他克莫司检测方法技术

本发明专利技术公开了一种他克莫司检测方法，包括以下步骤：将抗他克莫司特异性抗体包被在固相支持物上，加入待测样本和他克莫司酶标偶联物；使所述待测样本中他克莫司与所述他克莫司酶标偶联物竞争性地结合抗所述他克莫司特异性抗体；经固相ELISA洗涤步骤后，加入对应酶的底物显色，测量相应的吸光值，对照他克莫司ELISA检测标准曲线，获取待测样本中他克莫司的含量。本发明专利技术的检测方法，特异性强，可以准确的确定待测样本中是否存在他克莫司，同样可以准确地确定他克莫司的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，特别涉及一种。
技术介绍
他克莫司(Tacrolimus, FK506),其结构式如式⑴所示。权利要求1.一种，其特征在于包括以下步骤 将抗他克莫司特异性抗体包被在固相支持物上，加入待测样本和他克莫司酶标偶联物；使所述待测样本中他克莫司与所述他克莫司酶标偶联物竞争性地结合抗所述他克莫司特异性抗体；经固相ELISA洗涤步骤后，加入对应酶的底物显色，测量相应的吸光值，对照他克莫司ELISA检测标准曲线，获取待测样本中他克莫司的含量， 其中，所述抗他克莫司特异性抗体由他克莫司免疫原免疫动物得到，所述他克莫司免疫原的结构式如(I)所示2.根据权利要求I所述的，其特征在于载体为具有免疫原性的蛋白质。3.根据权利要求I所述的，其特征在于所述R为N-(CH2)n-COO-或N-O-(CH2)n-COO-, η是I至20之间的整数。4.根据权利要求3所述的，其特征在于所述R为N-O-(CH2)n-COO-,η是I至20之间的整数。5.根据权利要求4所述的，其特征在于R为N-O-(CH2)3-C00-。6.根据权利要求I所述的，其特征在于所述他克莫司ELISA检测标准曲线的制备方法包括 (1)将他克莫司粉末溶解于甲醇溶液，制备成lmg/ml的储存液，用ELISA缓冲液将储存液依次稀释为 100ng/ml、50ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、5ng/ml 和 Ong/ml 的标准样品，其中，ELISA 缓冲液含有 50. OmM Tris, 145mM NaCl 和 O. 25% 的 BSA ； (2)将抗他克莫司特异性抗体包被在固相支持物上，加入所述标准样品和他克莫司酶标偶联物，使标准样品的他克莫司与他克莫司酶标偶联物竞争性地结合抗他克莫司特异性抗体，经固相ELISA洗涤步骤后，加入对应酶的底物显色，测量相应的吸光值； (3)以各标准样品中他克莫司的吸光值和他克莫司含量为坐标获取他克莫司ELISA检测标准曲线。7.根据权利要求I所述的，其特征在于所述步骤包括 用PBS将上述抗他克莫司抗体稀释成I : 1000-1 10000的终浓度溶液，100 μ L/孔包被在96孔酶联板上，4°C放置12-24h ；用PBS将上述包被有所述抗他克莫司抗体的96孔酶联板洗涤3次后，加入200 μ L/孔的O. 5%的BSA溶液，4°C封闭放置8-16h。然后用PBS洗涤3次，加入20 μ L/孔的标准品。再加入100 μ L/孔工作浓度的他克莫司衍生物酶标偶联物；室温下孵育30min后PBS洗板5次；然后每孔加入IOOuL TMB底物，室温孵育30min再每孔加入IOOyL 2M硫酸。8.根据权利要求I所述的，其特征在于所述他克莫司衍生物酶标偶联物中酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。9.据权利要求8所述的，其特征在于所述他克莫司衍生物酶标偶联物的制备方法包括 (1)制备酶溶液将酶在室温条件下溶解于磷酸缓冲液中，终浓度为2-10mg/mL； (2)使具有式(III)中结构的他克莫司衍生物活化及偶联物的合成 用有机溶剂溶解具有式(III)中结构的他克莫司衍生物，使其终浓度为l_50mg/mL，通过I-乙基-3-(-3- 二甲氨丙基)碳二亚胺的方法或EDAC和N-羟基琥珀酰亚胺联合使用的方法进行活化，并与所述酶溶液进行交联反应，经纯化和透析后得到他克莫司衍生物酶标偶联物， 所述具有式(III)结构的他克莫司衍生物的结构式为10.根据权利要求8所述的，其特征在于所述待测样本为生理样本；优选地，所述生理样本为血液样本。全文摘要本专利技术公开了一种，包括以下步骤将抗他克莫司特异性抗体包被在固相支持物上，加入待测样本和他克莫司酶标偶联物；使所述待测样本中他克莫司与所述他克莫司酶标偶联物竞争性地结合抗所述他克莫司特异性抗体；经固相ELISA洗涤步骤后，加入对应酶的底物显色，测量相应的吸光值，对照他克莫司ELISA检测标准曲线，获取待测样本中他克莫司的含量。本专利技术的检测方法，特异性强，可以准确的确定待测样本中是否存在他克莫司，同样可以准确地确定他克莫司的含量。文档编号G01N33/535GK102621299SQ201210098330公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月6日 优先权日2012年4月6日专利技术者田军, 蔡江丽, 虞留明, 袁红霞 申请人:苏州博源医疗科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：虞留明，田军，袁红霞，蔡江丽，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：