【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测试剂，具体涉及一种皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂及其制备方法。
技术介绍
1、皮质醇（cortisol，cor），其结构式如式ⅵ所示：
2、
3、式ⅵ。
4、皮质醇也称为“氢化可的松”，是人体主要的糖皮质类固醇，基本结构为甾核，是肾上腺皮质分泌的代表性糖皮质激素，由胆固醇转化而成。肾上腺和垂体病变均可导致皮质醇水平异常。皮质醇作为一种糖皮质激素在糖类、脂肪和蛋白质代谢中具有重要的调节作用。血液中的胆固醇酯在肾上腺皮质细胞内被胆固醇酯酶催化后生成游离的胆固醇，并随即被转运蛋白转运至线粒体内，在一系列酶的催化下生成皮质激素。皮质激素进入血液后，90%为结合型，游离型很少，但只有游离型皮质激素才具有生理活性。结合型与游离型激素之间可以转化，保持动态平衡。皮质醇在血中与皮质类固醇结合球蛋白结合对于运输和贮存具有重要意义，同时可以减少皮质醇从肾脏丢失。正常成人清晨血清皮质醇浓度为100-520nmol/l，血浆中皮质醇的半衰期为70分钟，主要在肝脏中降解。在肝脏中先被加氢还原形成双氢皮质醇，随后产生无生物活性的四氧皮质醇，再与葡萄糖酵酸或硫酸结合，随尿排出体外。成人血液中皮质醇为皮质酮的10-20倍，故发挥糖皮质激素的作用主要为皮质醇。尿液中皮质醇是血液中游离皮质醇经肾小球滤过而来，其含量与血液中具有生理活性的游离皮质醇浓度变化成正相关。血液中皮质醇水平全天变化很大，而24小时尿皮质醇测定不受昼夜节律变化的影响，当血液中皮质醇增高时，随尿液排出的皮质醇也迅速增加，测定尿液中总皮质醇
5、目前检测皮质醇的方法有放射免疫法、高效液相色谱法、电化学发光免疫法等。放射免疫法现在已经发展成为一种十分成熟的微量分析方法，但是其结果受到许多客观因素如时间、温度、ph值和离子强度等和试剂自身变异如免疫活性、特异性、浓度和比放射性等的影响。电化学发光法利用标记的皮质醇特异抗体、生物素、链霉亲和素之间的反应，采用竞争法的原理，检测快速，但样本处理中涉及了尿液皮质醇测定的抽提问题，抽提过程可能会导致检测结果不准确。高效液相色谱法灵敏度高、检测范围广，但由于样品处理较复杂，检测成本高等限制难以在临床上推广。
6、因此，针对现有技术中存在的缺陷，研发一种性能指标达到临床检测要求，灵敏度高、特异性强、稳定性好、结果准确，可应用于全自动生化分析仪的高通量、快速化检测的皮质醇检测试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术所采用的技术方案是：
2、本专利技术一方面提供了一种皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，包括：r1试剂与r2试剂；
3、所述r1试剂由皮质醇-共轭蛋白偶联物和r1缓冲液组成，所述r2试剂由抗皮质醇特异性抗体包被的胶乳微球和r2缓冲液组成；
4、所述的皮质醇-共轭蛋白偶联物由皮质醇衍生物与共轭蛋白偶联而成，其结构式如式ⅰ所示：
5、
6、式ⅰ；
7、所述皮质醇衍生物，结构式如式ⅱ所示：
8、
9、式ⅱ；
10、所述共轭蛋白为血清白蛋白；所述r1缓冲液为含有聚乙二醇20000与普瑞克宁300的tirs缓冲液；
11、所述的抗皮质醇特异性抗体为皮质醇免疫原免疫实验动物后得到的抗体；所述的皮质醇免疫原由式ⅱ所示的皮质醇衍生物与载体蛋白偶联而成，其结构式如式ⅲ所示：
12、
13、式ⅲ；
14、所述的载体蛋白是具有免疫原性的蛋白质或多肽；所述的实验动物为哺乳动物；
15、所述抗皮质醇特异性抗体包被的胶乳微球由抗皮质醇特异性抗体通过连接分子与胶乳微球偶联而成；
16、所述连接分子为马来酰亚胺-聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式ⅳ所示：
17、
18、式ⅳ；
19、式ⅳ中n为1-12之间的任意整数；
20、所述胶乳微球为表面带有氨基、羧基、羟基、巯基、酰肼基或氯甲基中任意一种基团修饰的聚苯乙烯胶乳微球，直径范围为50-450nm；
21、所述r2缓冲液为含有普瑞克宁300的磷酸钠缓冲液。
22、优选地，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。更优选地，所述血清白蛋白为马血清白蛋白。
23、优选地，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。更优选地，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为鸡卵清白蛋白；所述哺乳动物为家兔。
24、优选地，所述连接分子为马来酰亚胺-四聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式ⅴ所示：
25、
26、式ⅴ；
27、优选地，所述胶乳微球为表面带有氨基修饰的聚苯乙烯胶乳微球，直径为200nm。
28、本专利技术另一方面提供了一种上述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，所述的制备方法包含以下步骤：
29、（a1）r1试剂的制备：将皮质醇-共轭蛋白偶联物溶解于纯化水中，然后添加聚乙二醇20000、普瑞克宁300、三羟甲基氨基甲烷，搅拌均匀，将ph值调节至7.0-9.0，制得r1试剂；
30、（a2）r2试剂的制备：将抗皮质醇特异性抗体包被的胶乳微球加入纯化水中，然后添加磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、普瑞克宁300，搅拌均匀，将ph值调节至7.0-9.0，制得r2试剂。
31、具体地，上述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法包含以下步骤：
32、（a1）r1试剂的制备：将皮质醇-共轭蛋白偶联物按照终浓度质量分数为0.01%的比例溶解于纯化水中，然后添加终浓度质量分数为0.1%的聚乙二醇20000、0.05%的普瑞克宁300，终浓度摩尔浓度为100.0mmol/l的三羟甲基氨基甲烷，搅拌均匀，将ph值调节至8.0，制得r1试剂；
33、（a2）r2试剂的制备：将抗皮质醇特异性抗体包被的胶乳微球按照终浓度质量分数为3.3%的比例加入纯化水中，然后添加终浓度摩尔浓度为8.0 mmol/l的磷酸氢二钠、5.0mmol/l的磷酸二氢钾，终浓度质量分数为0.05%的普瑞克宁300，搅拌均匀，将ph值调节至8.0，制得r2试剂。
34、优选地，所述皮质醇-共轭蛋白偶联物的制备方法，包含以下步骤：
35、（b1）称取磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化镁共同溶解于去离子水中，调节ph至7.0-9.0，制成缓冲溶液a；
36、（b2）称取血清白蛋白，溶解于上述缓冲溶液a中，制成血清白蛋白溶液a；...
【技术保护点】
1.一种皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，包括：R1试剂与R2试剂；
2.根据权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。
3.根据权利要求2所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为马血清白蛋白。
4.根据权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。
5.根据权利要求4所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为鸡卵清白蛋白；所述哺乳动物为家兔。
6.根据权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述连接分子为马来酰亚胺-四聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式Ⅴ所示：
7.一种如权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂
8.根据权利要求7所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述皮质醇-共轭蛋白偶联物的制备方法，包含以下步骤：
9.根据权利要求7所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述抗皮质醇特异性抗体包被的胶乳微球的制备方法，包含以下步骤：
10.根据权利要求9所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述抗皮质醇特异性抗体的制备方法，包含以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，包括：r1试剂与r2试剂；
2.根据权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。
3.根据权利要求2所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为马血清白蛋白。
4.根据权利要求1所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。
5.根据权利要求4所述的皮质醇胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为鸡卵清白蛋白；...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆丽华，成志鹏，张小可，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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