一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法，以高温处理的方式，消除叶提取液中甲酸脱氢酶的活性，根据甲酸的化学性质，采用电位滴定法，通过测定外加甲醛后植物新鲜提取液和失活提取液中甲醛含量的减少值，及外加甲醛前后植物新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。实验结果表明，植物质量和提取液比例为1:4时，当甲醛浓度为350 mg

【技术实现步骤摘要】
一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法


[0001]本专利技术涉及一种能够测定甲醛脱氢酶活性及其评价的方法，尤其涉及电位滴定法测定植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。

技术介绍

[0002]甲醛是一种室内空气首要的污染物之一，其严重危害人类的身体健康。去除室内甲醛常用的方法可分纤维过滤、膜分离、静电补集、活性炭吸附和臭氧灭菌等，由于甲醛释放过程缓慢、持续时间长等特点，使得一些商品化的技术，存在操作复杂，成本高，还可能会产生二次污染的风险问题。而植物净化技术相比于其它净化技术，具有操作简易、无污染、成本低、能耗低，还能起到美观与装饰室内的作用。
[0003]文献调研表明，植物净化甲醛时，甲醛在甲醛脱氢酶的作用下转化为甲酸，甲酸在甲酸脱氢酶的作用下转化为CO2和H2O，可知甲酸脱氢酶在甲醛代谢过程中起到重要作用。甲醛在植物体内的代谢过程中，增强甲酸脱氢酶活性，有利于降低植物体内的甲酸含量，增大甲醛在空气、植物两相间的化学势差，进而增大植物对空气中甲醛的净化效率。因此，甲酸脱氢酶活性大小是评估和预测植物甲醛耐受性及筛选甲醛高效净化植物的重要指标之一。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、成本低廉、高效评价植物叶中甲酸脱氢酶活性大小的方法。
[0005]本专利技术采用的技术方案如下：植物叶中的甲酸脱氢酶热稳定性较差，高温时易失去活性。因此，以高温处理的方式，消除叶提取液中甲酸脱氢酶的活性，制得植物叶失活提取液。采用电位滴定法，通过测定外加甲醛前后植物叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。
[0006]一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法，步骤如下：(1)植物样品均在校内草坪、花园、荒地及校外公园空气清新、土壤无污染历史处采集，由识花君软件鉴别植物名称；(2)将步骤(1)中的新鲜植物经冰盒保鲜短途运送回来后，经过仔细地与土壤分离，快速用去离子水彻底冲洗、拭干、准确称量样品；(3)将步骤(2)中植物质量与蒸馏水提取剂体积的比例(固-液比，g: mL；设为1:4、1:10、1:20)，在瓷研钵中充分快速研磨、提取出新鲜植物叶中的有效成份，转移至预冷的100 mL离心管中；(4)摇匀步骤(3)中所得的上清液，一部分迅速置于0-4℃条件下离心、待用，另一部分置于试管中放于100℃水中加热10 min，取出冷却、离心后待用。结果表明在100℃的水中加热10 min后植物叶提取液中酶完全失活；(5)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液20.00 mL于4个100 mL离心管
中、再分别加入8.00 mL水和甲醛溶液浓度(350 mg
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、500 mg
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、750 mg
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），放入磁子将混合液在磁力搅拌器上充分搅拌1 min，记录初始溶液的pH值；随后用准确标定后的0.0250 mol
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氢氧化钠溶液，边滴定边用酸度计测试记录混合液反应完全后的pH值，当混合液的pH值接近11左右停止滴定。实验均设三个平行；(6)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液0.50 mL于12个具塞比色管中，分别加入0 mg
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的甲醛使用溶液200 μL（每个浓度设三个平行），再分别加入0.50 mL乙酰丙酮，蒸馏水定容10.00 mL，摇匀，置于60℃水浴中加热15 min后，冷却、过滤、稀释后，在波长 414 nm处，以水为参比，测定滤出液的吸光度值，完成外加甲醛净化实验；(7)根据标准曲线和步骤(6)中吸光度的变化值，计算出净化反应完成后新鲜提取液(m1)和失活提取液(m2)中甲醛浓度减少值，即按理论实际提取液中甲醛减少量=提取液中甲酸生成量；对比植物空白实验结果，根据步骤(5)滴定曲线中突跃范围对应的氢氧化钠浓度和体积计算出新鲜提取液外加甲醛后混合液中甲酸含量的实际值(m3)和失活提取液外加甲醛后混合液中甲酸含量的实际值(m4)，即为植物提取液中甲酸实际值；甲酸脱氢酶活性评价：Δm
5= m1- m3表示新鲜提取液中由甲酸脱氢酶作用导致的那部分甲酸降解量，Δm
6= m2- m4表示理论上失活提取液和测定上甲酸变化值，用植物新鲜提取液和失活提取液中甲酸含量的差异Δm
7=
Δm
5-Δm6来衡量新鲜提取中甲酸脱氢酶活性大小；甲酸含量计算公式如下:式中： V—植物混合液消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积的数值，mL；C—氢氧化钠浓度，mol
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；M—甲酸的摩尔质量，g
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(M=46.03)植物质量和提取液比例为1:4时，当甲醛浓度为350 mg
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时甲酸脱氢酶活性大小依次为：绿萝>牡丹吊兰>芦荟；当甲醛浓度为500~750 mg
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时甲酸脱氢酶活性大小依次为：牡丹吊兰>绿萝，芦荟叶提取液未检测到甲酸脱氢酶活性。
[0007]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：1、本专利技术所使用的植物材料价廉易得，所采用的方法能够有效的评价植物叶中甲酸脱氢酶活性大小，有效地解决了操作步骤繁杂、耗时，酶提纯难度大等缺点；2、本专利技术采用乙酰丙酮显色法测定植物叶提取液中外加甲醛，有效解决了技术的操作复杂，所需仪器昂贵等缺点；3、本专利技术采用电位滴定法，通过测定外加甲醛前后植物叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小；4、本专利技术方法与传统测定酶的方法相比较具有简易、快速且高效的优点。
[0008]实施例1基于对牡丹吊兰叶中甲醛脱氢酶活性大小的评价(1)准备移取新鲜或失活牡丹吊兰叶提取液20.00 mL于4个100 mL离心管中、再分别加入8.00 mL水和甲醛溶液浓度(350 mg
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、500 mg
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），放入磁子将混合液在磁力搅拌器上充分搅拌1 min，记录初始溶液的pH值。随后用准确标定后的0.0250 mol
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氢氧化钠溶液，边滴定边用酸度计测试记录混合液反应完全后的pH值，当混合液的pH值
接近11左右停止滴定；实验均设三个平行；(2)移取新鲜或失活牡丹吊兰叶提取液0.50 mL于12个具塞比色管中，分别加入0 mg
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的甲醛使用溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法：以高温处理的方式制得酶失活植物提取液，根据甲酸的化学性质，采用电位滴定法，通过测定外加甲醛后植物叶新鲜提取液和失活提取液中甲醛含量的减少值，及外加甲醛前后植物叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。2.如权利要求1所述的一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法，其具体测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法为权利要求3所述。3.一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法，步骤如下：(1)植物样品均在校内草坪、花园、荒地及校外公园空气清新、土壤无污染历史处采集，由识花君软件鉴别植物名称；(2)将步骤(1)中的新鲜植物经冰盒保鲜短途运送回来后，经过仔细地与土壤分离，快速用去离子水彻底冲洗、拭干、准确称量样品；(3)将步骤(2)中植物质量与蒸馏水提取剂体积的比例(固-液比，g: mL；设为1:4、1:10、1:20)，在瓷研钵中充分快速研磨、提取出新鲜植物叶中的有效成份，转移至预冷的100 mL离心管中；(4)摇匀步骤(3)中所得的上清液，一部分迅速置于0-4℃条件下离心、待用，另一部分置于试管中放于100℃水中加热10 min，取出冷却、离心后待用；结果表明在100℃的水中加热10 min后植物叶提取液中酶完全失活；(5)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液20.00 mL于4个100 mL离心管中，再分别加入8.00 mL水和甲醛溶液浓度(350 mg
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），放入磁子将混合液在磁力搅拌器上充分搅拌1 min，记录初始溶液的pH值；随后用准确标定后的0.0250 mol
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氢氧化钠溶液，边滴定边用酸度计测试记录混合液反应完全后的pH值，当混合液的pH值接近11左右停止滴定；实验均设三个平行；(6)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液0.50 mL于12个具塞比色管中，分别加入0 mg
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【专利技术属性】
技术研发人员：苏玉红，何晓红，杨玉霞，李晓娟，
申请(专利权)人：新疆大学，
类型：发明
国别省市：