一种艾司西酞普兰衍生物、免疫原、抗艾司西酞普兰特异性抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种艾司西酞普兰衍生物、免疫原、抗艾司西酞普兰特异性抗体及其制备方法与应用。首先将新型艾司西酞普兰衍生物与经过基因工程改造得到的重组小鼠血清白蛋白偶联制得艾司西酞普兰人工抗原，再用艾司西酞普兰人工抗原免疫实验动物获得抗艾司西酞普兰特异性抗体，经ELISA检测表明该特异性抗体的特异性强、灵敏度高，干扰实验显示该特异性抗体与100种常见药物无任何交叉反应；将抗艾司西酞普兰特异性抗体应用于制备艾司西酞普兰检测试剂，包括艾司西酞普兰均相酶免疫检测试剂与艾司西酞普兰胶乳增强免疫比浊检测试剂，所述检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对艾司西酞普兰的高通量、快速化检测。快速化检测。快速化检测。

【技术实现步骤摘要】
一种艾司西酞普兰衍生物、免疫原、抗艾司西酞普兰特异性抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种艾司西酞普兰衍生物、免疫原、抗艾司西酞普兰特异性抗体及其制备方法与应用，属于生物医学检测


技术介绍

[0002]艾司西酞普兰是一种高选择性5
‑
羟色胺（5
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hydroxytryptamine, 5
‑
HT）再摄取抑制剂（selective serotonin reuptake inhibitors, SSRIs），作为一种新型抗抑郁药，其作用机制是通过选择性抑制5
‑
羟色胺转运蛋白，选择性抑制突触再摄取5
‑
羟色胺，增强中枢神经系统5
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羟色胺受体的活性，从而起到治疗抑郁症的作用。主要应用于：
①
治疗抑郁症。
②
治疗老年躯体形式障碍。
③
治疗强迫症。
④
治疗广泛性焦虑症等。
[0003]艾司西酞普兰（S
‑
西酞普兰）属于手性化合物，是非手性药物西酞普兰的S
‑
对映异构体，其分子式为C20H21FN2O，分子量为324.39。西酞普兰有两个光学异构体（R
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西酞普兰和S
‑
西酞普兰），研究表明，S
‑
西酞普兰的抗抑郁作用比R
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西酞普兰至少强100倍，对5
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HT转运体的抑制能力至少是西酞普兰的2倍。艾司西酞普兰作为西酞普兰及其他一线抗抑郁药如氟西汀、帕罗西汀、舍曲林等的升级换代产品，其起效更快、选择性更强、具有更高的临床有效性、更低的不良事件发生率，患者的耐受性也更好。
[0004]对于儿童和18岁以下的青少年患者以及 65岁以上的老人、肝功能不全以及首次使用艾司西酞普兰的患者，及时监测血清中艾司西酞普兰水平和及时调整治疗剂量是至关重要的。再者，由于艾司西酞普兰的药代动力学在个体中差异较大，因此临床上应监测患者体内的稳态血药浓度，从而判断患者的基因类型所对应的代谢类型，进而给出合适的用药剂量。此外，该药可能导致一些不良反应，如失眠、腹泻、嗜睡、口干、静坐不能、狂躁、椎体外系反应、不宁腿综合征、幻觉等，因此对给药患者血液中艾司西酞普兰的浓度进行监测可以制定和调整个体化给药方案，提高疗效，保障用药安全。
[0005]艾司西酞普兰的血药浓度检测方法有多种，包括衍生化气相色谱法、气相色谱
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质谱联用法、电位滴定法、高效液相色谱法（HPLC）、高效液相
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质谱联用法（HPLC
‑
MS）、高效液相色谱串联质谱电喷雾法（LC
‑
ESI
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MS/MS)等。艾司西酞普兰临床用药量小，人体血浆浓度低，峰时血药浓度每毫升只有几纳克，一般的色谱法无法检测。另外，由于血浆中内源性杂质的干扰，LC
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MS联用分析准确度也受到影响。采用衍生化气相色谱法和气相色谱
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质谱联用法，需将样品衍生化后进行，处理较为繁琐，且成本较高。目前，国内外常用高效液相色谱法检测艾司西酞普兰血药浓度，最低检测限为1.0μg/L左右，但高效液相色谱法样本前处理繁琐，测定时间较长，检测浓度有限，且重现性较差，难以实现自动化检测。
[0006]因此，目前市面上缺乏线性范围宽、灵敏度高、准确度高、精密度高，检测时间短，样品处理简单，仪器自动化程度高，可多样本连续检测的艾司西酞普兰检测产品。

技术实现思路

[0007]为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种艾司西酞普兰衍生物，该衍生物为新合成的化合物，自然界中不存在。
[0008]本专利技术的第一个目的采用以下技术方案实现：一种艾司西酞普兰衍生物，其结构式如式Ⅰ所示：式Ⅰ。
[0009]本专利技术的第二个目的在于提供一种如上所述的艾司西酞普兰衍生物的合成方法，该合成方法不同于常规合成方法，具有良好的合成效果，显著提高了艾司西酞普兰衍生物的合成效率。
[0010]本专利技术的第二个目的采用以下技术方案实现：一种如上述结构式Ⅰ所示的艾司西酞普兰衍生物的合成方法，反应过程如下式所示：；具体的，反应过程包括以下步骤：（A1）化合物2的合成：将化合物1 (5 g，15 mmol)与NaOH (1.2 g，30 mmol)共同溶解于50 ml由EtOH与H2O 按1:1 比例混合而成的溶剂中制成混合溶液，将此混合溶液在80℃下搅拌过夜。将反应后的混合溶液用乙酸乙酯稀释，用稀盐酸与浓盐水洗涤，然后再用硫酸钠进行干燥，蒸发
溶剂后得到化合物2。
[0011]（A2）化合物3的合成：将化合物2 (3.5 g，10 mmol)与4
‑
氨基丁酸甲酯(1.2 g，10 mmol)共同溶解于在DMF (25 ml)中制成混合溶液，然后在此混合溶液中加入DIEA (3 ml，18 mmol)与HATU (5.6 g，12 mmol)制成反应混合物溶液；将此反应混合物溶液在室温下搅拌过夜。反应结束后在此反应混合物溶液中加入纯化水（50 mL），然后进行过滤，将滤饼干燥处理得到化合物3。
[0012]（A3）艾司西酞普兰衍生物的合成：将化合物3 (4 g，9 mmol)溶解于MeOH (50 ml)中，然后加入LiOH (0.6 g，15 mmol)制成反应溶液，将此反应溶液在室温下搅拌过夜，反应结束后将溶剂减压蒸发，然后将残留物通过硅胶柱层析柱纯化，最终得到艾司西酞普兰衍生物。
[0013]本专利技术的第三个目的在于提供一种艾司西酞普兰免疫原。
[0014]本专利技术的第三个目的采用以下技术方案实现：一种艾司西酞普兰免疫原，所述艾司西酞普兰免疫原由上述结构式Ⅰ所示的艾司西酞普兰衍生物与载体蛋白连接而成，其结构式如式Ⅱ所示：式Ⅱ；其中，载体蛋白为重组小鼠血清白蛋白，进一步地，所述重组小鼠血清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
[0015]重组小鼠血清白蛋白的氨基酸序列（SEQ ID NO：1）具体如下：MKWVTFLLKLFVSGSAFSRGVFRREAHKSEIAHRYNDLGEQKFKGLVLIAFSQYLQKCSYDEHAKLVQEVTDFAKTCVADESKANCDKSLHTLFGDKLCAIPNLRKNYGELADCCTKQEPERNECFLQHKDKNPSLPPFERPEAEAMCTSFKENPTTFMGHYLHEVAKRHPYFYAPELLYYAEQYNEILTQCKAEADKESCLTPKLDGVKEKALVSKVRQRMKCSSMQKFGERAFKAWAVARLSQTFPNADFAEITKLATDLTKVNKEKCHGDLLECADDRAKLAKYMCENQATISSKLQ
TCCDKPLLKKAHCLSEVEHKTMPADLPAIAADFVEDQEVCKNYKEAKDVFLGT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种艾司西酞普兰衍生物，其特征在于，其结构式如式Ⅰ所示：式Ⅰ。2.一种如权利要求1所述的艾司西酞普兰衍生物的合成方法，其特征在于，所述合成方法如下式所示：。3.一种艾司西酞普兰免疫原，其特征在于，所述艾司西酞普兰免疫原由权利要求1所述的艾司西酞普兰衍生物与载体蛋白连接而成，其结构式如式Ⅱ所示：式Ⅱ；其中，载体蛋白为重组小鼠血清白蛋白。4.根据权利要求3所述的艾司西酞普兰免疫原，其特征在于，所述重组小鼠血清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。5.一种如权利要求3
‑
4任一项所述的艾司西酞普兰免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（B1）载体蛋白溶液的制备：将权利要求3
‑
4任一项中所述的重组小鼠血清白蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，得到载体蛋白溶液；（B2）艾司西酞普兰衍生物溶液的制备：将权利要求1所述的艾司西酞普兰衍生物与二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸钾缓冲液、1
‑
乙基
‑3‑
(
‑3‑
二甲氨丙基)碳二亚胺和N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺混合，搅拌溶解，得到艾司西酞普兰衍生物溶液；（B3）艾司西酞普兰免疫原的合成：将步骤（B2）得到的艾司西酞普兰衍生物溶液加入到
步骤（B1）得到的载体蛋白溶液中，搅拌反应，经透析纯化，得到艾司西酞普兰免疫原。6.一种抗艾司西酞普兰特异性抗体，其特征在于，所述抗艾司西酞普兰特异性抗体为使用权利要求3
‑
4任一项所述的艾司西酞普兰免疫原对实验动物进行注射后所得到的特异性抗体，所述的实验动物为兔子、山羊、绵羊、小鼠、大鼠、豚鼠或马中的一种。7.一种如权利要求6所述的抗艾司西酞普兰特异性抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：（C1）将权利要求3
‑
4任一项所述的艾司西酞普兰免疫原用磷酸盐缓冲液稀释，得到艾司西酞普兰人工抗原溶液，然后将艾司西酞普兰人工抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对权利要求6中所述的实验动物进行多点注射；（C2）3
‑
6周后，再用相同的艾司西酞普兰人工抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物进行多点注射，之后每隔3
‑
6周注射一次，共计注射3
‑
10次；（C3）对步骤（C2）中完成注射的实验动物取血，分离纯化，得到抗艾司西酞普兰特异性抗体。8.如权利要求6
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【专利技术属性】
技术研发人员：张小可，靳丽萍，吴郡，朱嵘，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：