本发明专利技术提供了一种酶制剂及其用于提取葛根总黄酮的应用和方法，属于酶制剂的应用领域。本发明专利技术的技术方案是：提供一种酶制剂，包括以下重量份的组分：纤维素酶1-5份、木聚糖酶1-5份、蛋白酶1-5份、淀粉酶1-5份，本发明专利技术还给出了将此酶制剂用于提取葛根总黄酮的应用，并给出了具体的操作步骤，最终实现了葛根总黄酮提取率70mg/g以上。本发明专利技术的有益效果是：反应条件温和，能保持天然产物的构象，不破坏其立体结构和生物活性，有利于保持有效成分原有的药效；能够去除体系内杂质，提高提取液的澄清度，提高了中药有效成分的提取率；对反应条件进行了优化组合，实现了提取得率的最大化。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
葛根(Puerana labata)是豆科葛属多年生藤本植物，是一种传统的中药材，其总黄酮是葛根中主要有效成分，具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用，同时也有降低血压的作用。作为医药和保健食品的原料或添加剂，目前，葛根总黄酮国际市场需求量约500 800吨/年，我国需求量约150吨/年，葛根总黄酮的开发越来越引起研究者及开发商的关注。传统的提取分离方法，如煎煮法、浸渍法、渗滤法、回流法等，存在有效成分提取率不高、杂质清除率低等问题。酶工程技术是近几年来用于重要工业的一项生物工程技术。通过酶反应温和地将植物组织分解，加速有效成分的释放提取，选用相应的酶可将影响液体制剂澄清度的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除，并且针对根中含有脂溶性成分多，通过葡萄糖苷酶或转糖苷酶，使脂溶性成分转化成水溶性糖苷类，酶反应提取温度低，可破坏植物细胞壁，促进有效成分提取；改变提取的目的成分的性质，加强药物活性；去除体系内杂质，提高提取体系澄清度、改变药材质地。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种酶制剂，并将其应用在提取葛根总黄酮，进一步给出了具体的操作方法，该方法能在温和的条件下对植物有效成分进行高选择性转化，不仅可以克服工业中常用的醇水提取方法中有效成分提取率低、工序复杂等问题，提高提取体系澄清度、改变药材质地，还可以在提取中改变原有天然成分的结构，增加提取物的生理活性，具有潜在的工业应用价值。为实现该目的，本专利技术采用以下技术方案一种酶制剂，其特征在于包括以下重量份的组分纤维素酶 1-5份木聚糖酶 1-5份蛋白酶1-5份淀粉酶1-5份所述蛋白酶选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一种。所述淀粉酶选用中温α -淀粉酶和β -淀粉酶中的至少一种。上述酶制剂用于提取葛根总黄酮的应用。上述酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将葛根烘干粉碎，过筛，取葛根粉加入蒸馏水溶解；(2)调节pH至4. 0-6.0，加入一定量的酶制剂，在40_60°C的温度下酶解1-6小时；(3)高温灭酶；(4)离心，沉淀用70%乙醇加热回流提取l_3h，过滤，提取2-4次。(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。上面提到的提取葛根总黄酮的方法中，所述植物粉碎至40-100目，植物材料与加入的蒸馏水的质量比为1 10-30。所述的酶制剂与蒸馏水的质量比为1 5-15。步骤O)中所述的酶制剂添加量为葛根粉添加量的0. 1_1%。步骤(3)中所述的灭酶温度为80_100°C，时间5-lOmin。步骤⑷中所述的70%乙醇与沉淀的质量比为1 8-15，回流提取温度为 60-80 "C。本专利技术选用此种酶制剂的原理是纤维素酶，可以降解植物纤维素；木聚糖酶可以水解植物中的木聚糖；蛋白酶，可以水解提取物中的蛋白质，提高提取物的纯度；淀粉酶，可以水解淀粉。这几种酶相互作用，能够破坏葛根细胞壁的纤维结构，甚至将其分解成小分子物质，减少提取传质阻力，有效释放葛根黄酮等活性成分；与现有技术相比，本专利技术具有以下优点(1)本专利技术采用酶法提取葛根总黄酮，反应条件温和，能保持天然产物的构象，不破坏其立体结构和生物活性，有利于保持有效成分原有的药效。(2)本专利技术选用酶不仅能够去除体系内杂质，提高提取液的澄清度，同时又提高了中药有效成分的提取率。(3)本专利技术对酶制剂的配比、提取时间、提取温度、加酶量、PH值进行了优化组合， 实现了葛根总黄酮提取得率的最大化。(4)本专利技术酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法中，采用酶提和醇提结合的条件下， 提高了活性成分的得率。(5)采用本专利技术从中药葛根中提取总黄酮，葛根总黄酮提取率在7%以上，而一般的水提取法，提取率一般仅为1-2%，醇提取法，提取率一般仅为4-5%，因此酶提法提取得率高。(6)本专利技术工艺简单、操作方便、投资少、不会产生噪音和污染，适应工艺生产应用。具体实施例方式实施例1(1)取葛根烘干粉碎至80目，取该粉末10g，加入蒸馏水IOOmL溶解；(2)取酶制剂纤维素酶0.0037g，木聚糖酶0.0056g，木瓜蛋白酶0.0018g，中温 α-淀粉酶0. 0037g加入葛根溶液中，调节pH至4.0，在40°C条件下酶解1小时；C3)80°C灭酶 IOmin ；(4)离心，沉淀加入10倍体积的70%乙醇，80°C加热回流提取1小时，过滤，提取2次。(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。4采用分光光度法测定总黄酮含量，葛根总黄酮提取率为7. 34%。实施例2(1)取葛根烘干粉碎至80目，取该粉末10g，加入蒸馏水150mL溶解；(2)取酶制剂纤维素酶0.0062g，木聚糖酶0.0093g，碱性蛋白酶0.0031g，中温 α -淀粉酶0. 0062g，加入葛根溶液中，调节pH至4. 5，在45°C条件下酶解2小时；C3)85°C灭酶 IOmin ；(4)离心，沉淀加入12倍体积的70%乙醇，70°C回流提取3小时，趁热过滤，提取 3次；(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。采用分光光度法测定总黄酮含量，葛根总黄酮提取率为7. 49%。实施例3 (1)取葛根烘干粉碎至100目，取该粉末15g，加入蒸馏水400ml溶解；(2)取酶制剂纤维素酶0.0125g，木聚糖酶0.0375g，中性蛋白酶0.0325g，β-淀粉酶0. 065g加入葛根溶液中，调节pH至5. 0，在50°C条件下酶解3小时；C3)85°C灭酶 IOmin ；(4)离心，沉淀加入10倍体积的70%乙醇，75°C回流提取2小时，趁热过滤，提取 2次；(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。采用分光光度法测定总黄酮含量，葛根总黄酮提取率为7. 82%。实施例4(1)取葛根烘干粉碎至80目，取该粉末10g，加入蒸馏水300mL溶解；(2)取酶制剂纤维素酶0.02g，木聚糖酶O.Olg，中性蛋白酶0.02，中温α -淀粉酶0.03g加入葛根溶液中，调节pH至5.0，在40°C条件下酶解1. 5小时；C3)85°C灭酶 IOmin ；(4)离心，沉淀加入8倍体积的70%乙醇，750C回流提取3小时，趁热过滤，提取2 次；(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。采用分光光度法测定总黄酮含量，葛根总黄酮提取率为7. 82%。实施例5 (1)取葛根烘干粉碎至80目，取该粉末10g，加入蒸馏水IOOmL溶解；(2)取酶制剂(纤维素酶木聚糖酶木瓜蛋白酶中温α-淀粉酶= 2:2:3: 1)0. 05g，调节pH至6. 0，在60°C条件下酶解1小时；C3)85°C灭酶 IOmin ；(4)离心，沉淀加入10倍体积的70%乙醇，85°C回流提取3小时，趁热过滤，提取 3次；(5)合并上清液和滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液为葛根总黄酮浸膏。采用分光光度法测定总黄酮含量，葛根总黄酮提取率为8. 59%。实施例6 (1)取葛根烘干粉碎至100目，取该粉末10g，加入蒸馏水200mL溶解；(2)取酶制剂(纤维素酶木聚糖酶碱性蛋白酶中温α-淀粉酶= 2:3:1: 2)0. 08g，调节ρΗ至4. 5，在本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏尧，刘靓，刘宇，宋海琼，刘海庆，李文欢，
申请(专利权)人：天津滨海诺奥酶工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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