一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒及其制备与使用方法技术

本发明专利技术采用基因工程技术制备的重组同型半胱氨酸甲基转移酶、重组谷氨酸脱氢酶、重组S

【技术实现步骤摘要】
一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒及其制备与使用方法


[0001]本专利技术涉及生物医学检验
，具体来说涉及一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒及其制备与使用方法。

技术介绍

[0002]同型半胱氨酸（Homocysteine，HCY），又称高半胱氨酸，是由细胞内的甲硫氨酸去甲基后形成的一种硫醇氨基酸，由S
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腺苷同型半胱氨酸水解而来，同时也是胱硫醚β合成酶合成胱硫醚的底物。血液中的总同型半胱氨酸包括同型半胱氨酸、同型半胱氨酸二硫化合物和胱氨酸
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同型半胱氨酸三种形式，它们大部分以蛋白结合方式存在，小部分处于游离状态。血浆同型半胱氨酸是蛋氨酸循环的中间产物，受到遗传因素、营养状况、肝肾功能及一些疾病时的代谢状况的影响，维生素B6、叶酸等物质可在一定程度上降低其水平。已开展的众多研究表明，的一种独立危险因素，同型半胱氨酸与心、脑血管疾病以及外周血管疾病密切相关，它是评估心血管疾病发生过程中的一个重要的风险因子，血液中升高的同型半胱氨酸会刺激血管壁引起动脉血管损伤，导致炎症和管壁的斑块形成，最终引起心脏血流受阻。在慢性肾功能不全、牛皮癣、维生素B12 缺乏等疾病的患者中也存在同型半胱氨酸代谢紊乱。同型半胱氨酸检测在临床上已有多年应用史，其安全性及可靠性已得到验证。另有研究表明，同型半胱氨酸可作为神经管畸形、先兆子痫、帕金森氏病、老年痴呆、胎儿生长迟缓、动脉粥样硬化、慢性肾功能不全、牛皮癣、维生素B
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缺乏、叶酸缺乏等多种疾病的临床辅助诊断依据，其临床意义极为重要。
[0003]目前，临床上测定生物样本中同型半胱氨酸的方法较多，主要为同位素法、色谱法、免疫学法等。但现有方法都较为费时费力，且检测成本较高，不适合大批量临床样本的测定。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的同型半胱氨酸检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发一种质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的同型半胱氨酸检测试剂盒已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒及其制备与使用方法。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：本专利技术第一方面提供了一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，包括R1试剂与R2试剂两种彼此独立的试剂，其中，所述R1试剂组成成分为：0.01～1.00 mmol/L S
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腺苷甲硫氨酸盐、0.02～2.00 mmol/L β
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型、0.05～5.00 mmol/L三（2
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羧乙基）磷氯化氢、0.5～50.0 mmol/L α
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酮戊二酸、5.0～500.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.01～0.5%的防腐剂、溶剂为去离子水；所述R2试剂组成成分为：0.5～50.0 KU/L重组同型半胱氨酸甲基转移酶、1.0～
100.0 KU/L重组谷氨酸脱氢酶、0.3～30.0 KU/L重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶、0.5～50.0 KU/L重组腺苷脱氨酶、5.0～500.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.01～0.5%的防腐剂、溶剂为去离子水。
[0006]上述检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，包括R1试剂与R2试剂两种彼此独立的试剂，其中，所述R1试剂组成成分为：0.1 mmol/L S
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腺苷甲硫氨酸盐、0.2 mmol/Lβ
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型、0.5 mmol/L三（2
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羧乙基）磷氯化氢、5.0 mmol/Lα
‑ꢀ
酮戊二酸、50.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.05%的防腐剂、溶剂为去离子水；所述R2试剂组成成分为：5.0 KU/L重组同型半胱氨酸甲基转移酶、10.0 KU/L重组谷氨酸脱氢酶、3.0 KU/L重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶、5.0 KU/L重组腺苷脱氨酶、50.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.05%的防腐剂、溶剂为去离子水。
[0007]上述检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，所述防腐剂为Proclin
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300、NaN3、G418、叠氮钠、硫柳汞中的一种。
[0008]上述检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，所述防腐剂为Proclin
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300。
[0009]上述检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，所述重组同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，重组谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，重组腺苷脱氨酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。
[0010]重组同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列（SEQ ID NO：1）具体如下：MKLLDLLSKGIVIGDGAVGTLLHSHGLQSSFEELNVSDPDLIISIHVQYVAAGADVIQTNTYGANEAKLRMYGLENQVTEINRAAVKLAKASVTDKNAILGTIGGMKHIGAVTTTDMEREFMLLEQAGALLEEQKDGLLLETFYDEFELLHAVKVLRKQTNIPIVAQLALHEAGTTQNGNDVNEILKHLIDYGANVVGLNCQLGPLHMTEAFKMISIPQNGYLSPYPNAGLPNYVEGRYVYEGSPAYFEAMTPRFIEQGIRLLGGCCGTTAEHIQSMKHAVANVTPVIEKDTIQRPKVVHTHEKRSKAHVTLAEKAKKQTTVVVELDPPKTLDTQRFFEGARALKRAGADAITLADNSLASPRISNMAMGALLTKHDIPVLTHLTCRDHNVIGLQSHLLGLSALLMEEVLALTGDPARVGDFPGATSVYDLSSIELIKMIKEMNDGRSILGKSLGPATRFSVGGAFNPHVRHLKAAVKRMERKIDAGAEYFLTQPIYDIALIEEVYEATKHLEQPIFIGIMPLVSKRNADFLHFEVPGITLPEEIRERMDGHETKEAAIEEGIRISQELIDAAMKYFNGIYLITPFLKYEIGEHLVKYVREKQEVKEGIN。
[0011]重组谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列（SEQ ID NO：2）具体如下：MSAKQVSKDEEKEALNLFLSTQTIIKEALRKLGYPGDMYELMKEPQRMLTVRIPVKMDNGSVKVFTGYRSQHNDAVGPTKGGVRFHPPVNEEEVKALSIWMTLKCGIANLPYCGGKGGIICDPRT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，其特征在于：包括R1试剂与R2试剂两种彼此独立的试剂，其中，所述R1试剂组成成分为：0.01～1.00 mmol/L S
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腺苷甲硫氨酸盐、0.02～2.00 mmol/L β
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型、0.05～5.00 mmol/L三（2
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羧乙基）磷氯化氢、0.5～50.0 mmol/L α
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酮戊二酸、5.0～500.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.01～0.5%的防腐剂、溶剂为去离子水；所述R2试剂组成成分为：0.5～50.0 KU/L重组同型半胱氨酸甲基转移酶、1.0～100.0 KU/L重组谷氨酸脱氢酶、0.3～30.0 KU/L重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶、0.5～50.0 KU/L重组腺苷脱氨酶、5.0～500.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.01～0.5%的防腐剂、溶剂为去离子水。2.根据权利要求1所述的检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，其特征在于：包括R1试剂与R2试剂两种彼此独立的试剂，其中，所述R1试剂组成成分为：0.1 mmol/L S
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腺苷甲硫氨酸盐、0.2 mmol/L β
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型、0.5 mmol/L三（2
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羧乙基）磷氯化氢、5.0 mmol/L α
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酮戊二酸、50.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.05%的防腐剂、溶剂为去离子水；所述R2试剂组成成分为：5.0 KU/L重组同型半胱氨酸甲基转移酶、10.0 KU/L重组谷氨酸脱氢酶、3.0 KU/L重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶、5.0 KU/L重组腺苷脱氨酶、50.0 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、质量分数为0.05%的防腐剂、溶剂为去离子水。3.根据权利要求1或2任一项所述的检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为Proclin
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300、NaN3、G418、叠氮钠、硫柳汞中的一种。4.根据权利要求3所述的检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为Proclin
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300。5.根据权利要求1或2任一项所述的检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒，其特征在于：所述重组同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，重组谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，重组S
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腺苷同型半胱氨酸水解酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，重组腺苷脱氨酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。6.一种如权利要求1所述的检测生物样本中同型半胱氨酸含量的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）R1试剂的制备：称取S
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腺苷甲硫氨酸盐、β
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型、三（2
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羧乙基）磷氯化氢、α
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酮戊二酸、三羟甲基氨基甲烷、防腐剂，依次加入去离子水中，搅拌溶解，定容至终浓度分别为S
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腺苷甲硫氨酸盐0.01～1.00 mmol/L、β
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型0.02～2.00 mmol/L、三（2
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羧乙基）磷氯化氢0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞留明，成志鹏，韦志，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：