【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及检测对检测体核酸的标的序列进行扩增时显示反应体系的扩增性能 的对照的方法及其用途。具体而言，涉及使用上述对照的检测方法的核酸扩增方法和解链 曲线分析方法，以及使用这些方法的对照检测用试剂。
技术介绍
近年来，在基因分析中，分析由标的序列和探针形成的双链核酸的解链温度(Tm melting temperature)的方法正在被实用化。由于该方法通过例如Tm分析或者上述双链 的解链曲线分析而进行，因此也称为解链曲线分析。根据该方法，能够检测例如标的序列的 扩增的有无、上述标的序列内的目的多态性。上述扩增的有无，例如，能够如下操作而检测。首先，在能够与上述标的序列杂交 的引物的存在下，对检测体核酸中的上述标的序列进行扩增，之后，使上述标的序列的扩增 产物与上述引物杂交。然后，对上述杂交形成体实施加热处理，将伴随温度上升的杂交的解 离(解链)作为吸光度等信号值检出，测定显示较大的信号变动的Tm值(测定值)。另外， 对上述标的序列和上述引物的杂交形成体，预先求出Tm值(评价基准值)。这样，如果测定 值与评价基准值为同等程度，则能够判断上述标的序列发生了扩增...
【技术保护点】
一种对照检测方法，检测在反应体系中对检测体核酸的标的序列进行扩增时显示所述反应体系的扩增性能的对照，其特征在于： 所述对照是显示反应体系中发生扩增反应的阳性对照和显示反应体系中混入不需要的核酸的阴性对照， 所述反应体系中含有引物、检测用探针和对照用模板核酸， 所述引物是能够对所述标的序列进行扩增的引物， 所述检测用探针是能够与所述标的序列杂交的探针， 所述对照用模板核酸能够利用所述引物进行扩增， 利用所述引物扩增的所述对照用模板核酸的扩增区域中，所述检测用探针能够进行杂交， 所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Ｔｍ值（Ｔｍ↓［Ｃ］）是与所述标的序列和...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP2008-3201682008年12月16日1.一种对照检测方法，检测在反应体系中对检测体核酸的标的序列进行扩增时显示所 述反应体系的扩增性能的对照，其特征在于所述对照是显示反应体系中发生扩增反应的阳性对照和显示反应体系中混入不需要 的核酸的阴性对照，所述反应体系中含有引物、检测用探针和对照用模板核酸， 所述引物是能够对所述标的序列进行扩增的引物， 所述检测用探针是能够与所述标的序列杂交的探针， 所述对照用模板核酸能够利用所述引物进行扩增，利用所述引物扩增的所述对照用模板核酸的扩增区域中，所述检测用探针能够进行杂、-父，所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tmc)是与所述标的序列 和所述检测用探针的Tm值(TmA)不同的值，所述对照检测方法包括下述(al) (a3)工序，在一个反应体系中检测所述阳性对照 和所述阴性对照(al)扩增工序，在所述反应体系中，使用所述引物，进行所述对照用模板核酸的扩增， (a2)分析工序，使用所述(al)工序的所述反应体系，在所述检测用探针的存在下，进 行解链曲线分析，(a3)判断工序，通过所述解链曲线中的峰，判断所述阳性对照和所述阴性对照分别为 阳性还是阴性。2.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于 所述(a3)工序为，在所述解链曲线中，当所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tm。)存在峰时，判断所 述阳性对照为阳性，当所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tm。)不存在峰时，判断 所述阳性对照为阴性，当所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tm。)以外不存在峰时， 判断所述阴性对照为阴性，当所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tm。)以外存在峰时，判 断所述阴性对照为阳性。3.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸中，其扩增区域中所述检测用探针的杂交区域的长度是与所述标 的序列中所述检测用探针的杂交区域的长度不同的长度。4.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于所述检测用探针是与所述标的序列的规定区域互补的碱基序列，所述对照用模板核酸在其扩增区域中具有能够与所述检测用探针部分杂交的碱基序列。5.如权利要求4所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸在其扩增区域中具有与所述标的序列中的所述检测用探针的杂交区域在5'侧和3'侧的至少一侧不同的碱基序列。6.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于所述检测用探针是与所述标的序列部分互补的碱基序列，所述对照用模板核酸在其扩增区域具有与所述检测用探针互补的碱基序列。7.如权利要求6所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸在其扩增区域具有与所述标的序列中的所述检测用探针的杂交 区域相同的碱基序列，并且，与其相邻，具有与所述标的序列中的所述杂交区域的5'侧和 3'侧的至少一侧邻接的区域不同的碱基序列。8.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸中，其扩增区域中所述检测用探针的杂交区域的碱基序列是与所 述标的序列中所述检测用探针的杂交区域的碱基序列的相同性低于100%的序列。9.如权利要求8所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸的所述杂交区域和所述检测用探针的互补性，与所述标的核酸的 所述检测用探针的杂交区域和所述检测用探针的互补性不同。10.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于 所述标的序列含有显示多态性的标的部位，所述检测用探针含有与所述标的序列中含有所述标的部位的区域互补的碱基序列。11.如权利要求10所述的对照检测方法，其特征在于所述检测用探针含有与所述标的序列中含有突变型的所述标的部位的区域互补的碱 基序列，或者，含有与所述标的序列中含有野生型的所述标的部位的区域互补的碱基序列。12.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于所述对照用模板核酸的扩增区域和所述检测用探针的Tm值(Tm。)，与所述标的序列和 所述检测用探针的Tm值(TmA)的差为1 50°C。13.如权利要求1所述的对照检测方法，其特征在于 所述检测用探针是具有标记物质的标记探针。14.如权利要求13所述的对照检测方法，其特征在于 所述标记物质是荧光物质。15.一种对反应体系中检测体核酸的标的序列进行扩增的方法，其特征在于 包括下述(A)工序和(B)工序，(A)检测工序，利用权利要求1所述的对照检测方法，检测在含有所述对照用模板核 酸、所述引物和所述检测用探针的反应体系中显示扩增性能的对照，(B)扩增工序，包括下述(bl)工序，对所述检测体核酸的标的序列进行扩增，(bl)扩增工序，在含有所述检测体核酸、所述引物和所述检测用探针的反应体系中，使 用所述引物，对所述检测体核酸的标的序列进行扩增。16.如权利要求15所述的扩增方法，其特征在于同时进行所述(A)工序中的下述(al)工序和所述(B)工序中的所述(bl)工序， (al)在所述反应体系中，使用所述引物，进行所述对照用模板核酸的扩增。17.如权利要求15所述的扩增方法，其特征在于 所述(B)工序还包括下述( )工序和(b!3)工序，(b2)分析工序，使用所述(bl)工序的所述反应体系，在所述检测用探针的存在下，进 行解链曲线分析，(b3)判断工序，通过所述解链曲线中的峰，判断所述检测体核酸的标的序列有无扩增。18.如权利要求17所述的扩增方法，其特征在于 所述(b3)工序中，当所述标的序列和所述检测用探针的Tm值(...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。