本发明专利技术涉及生物和医学检测领域，具体是一种检测癌或恶性肿瘤组织中JWA表达的试剂盒。一种检测癌或恶性肿瘤组织中JWA表达的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括一抗、通用型二抗-多聚体溶液、显色剂、封闭液。本发明专利技术提供一种试剂盒，用于检测肿瘤组织中JWA蛋白的表达水平，结果可以作为判断肿瘤患者预后和制定个体化治疗方案的重要依据，即检测肿瘤组织中JWA的表达水平，根据JWA表达水平协助确定治疗方案。显而易见，本发明专利技术内容具有十分重要的原创性意义和应用价值。癌组织JWA表达水平可以作为衡量肿瘤恶性程度、制定化疗方案、判断预后的重要分子标志物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物和医学检测领域，具体是一种检测癌或恶性肿瘤组织中JWA表达的试剂盒。
技术介绍
恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病，已成为死因分类构成中的首位。随着现代生物医学技术的发展，人们对恶性肿瘤发生发展规律的认识日益深入，一系列与恶性肿瘤相关的基因被发现，随着研究的深入这些基因的功能逐渐得到阐明，因此，以基因诊断和基因治疗为核心的新的恶性肿瘤治疗策略也应运而生。JffA,即ARL6IP5基因，是专利技术人周建伟1998年率先从人气管支气管上皮细胞构建的cDNA文库中克隆的与受维甲酸诱导调节细胞分化新基因(LOCUS :NM_006407 ； ACCESSION :NM_006407)。JWA 在 GenBank 中还有如下同名基因addicsin ；DERPll ； GTRAP3-18 ；hp22 ；HSPCI27 ； jmx ；PRAF3。JWA 基因全长 cDNA 序列为 2107bp，其开放阅读框序列为564bp，共编码188个氨基酸。近十多年来，专利技术人围绕JWA基因及其编码蛋白的结构功能开展研究工作，取得了一系列原创性研究成果。专利技术人发现JWA基因是新的抑癌基因，其表达产物JWA蛋白具有抑制肿瘤细胞粘附、浸润、转移和抑制肿瘤血管生长等功能。JWA在大多数人正常组织中均有较高水平的表达，然而在大多数恶性肿瘤，如胃癌、肝癌、食道癌、结肠癌、黑色素瘤、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌等组织细胞中表达较低，而且表达水平高低与肿瘤恶性表型呈负相关，即JWA表达水平越低，肿瘤细胞的恶性程度越高。研究发现(1)当增加人黑色素瘤A375细胞和小鼠黑色素瘤B16细胞中JWA 表达后，在细胞水平和动物整体水平分别观察到这两种细胞的侵袭和转移能力显著减弱； (2)采用组织芯片和免疫组化方法检测分析了三个独立的胃癌手术患者队列及其病理组织 (共1257例)以及314例肝癌患者队列及其病理组织中JWA的表达情况，以及与肿瘤分期分型、预后、化疗效果之间的关系。结果显示胃癌和肝癌组织JWA蛋白表达水平均显著低于癌旁组织，癌组织中JWA表达水平与患者临床病理特征和预后等呈显著负相关。肝癌和胃癌组织中JWA低表达者，术后生存期较JWA高表达者明显缩短；胃癌组织中JWA低表达者若接受5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙和奥沙利钼联合化疗方案，其预后明显好于仅接受手术或手术并使用其它化疗方案者；如果胃癌组织中JWA高表达，则单纯手术病人与手术后再接受化疗者相比，预后无统计学差异。换言之，胃癌组织中如果JWA高表达，患者仅需手术治疗而不一定需要化疗，或化疗对延长患者生命并无意义。综上所述，JffA在多种癌组织的表达低于癌旁正常组织，JffA表达降低在多种肿瘤的发生和发展过程中起重要作用。在临床实践中，目前对恶性肿瘤的治疗方法主要包括手术、化疗、放疗、中医药治疗和生物治疗等，通常使用综合治疗方案。患同一种肿瘤，如临床病理特征相似，则常常采用同样的或相似治疗方案。事实上，即使临床病理特征相似的不同患者对同样的治疗方案的反应和效果可能完全不同，其中有些方案也许根本不适合用于某个或某些患者，但迄今为止尚无特别可靠的方法判定一个恶性肿瘤患者是否需要接受某种治疗即个体化治疗。本专利技术针对上述问题，提供一种试剂盒能简单方便检测恶性肿瘤组织中JWA表达水平，从而帮助判断恶性肿瘤患者预后以及手术后是否需要接受某种特殊治疗即个体化治疗。
技术实现思路
恶性肿瘤组织中JWA表达水平作为判断患者预后和制定个体化治疗方案的分子标志物。本专利技术目的在于提供快速检测恶性肿瘤组织中JWA表达的试剂盒，为临床检测提供便利，指导临床上对肝癌、胃癌等肿瘤患者的诊断和治疗。一种检测癌或恶性肿瘤组织中JWA表达的试剂盒，其特征在于优化了试剂盒中各种试剂的配置、浓度和用量，包括封闭液、一抗、二抗-多聚体溶液、显色剂。其中所述的一抗为小鼠抗人JWA单克隆抗体(1 μ g/μ 1;1 750稀释)或兔抗人 JWA多克隆抗体(1 800) ；二抗-多聚体溶液为鼠兔通用型二抗-辣根过氧化物酶多聚体溶液；封闭液为羊血清或5%胎牛血清白蛋白溶液或任何与二抗同一种族来源的正常血清；显色剂为DAB (临时配制)。本试剂盒中所述的小鼠抗人JWA单克隆或兔抗人多克隆抗体是本专利技术人的专利产品(申请(专利)号:98111422. 9公开号:CN1208733，公开日期=1999. 02. 24) 本领域技术员已知，以上组分仅是示意性的，所述封闭液可以是羊血清或BSA ；二抗是鼠兔通用型二抗-辣根过氧化物酶多聚体溶液；显色试剂可以根据二抗所连接的酶选择 DAB 或 AEC。本试剂盒可以用来检测各种肿瘤组织中JWA蛋白的表达水平和在细胞内分布。通常情况下，JWA主要分布在细胞浆中，少量可分布在细胞核。有益效果1、本专利技术提供一种试剂盒，用于检测肿瘤组织中JWA蛋白的表达水平，结果可以作为判断肿瘤患者预后和制定个体化治疗方案的重要依据，即检测肿瘤组织中JWA的表达水平，根据JWA表达水平协助确定治疗方案。显而易见，本
技术实现思路
具有十分重要的原创性意义和应用价值。癌组织JWA表达水平可以作为衡量肿瘤恶性程度、制定化疗方案、判断预后的重要分子标志物。专利技术人对314例肝细胞肝癌患者术后生存随访研究发现，肝癌组织中JWA蛋白高表达者中位生存时间是Iio个月，而JWA低表达者仅为51个月，差别具有统计学意义(P < 0. 001)。对三个独立的胃癌患者队列(累计1257例)手术后生存随访以及胃癌组织和癌旁组织中JWA及相关蛋白表达的研究显示，胃癌组织中JWA低表达患者术后中位生存时间为22个月，而胃癌组织中JWA高表达患者术后中位生存时间为88个月，换言之，胃癌组织中JWA高表达者术后中位生存时间比JWA低表达者增加66个月，差别具有非常显著的统计学意义(P < 0. 001)。进一步研究发现，胃癌组织中JWA低表达者，如手术后结合以5-氟尿嘧啶和奥沙利钼为主的辅助化疗，则术后生存时间可明显延长(P = 0. 04)，然而，胃癌组织中JWA高表达者，在手术后使用辅助化疗则对患者术后生存无明显影响。因此，临床上对于每一例胃癌手术患者，可以用本试剂盒检测其胃癌组织中JWA表达水平预测其预后，并直接指导其术后辅助化疗方案的制定。2，由于多种恶性肿瘤有相似或相同的发生发展机制，研究表明JWA表达水平高低与多种恶性肿瘤细胞的恶性表型呈负相关，因此，检测肿瘤组织中JWA表达水平不仅可用于指导预测胃癌患者预后和术后辅助治疗方案，也适用于其他肿瘤，如肝癌、食道癌、结肠癌、黑色素瘤、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌等。附图说明图1为胃癌和癌旁组织中JWA表达的免疫组化染色结果；其中A 组织芯片中胃癌和癌旁组织免疫组化染色，N-癌旁组织，C-胃癌组织；上部分X 40，下部分X 200。B 105例胃癌和癌旁组织配对标本的JWA表达水平N-C差值。图2为909例不同JWA表达水平胃癌患者单纯手术后生存情况；其中JWAhigh-指免疫组化评分(IRS)8_12分者，JffA low-指免疫组化评分 (IRS) 0-6 分者。图3为胃癌组织中JWA低表达者单纯接受手术与手术+辅助化疗者生存情况比较，其中S-单纯接受手术本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测癌或恶性肿瘤组织中ＪＷＡ表达的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括一抗、通用型二抗－多聚体溶液、显色剂、封闭液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周建伟，陈颜夙，张建兵，李爱萍，谈永飞，强福林，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：84
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