫苗，它包含至少一种副猪嗜血杆菌抗原和至少一种猪巴氏杆菌抗原。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述二联疫苗中至少包括4型和5型两种副猪嗜血杆菌抗原。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述4型和5型两种副猪嗜血杆菌抗原分别为4型JS株和5型ZJ株。4.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述4型和5型两种副猪嗜血杆菌抗原分另Ij为与4型JS株和5型ZJ株的16S rRNA的同源性在80%以上的菌株，优选同源性在90%以上，更优选同源性在95%以上。5.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述二联疫苗中至少包括A型、B型和D型三种猪多杀性巴氏杆菌抗原。6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述A型、B型和D型三种猪多杀性巴氏杆菌抗原分别为A型HN5株、B型C44-1株和D型HB4株。`7.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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