人抗凝血酶Ⅲ转基因羊的外源基因漂移风险的分析方法技术

人抗凝血酶III转基因羊的外源基因漂移风险的分析方法。包括如下步骤：引物及Taqman探针设计，血液基因组DNA的制备，ATIII基因的扩增，ATIII基因的克隆，荧光定量PCR检测和敏感性评价及定量分析。为了能够灵敏的检测到微量的ATIII基因，本研究建立了灵敏、特异的实时荧光定量PCR检测人ATIIII基因的技术方法，最低能检测到1copy的ATIII基因，并且检测特异性高。在此基础上，开展了抗凝血酶III转基因羊环境安全性评估的初步研究。完成了与ATIII转基因羊密切接触的同种和异种动物血液基因组中ATIII基因的检测工作(共57个样本)，结果表明人ATIII基因没有在转基因羊和非转基因羊及其它动物间发生漂移，提示转基因羊对于环境是安全的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于对转基因动物环境安全的检测和评价领域，具体涉及一种人抗凝血酶 III转基因羊的外源基因漂移风险的分析方法。
技术介绍
随着生物技术的快速发展，转基因动物研究的不断深入和加快，转基因育种成为培养新品种的重要途径，商业化转基因动物即将面世的同时，与转基因相伴而生的潜在的安全问题已引起世界各国的关注和重视。转基因动物是通过基因工程技术使生物遗传信息发生了转移、替换、融合和表达的遗传工程体，由于外源基因的插入，打破了原有的育种规律，改变了物种多样性局面，可能发生潜在的生物环境安全问题，造成重大经济损失， 对人类生存造成威胁。因此，对转基因动物环境安全的检测和评价有利于保证人类健康和生态环境安全、促进转基因动物相关技术的快速健康发展。基因漂移是指转基因生物中转入的外来基因，转移到相邻的其他生物之中，从而改变其他生物的基因组成。转基因植物发生基因漂移可能引起的生态环境安全性问题已经引起广泛关注，而转基因动物发生基因漂移的可能性一直没有被重视。因而研究转基因动物发生基因漂移的可能性对于评价转基因动物环境安全性具有重要的意义。本研究建立了实时荧光定量PCR技术检测抗凝血酶III的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种人抗凝血酶ＩＩＩ转基因羊的外源基因漂移风险的分析方法，其特征是包括如下步骤：引物及Ｔａｑｍａｎ探针设计，血液基因组ＤＮＡ的制备，ＡＴＩＩＩ基因的扩增，ＡＴＩＩＩ基因的克隆，荧光定量ＰＣＲ检测和敏感性评价及定量分析；其中，（１）引物及Ｔａｑｍａｎ探针设计①利用Ｐｒｉｍｅｒ　Ｐｒｉｍｅｒ　５．０软件分析人ＡＴＩＩＩ基因的序列ＮＭ＿０００４８８，设计并合成用于构建标准质粒的人ＡＴＩＩＩ特异性引物Ｆ５’－ｇｔｇａｔａｇｇａａｃｔｇｔａａｃｃｔ－３’；Ｒ：５’－ｃｇｇｃｃａｇｃａａｔｃａｃａａｃａｇ－３’，②利用Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司的Ｐｒｉｍｅｒ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　３．０软件设...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：袁三平，顾玉超，邹贤刚，赵雅琳，
申请(专利权)人：青岛森淼实业有限公司，
类型：发明
国别省市：95