用于检测苋菜红的方法及酶联免疫试剂盒技术

本发明专利技术公开了用于检测苋菜红的方法及酶联免疫试剂盒。本发明专利技术所提供的检测苋菜红的酶联免疫试剂盒，包括苋菜红半抗原和苋菜红的特异性抗体；所述特异性抗体为所述苋菜红的多克隆抗体或单克隆抗体。本试剂盒中采用高特异性的苋菜红单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性，实验结果表明，本试剂盒具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点；本试剂盒的主要试剂都采用工作液形式，使用方便，成本低廉。用本发明专利技术试剂盒检测苋菜红的方法，操作简便，对样品的前处理要求低，能同时快速检测大批量样品。因此，利用本发明专利技术酶联免疫试剂盒进行检测的方法，能够进行现场监控且适合大量样品的定性和定量筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测苋菜红的方法及酶联免疫试剂盒。
技术介绍
苋菜红是目前广泛使用的合成染料，几乎每一种偏红色或偏棕色的加工食品都使用过。苋菜红的急性毒性较低，但具有胚胎毒性，可致畸胎发生。此外在其使用上的争议主要在致癌性方面，本品1968年报告有致癌性，1972年JECFA (食品添加剂专家联合委员)将 ADI (容许日摄入量)从0 1.5mg/kg体重修改为暂定ADI 0 0. 7mg/kg体重。1976年美国禁用。1978年和1982年JECFA两次将其暂定ADI延期。1984年再次评价时制定本ADI。 此外，我国批准的苋菜红使用范围限于饮料、配制酒、糖果、糕点和青梅等。禁止用于肉类、 鱼类、水果及其制品等。然而市场上仍然存在滥用苋菜红合成色素的违法行为并且有日益扩展趋势，还存在一些声称是用天然色素而实际用合成色素欺骗消费者的不法商贩。这些现象屡见不鲜，逐渐也成为社会关注的焦点。食用合成色素的测定有纸上层析法、分光光度法、极谱法、HPLC法等。目前，我国检测食品中合成色素的方法为中华人民共和国国家标准GB/T 5009135-2003食品中合成着色剂的测定，是用高效液相色谱法，为实验室大型仪器设备，分析时间长，检测过程繁琐，价格昂贵，不适合现场卫生监督检测，无法及时地保障消费者权益，满足卫生监督的需要。而酶联免疫检测技术灵敏度高、特异性好、操作简单成本低、一次性检测样本数量多、耗时少， 有利于现场快速检测样品中的合成色素苋菜红。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种检测苋菜红的酶联免疫试剂盒。本专利技术所提供的检测苋菜红的酶联免疫试剂盒，包括苋菜红半抗原和苋菜红的特异性抗体；所述特异性抗体为苋菜红的多克隆抗体或单克隆抗体；其中，所述半抗原和苋菜红的特异性抗体可以以下述任一种形式存在1)将苋菜红半抗原与载体蛋白进行偶联，得到苋菜红半抗原与载体蛋白的偶联物 (以下称为半抗原-载体蛋白偶联物)，将其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。所述试剂盒还可以既包括半抗原和苋菜红的特异性抗体，又包括抗抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；其中，所述半抗原和抗抗体以下述任一形式存在1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原-载体蛋白偶联物，将其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；2)所述抗抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。所述苋菜红多克隆抗体或苋菜红单克隆抗体，均是用所述苋菜红半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白可为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白等。所述单克隆抗体是通过杂交瘤细胞技术得到的。所述苋菜红多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。为了方便检测，所述试剂盒还可包括酶标板，当所述苋菜红特异性抗体或抗抗体用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述苋菜红半抗原或苋菜红半抗原-载体蛋白偶联物；当所述半抗原用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述苋菜红特异性抗体或所述抗抗体。为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还可包括苋菜红标准品溶液、 显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液中的至少一种；其中，所述浓缩洗涤液为pH值为6-9、含有在所述浓缩洗涤液中的终浓度为 0. 02-0. 05% (质量百分含量)叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为1.0-2.0% (质量百分含量)吐温-20、0. 1-0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有在所述浓缩复溶液中的终浓度为5-10% (质量百分含量)的DMS0、PH为6-8、0. 1-0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液。所述酶标记中所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液，所述终止液为l_2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液。当标记为碱性磷酸酶时，所述显色液为硝基磷酸盐缓冲液，终止液为l-2mol/L氢氧化钠溶液。所述浓缩洗涤液具体可以为pH值为7. 4、含有在所述浓缩洗涤液中的终浓度 0. 03%防腐剂、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为1.50%的吐温-20、0. 2mol/L磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液具体可以为含有在所述浓缩复溶液中的终浓度为8%的DMSO、pH为 7. 4,0. 2mol/L磷酸盐缓冲液；所述底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液，所述终止液为2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液。苋菜红是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免疫应答，必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。将苋菜红半抗原与牛血清蛋白采用碳化二亚胺法进行偶联得到免疫原，苋菜红半抗原与载体蛋白的比例过低或过高都对免疫不利，半抗原与牛血清蛋白的结合摩尔比为23-28 1较合适。在制备包被原时，苋菜红半抗原与所述载体蛋白的摩尔配比为26 1比较合适。制作包被有包被原的酶标板时，所述包被缓冲液可以为PH值为9. 0-9. 6,0. 05mol/L碳酸盐缓冲液，封闭液为pH6_8，含有5%山羊血清、10g/L酪蛋白的0. 02mol/L磷酸盐缓冲液。本专利技术的另一个目的是提供一种检测苋菜红的方法。本专利技术所提供的一种检测样品中的苋菜红含量的方法，包括以下步骤1)用苋菜红特异性抗体包被酶标板；2)加入标准品或待测样品以及酶标记的苋菜红半抗原，孵育，洗涤；3)加入底物显色液显色；4)加入反应终止液终止反应；5)通过比较苋菜红标准品与待测样品的颜色，推测出待测样品中的苋菜红含量； 或者，测定各孔的吸光度，建立苋菜红浓度相对于吸光度的标准曲线，并根据该标准曲线由待测样品的吸光度推算出待测样品中的苋菜红含量。本专利技术所提供的另一种检测样品中的苋菜红含量的方法，包括以下步骤1)用苋菜红半抗原或苋菜红半抗原-载体蛋白偶联物包被酶标板；2)加入苋菜红标准品或待测样品；3)加入苋菜红特异性抗体，孵育，洗涤；4)加入酶标记的抗抗体，孵育，洗涤；5)加入底物显色液显色；6)加入反应终止液终止反应；7)通过比较苋菜红标准品与待测样品的颜色，推测出待测样品中的苋菜红含量； 或者，测定各孔的吸光度，建立苋菜红浓度相对于吸光度的标准曲线，并根据该标准曲线由待测样品的吸光度推算出待测样品中的苋菜红含量。在本专利技术所提供的检测样品中的苋菜红含量的方法，还可以包括样品前处理步骤当所述样品为液体食品时，所述样品前处理方法为将液体食品除去气体，将样本与样本稀释液以体积比1 3-8混合，取混合后样品用于分析；当所述样品为固体汤类时，所述样品前处理方法为将待检物与样本稀释液以质量体积比为1 10-15，再加入一定体积的正己烷脱脂，离心，取上清检测。当所述样品为果酱时，所述样品前处理方法为将待测物与样本稀释液以体积比为1 10-15，混勻，离心后取上清检测。本专利技术检测苋菜红的酶联免疫试剂盒采用直接竞争及间接竞争ELISA方法定性或定量检测样品中苋菜红的含量。本试剂盒中采用高特异性的苋菜红单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性。实验结果表明，本试剂盒具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点；本试剂盒的主要试本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种检测苋菜红的酶联免疫试剂盒，包括苋菜红半抗原和苋菜红的特异性抗体；所述特异性抗体为苋菜红的多克隆抗体或单克隆抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张波，王飞，郗日沫，王鹏，易建，张霞，薛秋艳，徐德顺，
申请(专利权)人：天津百鸥瑞达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：12