ＳＡＲＳ冠状病毒的细胞毒性Ｔ细胞表位肽及其用途制造技术

本发明专利技术的目的在于提供ＳＡＲＳ冠状病毒的新的ＣＴＬ表位肽。本发明专利技术提供包含选自由序列号１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８、２３和２４组成的组中的氨基酸序列的肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及SARS冠状病毒的细胞毒性T细胞表位肽及其用途。
技术介绍
重症急性呼吸系统综合征(SevereAcute Respiratory Syndrome, SARS)是一种由新型SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的致死率高的新发感染性疾病。自2003年在中国爆发以来，已有8000人以上感染，约800人死亡。然而，尚未有有效的预防、治疗方法。SARS 发生以后，已鉴定出作为SARS的致病病毒的SARS病毒(非专利文献1)，并确定了其碱基序列(非专利文献2)。SARS冠状病毒是属于单链(+) RNA病毒的冠状病毒科的新种类的冠状病毒。SARS 冠状病毒基因组非常大，有29. 7kb (非专利文献2、，根据推测编码23个蛋白质。作为主要的结构蛋白，有刺突(Spike、1256aa)、核壳体(Nucleocapsid、423aa)、膜(Membrane、222aa) 和较小的包膜(Envelope,77aa)0作为非结构蛋白，有2个多聚蛋白ppla(4382aa、序列号 31 ；GenBank收录号AAP13439)和pplM2696aa)，利用蛋白酶可以位点特异性地从这些多聚蛋白中切出各个蛋白质。现有技术文献非专利文献非专利文献1 =Ksiazek, T. G. et al.，N. Engl. J. Med. 348 1953-1966 (2003)非专利文献2 =Marra, Μ. A. et al.，Science 300 :1399-1404(2003)非专利文献3 :Yang, Ζ. Y. et al.，Nature 428 :561-564(2004)非专利文献4 :ffang. Y. D. et al.，J. Virol. 78 :5612-5618 (2004)非专利文献5 :Chen, H. et al.，J. Immunol. 175 :591-598 (2005)非专利文献6 :Zhou, Μ. et al.，J. Immunol. 177 :2138-2145(2006)
技术实现思路
专利技术所要解决的课题迄今为止，已有利用编码刺突蛋白的DNA疫苗来诱导病毒中和抗体的报道(非专利文献3)。有效的防御反应需要体液免疫和细胞免疫，在涉及SARS冠状病毒的领域中，与体液免疫相比，细胞免疫的研究尚未取得进展。细胞免疫中对于病毒防御发挥重要作用的是细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymph0Cyte、CTL)，SARS冠状病毒特异性CTL活性的调控可能成为针对SARS冠状病毒的新的治疗方法。从该观点出发，希望鉴定SARS冠状病毒蛋白中抗原性强的CTL表位肽。作为SARS冠状病毒特异性的CTL表位肽，到目前为止已经鉴定了几种来自作为结构蛋白的刺突蛋白的部分肽(非专利文献4 6)。但是，关于来自非结构蛋白的CTL表位肽，目前还没有任何报道。本专利技术的目的在于提供SARS冠状病毒的新的CTL表位肽。更具体而言，本专利技术的目的在于提供包含来自SARS冠状病毒ppla蛋白的新的CTL表位的肽、肽结合核糖体和抗原呈递细胞。另外，本专利技术的目的还在于提供以该肽、肽结合核糖体或抗原呈递细胞为有效成分的SARS冠状病毒特异性的HLA-A2限制性CTL的诱导剂、用于治疗或预防SARS冠状病毒感染的疫苗等。解决课题所采用的手段为了鉴定迄今尚未报道过的来自SARS冠状病毒的CTL表位，本专利技术人进行了以下的研究。首先，着眼于SARS冠状病毒的非结构蛋白ppla蛋白，从预测的表位候选肽中选择 30种肽。然后，确认了肽对作为MHC I类分子的HLA-A2分子具有结合亲和力，并发现了表位候选肽中特别有9种肽具有显著的CTL诱导活性。进而，通过用包含肽的肽结合核糖体进行免疫，可知可诱导CTL以及在体内活化CTL应答。基于上述见解，本专利技术人使提供包含来自SARS冠状病毒ppla蛋白的新的CTL表位的肽成为可能，从而完成了本专利技术。即，本专利技术提供一种肽，其包含选自由序列号10、11、12、13、15、17、18、23和对组成的组中的氨基酸序列。另外，本专利技术的肽优选包含选自由序列号10、12、15、17和对组成的组中的氨基酸序列，更优选包含序列号M的氨基酸序列。本专利技术的肽的特征在于，其为包含SARS冠状病毒特异性的细胞毒性T细胞表位的肽，是包含HLA-A2限制性细胞毒性T 细胞表位的肽。本专利技术提供一种肽结合核糖体，其是在核糖体的表面结合有肽的肽结合核糖体， 其中，核糖体含有磷脂和稳定剂，所述磷脂包含具有ι个不饱和键的碳原子数为14 M的酰基或具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的烃基；肽为选自上述肽中的至少1种。上述磷脂优选为包含具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的酰基的磷脂，更优选为具有油酰基的磷脂。另外，上述磷脂优选为选自二酰基磷脂酰丝氨酸、二酰基磷脂酰甘油、二酰基磷脂酸、二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、琥珀酰亚胺基-二酰基磷脂酰乙醇胺和马来酰亚胺-二酰基磷脂酰乙醇胺中的至少1种。通过使核糖体中所含的磷脂具备这样的构成，能够有效地增强用于杀伤病原体感染细胞的CTL，从而能够预防、治疗感染症。上述稳定剂优选为胆固醇。通过该构成，能够使上述核糖体更稳定。上述肽优选结合在上述核糖体所含的磷脂上。由此，能够将肽呈递到核糖体表面， 从而能够更有效地诱导SARS冠状病毒特异性的CTL。另外，本专利技术的肽结合核糖体中，优选核糖体具有以下的组成。(A)包含具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的酰基或具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的烃基的磷脂1 99. 8摩尔％ ；(B)稳定剂:0· 2 75摩尔%。另外，本专利技术的肽结合核糖体优选以下的组成。(I)包含具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的酰基或具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的烃基的酸性磷脂1 85摩尔％ ；(II)包含具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的酰基或具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的烃基的中性磷脂0. 01 80摩尔％ ；(III)结合有选自上述肽中的至少1种的、包含具有1个不饱和键的碳原子数为 14 M的酰基或具有1个不饱和键的碳原子数为14 M的烃基的磷脂0. 2 80摩尔％ ；(IV)稳定剂0. 2 75摩尔%。本专利技术提供一种抗原呈递细胞，其是通过使表达细胞表面抗原HLA-A2的细胞在体外与选自上述肽中的至少1种接触而制备的。上述细胞优选为自体来源的细胞，优选为同种来源的细胞。另外，本专利技术还提供一种SARS冠状病毒特异性的HLA-A2限制性CTL的诱导剂，其含有选自上述肽中的至少1种、上述肽结合核糖体或上述抗原呈递细胞作为有效成分。本专利技术提供一种用于预防SARS冠状病毒感染的疫苗，其含有选自上述肽中的至少1种、上述肽结合核糖体或上述抗原呈递细胞作为有效成分。此外，本专利技术提供对需要提供针对SARS冠状病毒的免疫性的对象提供免疫性的方法，其中，包括对上述对象给予选自上述肽中的至少1种、上述肽结合核糖体或上述抗原呈递细胞。本专利技术提供对需要提供针对SARS冠状病毒的免疫性的对象提供免疫性的方法， 其中，包括从上述对象采集细胞，使细胞在体外与选自上述肽中的至少1种接触而制备抗原呈递细胞，将抗原呈递细胞回输给上述对象。上述细胞优选为淋巴系单核细本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种肽，其包含选自由序列号１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８、２３和２４组成的组中的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：松井政则，
申请(专利权)人：日油株式会社，
类型：发明
国别省市：JP