一种用于培养副猪嗜血杆菌的液体培养基制造技术

本发明专利技术提供一种副猪嗜血杆菌培养用的液体培养基，其包含有如下的组分：胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酵母粉、牛血清和辅酶Ⅰ，其pH值为7.2～7.4。本发明专利技术的培养基通过补充各种微生物所需要的营养成分，并通过氢氧化钠有效控制培养基中的pH值，有利于副猪嗜血杆菌的生长，活菌数均不低于109CFU/ml，并将副猪嗜血杆菌菌液制备灭活疫苗，其安全性和免疫效力均良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病原培养
，具体涉及一种用于培养副猪嗜血杆菌的液体培养基。
技术介绍
猪副猪嗜血杆菌病，又称猪革拉斯氏病(disease)，是由副猪嗜血杆菌引起的以多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的传染病，是近年来严重危害世界养猪业发展的重要细菌性传染病之一。目前，已经证实副猪嗜血杆菌在我国绝大多数猪场存在和流行，主要影响5～8周龄的仔猪，发病率一般为l0％～15％，严重时死亡率可达50％以上，给我国养猪业造成巨大的经济损失。但目前针对副猪嗜血杆菌的培养存在很多问题，比如培养基成本高、营养要求高、pH值要求严格，培养密度低等。这都对该疫苗的研究造成严重影响，因此研制一种副猪嗜血杆菌的高密度培养基，具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的在于针对现有技术中的不足，提供一种高效能、低成本的副猪嗜血杆菌液体培养基的制备，从而弥补现有技术的不足。本专利技术的液体培养基，其包含有如下的组分：胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酵母粉、牛血清和辅酶Ⅰ，其pH值为7.2～7.4。其组分浓度为胰蛋白胨18～25.0g/L、大豆蛋白胨3.0～5.0g/L、氯化钠5.0g/L、磷酸氢二钾3.0～4.0g/L、葡萄糖2.0～3.0g/L、酵母粉1.0～5.0g/L、灭活牛血清30ml/L～100ml/L、辅酶Ⅰ1.0～30g/L，pH值调至7.2～7.4。作为优选，其组分浓度为胰蛋白胨22.0g/L、大豆蛋白胨4.0g/L、氯化钠5.0g/L、磷酸氢二钾3.0g/L、葡萄糖2.5g/L、酵母粉3.0g/L、灭活牛血清50ml/L、辅酶Ⅰ0.1g/L，pH值调至7.2～7.4。上述培养基的制备方法如下：分别称取胰蛋白胨，大豆蛋白，氯化钠，磷酸氢二钾，葡萄糖，酵母粉，加入去离子水，定容后充分摇匀溶解，调pH值至7.2～7.4，121℃高压蒸汽灭菌15min；冷却后，按无菌要求加入灭活牛血清和过滤除菌的1％NAD辅酶Ⅰ。本专利技术的培养基通过补充各种微生物所需要的营养成分，并通过氢氧化钠有效控制培养基中的pH值，有利于副猪嗜血杆菌的生长，活菌数均不低于109CFU/ml，并将副猪嗜血杆菌菌液制备灭活疫苗，其安全性和免疫效力均良好。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。实施例1按照不同配方制备本专利技术培养基1培养基制备按不同的培养基配方配制6种不同成分的培养基。具体配方见表1。表1液体培养基制备方法实施例2不同配方液体培养基的筛选：将副猪嗜血杆菌YBH05株(副猪嗜血杆菌已于2011年11月23日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCCNo.5480)的菌液，分别按5％接种上述6种液体培养基，置37℃，150r/min振荡培养，培养时间均为24小时，于培养不同时间分别取样进行活菌计数。不同配方液体培养基的筛选试验结果表明，按照配方三、配方四制备的液体培养基培养效果较好，14～16小时活菌数均不低于109CCU/ml，配方五和配方六因为培养基中的血清等辅液成分加入量较高，使培养基营养过于丰富，导致YBH05株生长过快，衰亡也较快，且血清等辅液成分加入量高，也增加了生产成本；配方一和配方二培养菌液密度较低。综合考虑，最终选择配方三制备的液体培养基来验证培养效果。结果见表2。表2：6种液体培养基培养不同时间活菌计数结果实施例3：本专利技术培养基与胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基培养效果比较将YBH05株冻干种子复苏纯化后，按3-5％分别接种胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基和本专利技术的配方三的液体培养基，分别置37℃，150r/min振荡培养24小时，于培养不同时间分别取样进行活菌计数。试验结果表明，应用本专利技术培养基，不同培养时间的活菌量均高于胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基。不同培养时间的活菌量结果见表3。表3：培养基的选择试验结果实施例4：本专利技术培养基的验证应用本专利技术配方三的培养基发酵培养3批YBH05株菌液，分别进行活菌计数，以验证培养工艺的可行性。验证结果表明，YBH05株的菌液活菌量为2.5～3.0×109CFU/ml，本专利技术培养基的培养效果确实可行。结果见表4。表4本专利技术验证结果使用其它副猪嗜血杆菌作为种子的培养效果也表明本专利技术的培养基也具有很好的效果。由上述试验结果可以看出本专利技术培养基在培养过程中培养时间短，生长快、活菌量高，非常适合副猪嗜血杆菌的大规模生产培养。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液体培养基，其特征在于，所述的液体培养基其包含有如下的组分：胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酵母粉、牛血清和辅酶Ⅰ，其pH值为7.2～7.4。

【技术特征摘要】
1.一种液体培养基，其特征在于，所述的液体培养基其包含有如下的组分：胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酵母粉、牛血清和辅酶Ⅰ，其pH值为7.2～7.4。2.如权利要求1所述的液体培养基，其特征在于，所述的液体培养基，其组分浓度如下：胰蛋白胨18～25.0g/L、大豆蛋白胨3.0～5.0g/L、氯化钠5.0g/L、磷酸氢二钾3.0～4.0g/L、葡萄糖2.0～3.0g/L、酵母粉1.0～5.0g/L、灭活牛血清30ml/L～100ml/L、辅酶Ⅰ1.0～30g/L，pH值调至7.2～7.4。3.如权利要求1或2所述的液体培养基，其特征在于，所述的液体培养基，其组分浓度如下：胰蛋白胨22.0g/L、大豆蛋白胨...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭莉莉，宋新宇，韩乃君，邹桂荣，
申请(专利权)人：青岛易邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37