一种奥氮平衍生物、免疫原、抗奥氮平特异性抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种奥氮平衍生物、免疫原、抗奥氮平特异性抗体及其制备方法与应用。首先将新型奥氮平衍生物与经过基因工程改造得到的重组绵羊血清白蛋白偶联制得奥氮平人工抗原，再用奥氮平人工抗原免疫实验动物获得抗奥氮平特异性抗体，经ELISA检测表明该特异性抗体的特异性强、灵敏度高，干扰实验显示该特异性抗体与100种常见药物无任何交叉反应；将抗奥氮平特异性抗体应用于制备奥氮平检测试剂，包括奥氮平均相酶免疫检测试剂与奥氮平胶乳增强免疫比浊检测试剂，所述检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对奥氮平的高通量、快速化检测。化检测。化检测。

【技术实现步骤摘要】
一种奥氮平衍生物、免疫原、抗奥氮平特异性抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种奥氮平衍生物、免疫原、抗奥氮平特异性抗体及其制备方法与应用，属于生物医学检测


技术介绍

[0002]奥氮平（Olanzapine）是一种新型非典型神经安定药，能与多巴胺受体、5
‑
羟色胺（5
‑
HT）受体和胆碱能受体结合，并发挥拮抗作用。奥氮平在临床上主要用于治疗精神分裂症和其他有严重阳性症状/或阴性症状的精神病的急性期和维持治疗；在缓解精神分裂症及相关疾病常见的继发性情感症状中也能发挥一定的作用。奥氮平的化学名称为化学名为2
‑
甲基
‑4‑ꢀ
(4
‑
甲基
‑1‑
哌嗪基)
ꢀ‑
10H
‑
噻吩并[2, 3
‑
b][1,5]苯二氮杂卓，以硫、丙醛以及丙二腈为原料关环，再与邻硝基氟苯反应得到2
‑
（2
‑
硝基苯胺基）
‑3‑
氰基
‑5‑
甲基噻吩，经还原并与N
‑
甲基哌嗪作用一步得到奥氮平产品，具有步骤短，收率较高，易于实现工业化的特点。奥氮平的临床应用有：
①
治疗精神分裂症及其它精神病性障碍。奥氮平能显著降低阳性症状，还能减轻阴性症状。精神分裂症 85%的阴性症状改善是奥氮平的直接治疗效应；
②
治疗情感障碍。奥氮平能有效治疗双向情感障碍，包括一些对锂盐、抗惊厥剂及典型抗精神病药反应不佳的病人；
③
治疗老年痴呆伴发的精神障碍；
④
治疗强迫症；
⑤
治疗躯体形式障碍；
⑥
治疗神经性厌食症。但其受到各种因素的影响，如年龄、给药方式、吸烟、喝咖啡等，与其他药物联合使用，容易产生具有临床意义的药物相互作用，导致药理作用和毒副反应的改变。及时监测血清中氯氮平水平和及时调整治疗剂量是至关重要的。此外，患者用药依从性难以判断、治疗剂量下无效以及可能存在药代动力学药物间相互作用等情况下，测定氯氮平血药浓度是非常有用的。因此，对给药患者血液中氯氮平的浓度进行监测可以制定和调整个体化给药方案，提高疗效，保障用药安全。
[0003]奥氮平的血药浓度检测方法有多种，包括液相色谱结合串联质谱法(LC
‑
MS/MS)、高效液相色谱法（HPLC）、反向高效液相色谱法（RP
‑
HPLC）、高效液相色谱
‑
紫外检测法（HPLC
‑
UV）、高效液相色谱
‑
电化学法（HPLC
‑
ECD）、气相色谱
‑
质谱法（GC
‑
MS）、全自动二维液相色谱法（2D
‑
LC/UV）等。高效液相色谱法具有准确、灵敏、廉价的特点；但测定时间较长，且检测浓度有限；该法流动相使用缓冲液，使其操作比较繁琐；难以实现自动化监测，制约了其在临床检测上的大规模使用。液相色谱
‑
串联质谱法可大大简化样品纯化过程，且结果不受奥氮平代谢产物的干扰，且线性范围广、定量下限低，但对试验的要求和成本较高，其前处理较为复杂，条件不易控制。
[0004]因此，目前市面上缺乏线性范围宽、灵敏度高、准确度高、精密度高，检测时间短，样品处理简单，仪器自动化程度高，可多样本连续检测的奥氮平检测产品。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种奥氮平衍生物，该
衍生物为新合成的化合物，自然界中不存在。
[0006]本专利技术的第一个目的采用以下技术方案实现：一种奥氮平衍生物，其结构式如式Ⅰ所示：式Ⅰ。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供一种如上所述的奥氮平衍生物的合成方法，该合成方法不同于常规合成方法，具有良好的合成效果，显著提高了奥氮平衍生物的合成效率。
[0008]本专利技术的第二个目的采用以下技术方案实现：一种如上述结构式Ⅰ所示的奥氮平衍生物的合成方法，反应过程如下式所示：；具体的，反应过程包括以下步骤：（A1）化合物2的合成：将化合物1 (6 g，26 mmol)、哌嗪(18 g，0.19 mol) 在室温下加入丁醇(100 mL)中制成反应混合物，将此反应混合物在125℃加热条件下搅拌18小时。反应结束后将上述反应混合物在真空中浓缩。将浓缩所得残留物通过快速色谱分析仪(甲醇:二氯甲烷0
‑
10%)进行纯化，得到化合物2。
[0009]（A2）化合物3的合成：
将化合物2 (6 g，20 mmol)、5
‑
溴戊酸叔丁基酯(5.7 g，24 mmol)、K2CO3(4.2 g，28 mmol)、KI(0.3 g，2 mmol)在室温下加入乙腈(100 mL)中制成反应混合物。将此反应混合物在室温下搅拌18小时。反应结束后将上述反应混合物在真空中浓缩。将浓缩所得残留物通过快速色谱分析仪(甲醇:二氯甲烷0
‑ꢀ
5%)进行纯化，得到化合物3。
[0010]（A3）奥氮平衍生物的合成：将化合物3 (5 g，11 mmol)、三氟乙酸(5 mL)共同溶解于DCM(45 mL)中制成反应混合物，将此反应混合物在室温下搅拌2小时。反应结束后将上述反应混合物在真空中浓缩。将浓缩所得残留物通过快速色谱分析仪(甲醇:二氯甲烷0
‑ꢀ
5%)进行纯化，得到奥氮平衍生物。
[0011]本专利技术的第三个目的在于提供一种奥氮平免疫原。
[0012]本专利技术的第三个目的采用以下技术方案实现：一种奥氮平免疫原，所述奥氮平免疫原由上述结构式Ⅰ所示的奥氮平衍生物与载体蛋白连接而成，其结构式如式Ⅱ所示：式Ⅱ；其中，载体蛋白为重组绵羊血清白蛋白，进一步地，所述重组绵羊血清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
[0013]重组绵羊血清白蛋白的氨基酸序列（SEQ ID NO：1）具体如下：MKWVTFISLLLKFSSAYSRGVFRRDTHKSEIAHRFNDLGEENFQGLVLIAFSQYLKQCPFDEHVKLVKELTEFAKTCVADESHAGKDKSLHTLFGDELCKVATLRETYGDMADKCEKQEPERNECFLNHKDKSPDLPKLKPEPDTLCAEFKADEKKFWGKYLYEVARKHPYFYAPELLYYANKYNGVFQECKQAEDKGACLLPKIDAMREKVLASSARQRLKCASIQKFGERALKAWSVARLSQKFPKADFTDVTKIVTDLTKVHKECCHGDKLECADDRADLAKYICDHQDALKSKLKECKDKPVLEKSHCIAEVDKDAVPENLPPLTADFAEDKEVCKNYQEAKDVFLGSFLYEYSKRHPEYAVSVKLRLAKEYEATLE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种奥氮平衍生物，其特征在于，其结构式如式Ⅰ所示：式Ⅰ。2.一种如权利要求1所述的奥氮平衍生物的合成方法，其特征在于，所述合成方法如下式所示：。3.一种奥氮平免疫原，其特征在于，所述奥氮平免疫原由权利要求1所述的奥氮平衍生物与载体蛋白连接而成，其结构式如式Ⅱ所示：式Ⅱ；其中，载体蛋白为重组绵羊血清白蛋白。4. 根据权利要求3所述的奥氮平免疫原，其特征在于，所述重组绵羊血清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。5.一种如权利要求3
‑
4任一项所述的奥氮平免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（B1）载体蛋白溶液的制备：将权利要求3
‑
4任一项中所述的重组绵羊血清白蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，得到载体蛋白溶液；（B2）奥氮平衍生物溶液的制备：将权利要求1所述的奥氮平衍生物与二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸钾缓冲液、1
‑
乙基
‑3‑
(
‑3‑
二甲氨丙基)碳二亚胺和N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺混合，搅拌溶解，得到奥氮平衍生物溶液；（B3）奥氮平免疫原的合成：将步骤（B2）得到的奥氮平衍生物溶液加入到步骤（B1）得到
的载体蛋白溶液中，搅拌反应，经透析纯化，得到奥氮平免疫原。6.一种抗奥氮平特异性抗体，其特征在于，所述抗奥氮平特异性抗体为使用权利要求3
‑
4任一项所述的奥氮平免疫原对实验动物进行注射后所得到的特异性抗体，所述的实验动物为兔子、山羊、绵羊、小鼠、大鼠、豚鼠或马中的一种。7.一种如权利要求6所述的抗奥氮平特异性抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：（C1）将权利要求3
‑
4任一项所述的奥氮平免疫原用磷酸盐缓冲液稀释，得到奥氮平人工抗原溶液，然后将奥氮平人工抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对权利要求6中所述的实验动物进行多点注射；（C2）3
‑
6周后，再用相同的奥氮平人工抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物进行多点注射，之后每隔3
‑
6周注射一次，共计注射3
‑
10次；（C3）对步骤（C2）中完成注射的实验动物取血，分离纯化，得到抗奥氮平特异性抗体。8.如权利要求6
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小可，王永霞，封飒飒，胡振阳，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：